登革4型病毒5′非编码区SLB元件对病毒复制和翻译的调控作用

目的探讨登革4型病毒5′非编码区SLB元件对病毒复制和翻译的调控作用。方法首先通过mfold3.2软件对登革4型病毒5′端RNA二级结构进行预测,确定了3个突变位点：SLB1,缺失位于短茎环82-87位5′UAR环化序列,并破坏其保守茎环结构;SLB2,在次环引入突变破坏其环状结构（M77G/C）;SLB3,突变仅涉及核苷酸,不破坏该次环二级结构（M77-78AG/GA）。然后在含有海肾荧光素酶（Renilla Luciferase,R·luc）报告基因的复制子（DEN-R·luc2A-RP）基础上,利用重叠PCR构建上述突变体。将突变体（包括相关的阳性和阴性对照复制子）分别线性化并体外转录成RNA后,取等量各转录体RNA,以脂质体法分别转染BHK-21细胞。通过间接免疫荧光（IFA）、RT-PCR、R.luc报告基因技术和实时定量RT-PCR对突变体的复制和翻译水平进行检测。结果SLB1突变体的翻译水平并未受到显著影响,但其复制水平出现显著下调。SLB2突变体的翻译水平亦未受到显著影响,但其复制水平受到完全抑制;SLB3突变体的复制和翻译水平均受到了完全抑制。结论登革4型病毒5′非编码区SLB元件对基因组RNA复制和翻译具有重要的调控作用。     

虫媒黄病毒复制子研究进展

复制子是在相应病毒基因组全长感染性克隆技术基础上,保留了病毒复制和翻译必需的全部顺式作用元件,其大部分结构蛋白基因缺失或由外源基因替代构建成的病毒亚基因组.黄病毒复制子转染细胞无细胞病变,在细胞内表达稳定,可筛选稳定表达复制子的细胞系,目前已广泛应用于病毒复制和翻译的分子机制、新型疫苗载体构建、抗病毒药物筛选等多个研究领域.本文综述了主要虫媒黄病毒复制子近年来的研究进展.     

颅脑外伤及其并发症的原因分析与诊治探讨

目的分析颅脑外伤合并视神经损伤的原因、损伤机制及临床表现。方法分析颅脑外伤合并视神经损伤10例临床资料。结果10例颅脑外伤损伤中位于前额部8例，颞部2例。颅底骨折5例，颅骨骨折6例，位于额骨4例，颞骨2例；身体其他部位骨折2例；硬膜外血肿3例，硬膜下血肿I例，弥漫性颅脑损伤1例，脑挫裂伤3例。10例患者均有不同程度的视力障碍及视野缺损或偏盲。结论治疗颅脑外伤，尤其是额部、颞部及上颌骨损伤时，一定要警惕视神经损伤的可能，早期诊断，仔细查体，掌握治疗视神经损伤的最佳时机。     

我院门诊不合理用药处方浅析

目的调查我院门诊不合理用药处方情况,并进行分析,提出相应的解决措施。方法从我院2008年1月～12月门诊药房处方中随机抽取12000张,对其中不合理用药处方进行统计分析。结果不合理用药处方共183张,占调查处方的1.53%。结论我院门诊处方用药合理性明显提高,但仍存在不合理用药的情况,我院医药工作者应共同提高业务能力,尽可能地减少不合理用药现象。     

大处方相关问题的探讨

本文探讨了大处方的相关问题,分析了大处方产生的原因及危害,并提出了遏制大处方的对策。相信在全社会的共同努力下,大处方问题一定能够得到有效解决。     

硬通道微创颅内血肿清除术治疗高血压脑出血29例临床分析

高血压脑出血是常见、多发病,死残率较高。我院自2001-09～2003-07施行硬通道微创颅内血肿清除术治疗高血压脑出血29例。现将手术时机、技巧要点讨论如下。1临床资料1.1一般资料本组29例,男19例,女10例:年龄39～80岁,平均55.4岁。入院时GGS评分,4分2例;6～8分12例;9～12分12例;     

衣壳蛋白缺失突变登革病毒的制备与鉴定

目的 制备登革2型病毒中国分离株(DEN2-43)的衣壳蛋白缺失突变病毒.方法 在DEN2-43株病毒感染性全长cDNA克隆的基础之上,利用融合PCR技术构建衣壳蛋白基因缺失的全长cDNA,将其线性化并体外转录成RNA后,经电穿孔法导入宿主细胞获得衣壳蛋白缺失突变病毒.结果 序列比对表明,所获得的恢复病毒带有与预期一致的缺失突变.结论 成功制备衣壳蛋白缺失突变病毒,为进一步研究衣壳蛋白基因突变对登革病毒生物学特性的影响奠定了基础.     

浅析我院门诊药房的药学服务

药学服务以患者方便、安全、满意为标准,通过药品调剂、用药咨询和用药指导,为患者提供药学知识和信息。药学服务可以达到减少药害、提高药物治疗质量、节省医药资源、降低医疗费用的积极效果。其具有高度专业性和技术性,包括药物咨询、指导合理用药、不良反应收集等。本文结合药师在门诊药房的具体工作实践,从门诊药房窗口药学服务的常见问题及应对措施,探讨如何做好门诊药房药学服务工作,以便我们更好地为患者服务。     

含有海肾萤光素酶报告基因的登革4型病毒亚基因组复制子的构建

目的:构建含有海肾萤光素酶(Renilla luciferase, R.luc)报告基因的登革4型病毒亚基因组复制子,为探讨病毒基因组中保守序列和元件在复制和翻译调控机制中的作用提供新的手段.方法:利用定点诱变PCR技术构建prM-E基因缺失的登革4型病毒亚基因组复制子(DENRP),用顺式水解酶元件(cis-acting hydrolase element,CHYSEL)技术将R.luc报告基因插入到DENRP缺失的结构基因区,构建含有R.luc报告基因的复制子(DEN-R.luc2A-RP).将构建的复制子线性化并体外转录成RNA后,经电穿孔转染BHK-21细胞,通过间接免疫荧光、RT-PCR和R.luc检测技术对复制子进行鉴定.结果:所构建的prM-E基因缺失的复制子和含有海肾萤光素酶报告基因的复制子,均可在BHK-21细胞中自主复制并稳定表达病毒特异蛋白.DEN-R.luc2A-RP可持续表达外源R.luc报告基因21 d,在转染后24~96 h R.luc荧光信号呈线性增强.在该区间进行实时检测可显示复制子复制和翻译水平的变化.结论:获得了两株可在BHK-21细胞中稳定表达的复制子,为进一步研究登革4型病毒复制和翻译机制奠定了基础.     

登革4型病毒基因组cHP发卡结构对病毒复制和翻译的调控作用

目的:探讨登革4型病毒C基因中保守的cHP发卡结构对病毒复制和翻译的调控作用.方法:首先在获得含有海肾荧光素酶(Renilla luciferase, R.luc)报告基因的复制子(DEN-R.luc2A-RP)基础上,利用重叠PCR构建cHP发卡结构系列突变体(cHP1～cHP6).将构建的突变体(包括相关的阳性和阴性对照复制子)分别线性化并体外转录成RNA后,取等量各转录体RNA,以脂质体法分别转染BHK-21细胞.通过间接免疫荧光(IFA)、RT-PCR、R.luc报告基因检测技术和实时定量RT-PCR对突变体的复制和翻译进行检测.结果:cHP发卡结构系列突变体均可在BHK-21细胞中复制并稳定表达病毒特异蛋白,在该发卡结构中引入缺失或突变对病毒早期翻译并无显著影响,但病毒RNA复制均显著下调.结论:cHP发卡结构在基因组RNA复制过程中可能具有重要的调控作用.