长链非编码RNA LNC01309对人肝癌细胞增殖和迁移能力的影响及作用机制

目的 探讨长链非编码RNA（lncRNA）LNC01309对人肝癌细胞增殖和迁移能力的影响及作用机制。方法 收集2018年2月—2019年6月在解放军总医院第六医学中心手术治疗的12例肝细胞癌（以下简称肝癌）患者标本及对应的癌旁组织,采用荧光定量PCR方法检测LNC01309的相对表达量。利用荧光定量PCR法检测LNC01309在人肝癌细胞系（Hep G2、SNU-398和Hep 3B）和人永生化正常肝细胞系（THLE-2）中的表达水平。在肝癌细胞Hep G2中过表达LNC01309,分为质粒对照组（pEXP-control）和过表达组（pEXP-LNC01309）。采用CCK-8检测各组细胞增殖变化,采用划痕愈合试验和Transwell试验检测各组细胞迁移能力。利用RNA免疫共沉淀试验检测LNC01309与RBM38的相互作用（分组为IgG组和RBM38抗体组）。利用放线菌酮追踪分析检测LNC01309对于RBM38蛋白稳定性的影响。在肝癌细胞Hep G2中过表达RBM38进行回复试验,采用CCK-8试验、划痕愈合试验和Transwell试验,分别检测细胞增殖和迁移能力的变化。计量资...     

缺氧诱导基因2诱导甘油三酯堆积稳态失衡促进肝癌发生的研究

目的 探讨缺氧诱导基因2（hypoxia-inducible gene 2, HIG2）在肝癌发生发展中的作用和意义。方法 正常肝细胞（QZG）、肝癌细胞系（HepG2、SMMC7721）常规培养,采用Western Blot 法检测HIG2蛋白的表达水平;通过甘油三酯检测试剂盒检测每6×106个正常肝细胞系（QZG）和肝癌细胞系（HepG2、SMMC7721）甘油三酯含量;使用涂有Matrigel的聚碳酸酯膜的Transwell小室测定细胞侵袭和迁移能力,划痕实验比较转染了对照质粒以及转染了HIG2过表达质粒的HepG2细胞的细胞迁移率;实时定量荧光PCR分析30例肝癌组织和对应肝癌癌旁组织中HIG2蛋白的表达;免疫组织化学方法检测肝癌癌旁组织和肝癌组织中HIG2蛋白的表达及部位。结果 肝癌细胞系HepG2和SMMC7721比正常肝细胞系QZG中HIG2蛋白水平增加（P<0.05）,同时肝癌细胞系HepG2和SMMC7721甘油三酯含量[（16.94±0.33）mg/dL,（16.04±1.02）mg/dL]均显著高于正常肝细胞系QZG[（4.90±0.39）mg/dL],差异比较具有统计学意义（P<0.05）;与转染对照质粒组比较,HIG2的过表达质粒显著增加了HepG2细胞的迁移率和划痕愈合百分比（P<0.05）;实时定量荧光PCR结果显示与肝癌癌旁组织比较,肝癌组织中HIG2的丰度增加（P<0.05）;Western Blot结果显示与肝癌癌旁组织比较,肝癌组织中HIG2蛋白水平增加（P<0.05）;免疫组化显示HIG2在肝癌组织中高表达且主要在胞浆中。结论 HIG2蛋白可以显著诱导肝癌细胞的甘油三酯的堆积,同时促进了肝癌细胞的侵袭和转移潜力。