冻存人淋巴细胞凝集的成因分析

本文对长期冻存的人外周血淋巴细胞的细胞膜形态和功能变化及其与细胞凝集的关系进行了研究,并对凝集的成因作了分析,初步提出了降低凝集作用的综合措施. 采用含to劣二甲基亚矾和40}人AB型血清的RPMI 164。培养液作为冻存液,将淋巴细胞在液氮中冻存1年,复温后,检测其存活率,细胞凝集现象和细胞电泳速率,并观察了细胞表面超微结构的变化. 冻存淋巴细胞复苏后,部分细胞呈现凝集状态,这是由于细胞膜结构和功能受到损伤所致,表现在细胞表面净负电荷密度的降低,电泳率减缓,细胞轻度皱缩,膜表面微绒毛增粗,出现粗大的指状突起.二甲基亚讽是造成膜结构与功能变化的一个重要因素,在常温下更加明显,它具有较强的促凝集作用.此外,淋巴细胞悬液内混杂血小板,也是促进细胞凝集的因素.     

深低温冷冻家兔大脑后的显微和超微结构变化

本文采用液氮对家兔大脑皮层进行局部冷冻。用电镜和石蜡切片方法,对经过冷冻后的脑细胞的损伤过程进行了研究,将有助于阐明皮层细胞冷冻损伤的规律,也为脑外科冷冻治疗提供一定的实验依据。 一、材料和方法 家兔21只(健康成年,体重1.8到2.5公斤之间,下同)无菌术下,在左侧冠状缝后,取下约6×11毫米的颅骨片,不损伤硬脑膜,用YDZ-1型低温治疗器接触法冷冻兔左大脑半球,相当于Sawyer兔脑图谱P_1—P_2,L_5—L_6部位。冻头直径1.5毫米。冷冻3分钟,复回骨片,缝合后饲养,3只兔为一组,分别在冻后15分钟、1、3、7、14和21天处死。对照组也施行同样外科手术,但不冷冻皮层。然后内固定兔脑,石蜡切片,H.E.染色,光镜观察。     

家兔皮肤和横纹肌的冷冻损伤及其修复

本实验用液态氮制冷,以直径为6毫米的圆形冷冻头(-190℃),冷冻家兔皮肤和横纹肌3分钟,同时测量温度,实验结果表明,冰球平均直径分别为20毫米19毫米。在冰球内部存在着温度梯度,在冷冻后15分钟、1天、3天、7天、14天、28天、42天和70天,分别各处死2或3只家兔,作组织学切片观察,冷冻后3天,冷冻坏死最严重,28天时再生修复基本完成。和前文报道相比较,在同样的冷冻条件下,家兔肝脏的冷冻损伤要比皮肤和横纹肌严重。冷冻损伤后肝脏的修复最为明显。冷冻后70天肉眼观察,可见肝脏留有小的疤痕,但是皮肤和横肌纹留下的疤痕不明显。本研究为临床冷冻治疗提供了实验依据。     

冷冻对小鼠肿瘤细胞致死作用的研究

本文研究了不同温度的冷冻处理对小鼠肿瘤细胞的杀伤效应.小鼠 S180肉瘤匀浆细胞经过不同低温冷冻三分钟后立即升温,并接种到正常小鼠中,结果0—-196℃的各组冷冻处理均不能达到完全杀伤肿瘤细胞的效果.如连续冻融三次,则在经过-40—-196℃处理的各组细胞接种后均未在小鼠中产生肿瘤.同样,小鼠艾氏腹水癌的腹水,经过0—-196℃三分钟的冷冻处理,不能完全杀伤其肿瘤细胞;但经三次冻融,并降温到-140℃或更低,才能使其细胞完全失去活力.因此,不同种类的肿瘤细胞对冷冻的忍受能力是不同的.冻融三次要比一次对肿瘤细胞有更强的杀伤作用.     

N,N一二甲基甲酞胺对人淋巴细胞的低温保护作用带

本文报道了N,N·二甲基甲酸胺(DMF)对冻存人外周血淋巴细胞，具有底温保护作用.实验结果表明，淋巴细胞在含有lob DMF和40%人AB型血清的1640液内冻存40至90天后，获得很高的存活率，并且超微结构完整，细胞凝集也较少.虽然在室温时，DMF对淋巴细胞有一定的毒性，DNA合成能力有所降低，但仍是一种优良的细胞低温保护剂.     

冷冻对家兔肝脏的损伤及其修复

用6毫米的直径的圆形液氮制冷冷冻头(-190 ℃),对24 只家兔的肝左叶进行3分钟的冷冻.实验结果表明,冰球平均直径为21.4毫米.第1分钟的降温速率最快,以后显著减慢.在冰球内部存在着温度梯度.把家兔分成8组,每组3只,冷冻后15分钟、1、3、7、14、28、42和70天.分别处死,取出肝脏作组织切片观察.冷冻后 15 分钟,在冷冻区出现肝细胞肿胀和小血管扩张充血.1天后,冷冻区出现白细胞;直径小于0.15 毫米的小血管出现血栓栓塞.3天和7天后,坏死最严重;但是在坏死区四周已经出现肝组织再生.14天后坏死范围不断缩小,有纤维组织形成,并不断增生 (围绕坏死区).到70天,只剩下很小的疤痕.本研究可为临床冷冻治疗提供参考依据     

玻璃化冻存对胚胎神经细胞活性及脊髓移植的影响

采用玻璃化冻存技术对大鼠胚胎神经细胞进行深低温保存,在冻存１ｄ、１０ｄ、２０ｄ和４０ｄ后,３８℃水浴快速复温,离心洗脱冷冻保护剂,检测胚胎神经细胞的活性与功能,并移植于脊髓损伤大鼠．实验结果表明：玻璃化冻存４０ｄ的胚胎神经细胞,存活率为７６．４±８．３％,膜完整性为冻存前的６９．４±７．８％．细胞活力虽有下降,但仍可维持较高水平．培养１周的部分神经元建立突触联系,移植于脊髓损伤大鼠仍有一定的修复作用     

玻璃化冻存对胚胎神经细胞活性及脊髓移植的影响

采用玻璃化冻存技术对大鼠胚胎神经细胞进行深低温保存,在冻存1d、10d、20d和40d后,38℃水浴快速复温,离心洗脱冷冻保护剂,检测胚胎神经细胞的活性与功能,并移植于脊髓损伤大鼠.实验结果表明：玻璃化冻存40d的胚胎神经细胞,存活率为76.4±8.3％,膜完整性为冻存前的69.4±7.8％.细胞活力虽有下降,但仍可维持较高水平.培养1周的部分神经元建立突触联系,移植于脊髓损伤大鼠仍有一定的修复作用.     

人淋巴细胞在低温保存过程中超微结构的变化

在液氮内冻存的人外周血淋巴细胞,当冻存介质内不含低温保护剂时,细胞内呈现大量冰腔,细胞质、细胞核、细胞器和生物膜结构发生严重破坏.细胞的结冰是造成细胞死亡和功能丧失的初始原因.当冻存在含有10％二甲基亚砜或甘油的介质内,40天时,绝大部分淋巴细胞具有完好的超微结构,少量细胞遭受冷冻损伤,主要表现在细胞器.如线粒体膨胀、(?)结构破坏等.冻存一年时,部分细胞的细胞核形状和结构也发生了深刻的变化,如细胞核分叶,核膜呈锯齿状皱缩,染色质分布不匀等.     

小鼠肝脏和肌肉在甘油和二甲亚砜中经不同温度冷冻后的耗氧量

本文用氧电极技术测定小鼠肝脏和肌肉组织的耗氧量.将组织放置在台氏液,10%甘油台氏液或二甲亚砜台氏液内,降温到0℃,-20℃,-40℃及-196℃后,迅速在40℃水浴内复温,然后分别测定冷冻前后的耗氧量.实验结果表明,不加冷冻保护剂的肝脏或肌肉组织经过冷冻处理后,呼吸强度随温度的降低而减少.在-20℃时急骤降低,肝脏只有对照组的51%,肌肉为22%.添加冷冻保护剂的冷冻各组,都比不加保护剂的耗氧量要高. 二甲亚砜保护小鼠肝脏和肌肉组织的代谢活力要比甘油在同样条件下为优. 尤其在细胞低温致死的危险温度区域时更为明显.