黑色素对流感病毒诱导细胞凋亡的抑制效应

用荧光染色技术及流式细胞仪分析方法研究了 Ａ１／京防８６１ 和 Ｂ／沪防９３１ 两株流感病毒感染与细胞凋亡的关系,探讨利用嗜麦芽假单胞菌黑色素抑制流感病毒诱导 Ｍ Ｄ Ｃ Ｋ 细胞凋亡的可能性 结果显示：黑色素在 １００ ｍ ｇ· Ｌ－ １ 浓度范围内,对 Ｍ Ｄ Ｃ Ｋ 细胞无细胞毒性; Ａ１／京防 ８６１ 和 Ｂ／沪防 ９３１ 两株流感病毒均可诱导 Ｍ Ｄ Ｃ Ｋ细胞凋亡,但二者存在毒力差异（ｐ＜ ０．０５）病毒感染１２ ｈ 后,荧光染色可观察到典型的凋亡核形态,流式细胞仪则可检测到病毒诱导 Ｍ Ｄ Ｃ Ｋ 细胞产生的凋亡峰,且细胞凋亡率分别为３７．０２％ 和 ２７２９％ ;２０ ｍ ｇ· Ｌ－ １ 的黑色素可有效抑制两株流感病毒诱导细胞凋亡,使细胞凋亡指数从２５％ ～３５％ 降至３％ 以下 结果表明,黑色素可以抑制 Ａ 和 Ｂ型流感病毒诱导细胞凋亡     

嗜麦芽假单胞菌质粒pSH1的限制图谱及km~r标记的克隆

对嗜麦芽假单胞菌Ｐ２菌株（ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｍａｌｔｏｏｈｉｌｉａＰ２）的质粒ｐＳＨ１进行了限制酶切分析，确定了ＢｇｌⅡ、ＥｃｏＲⅠ、ＰｓｔⅠ、ＸｂａⅠ、ＢａｍＨⅠ、ＢｇｌⅠ、及ＰｖｕⅡ共７种限制性内切酶在ｐＳＨ１、质粒上的切割位点，前４种酶均为单一切点；后３种依次为２、７、５个切点．通过双酶切和部分酶切的方法绘制了ｐＳＨ１质粒的限制酶切图谱．将ｐＧＰ１－２质粒上的卡那霉素抗性基因（ｋｍｒ）片段插入ｐＳＨ１，获得了重组质粒ｐＳＨ２．ｐＳＨ２是由ｐＧＰ１－２质粒上大小为２．９０ｋｂ的ＤＮＡ片段（含ｋｍｒ）和ｇｈＨ１经ＢａｍＨⅠ－ＰｓｔⅠ双酶切产生５．７０ｋｂ大片段组成，它能够重新转化到喀麦芽假单胞菌受体（ｋｍｒ）中，其ｋｍｒ标记能够得到稳定的表达．     

碱性蛋白酶高产菌株的选育

以利福平抗性及牛奶平板上产生的透明水解圈的大小作为选择标记，用钴60对本实验室筛选获得的碱性蛋白酶高产菌株地衣芽孢杆菌C6进行诱变处理，筛选获得了一株酶产量大幅度提高的菌株L106，经发酵条件优化，其产酶活性稳定在19000U／mL左右，是出发菌株的1．9倍．与出发菌株相比，该菌的发酵周期也有所缩短，而产酶的最适温度和最适pH保持不变，并保持了芽孢形成较少的优良特性，具有良好的实际应用潜力。     

固定化假单胞菌产L-多巴

选择海藻酸钙和聚乙烯醇凝胶为固定化载体包埋假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｐ．），以提高该菌以Ｌ－酪氨酸为底物生产Ｌ－多巴的效率．海藻酸钙和聚乙烯醇固定的假单胞菌分别将发酵周期缩短了８和１４ｈ．半连续发酵的结果表明，海藻酸钙和聚乙烯醇固定化细胞分别能重复使用５次和１４次，Ｌ－多巴生产效率比游离细胞分别提高了１６％和１６０％．聚乙烯醇固定化细胞经过热处理和在生理盐水中振荡处理可明显提高Ｌ－多巴的生产效率和产量，过高的底物加入量不利于固定化细胞的重复使用     

黑色素对λ溶原菌及其紫外线诱导性的影响

利用嗜麦芽假单胞菌135制备的L-多巴黑色素对溶原菌E.coli(λ )及其紫外线诱导性的影响进行了研究,结果表明:这种黑色素对该溶原菌的生长无影响,也不诱导形成λ噬菌体颗粒,但对该溶原菌的紫外线致死作用具有保护效应,0.9 g/L黑色素的保护效应近似于100% ;黑色素对溶原菌的紫外线诱导性有抑制效应或增强效应,0.3 g/L黑色素对溶原菌的紫外线诱导性的抑制效应最好.     

固定化细胞生产黑色素的研究

利用固定化产酪氨酸酶的假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｐ．）以酪氨酸为底物生产黑色素．该黑色素的紫外扫描光谱图显示随波长的减小其吸收值增大，在２１０ｎｍ处有一吸收峰；红外光谱显示它在３μｍ和６μｍ处有吸收峰，从而证实它是一种黑色素．固定化细胞摇瓶半连续发酵产黑色素结果表明，最适温度为３７℃，最适ｐＨ为９．５．加入微量铜离子、供氧良好和较低的底物加入量有利于黑色素的生成．在生理盐水中低温振荡处理可提高操作稳定性，使重复利用次数达到９次，连续使用１８０ｈ     

5株细菌产L-多巴黑色素的比较研究

对5株细菌所产黑色素的物理和化学性质及发酵进行了比较研究。结果表明：尽管这些不同来源的黑色素在理化性质上存在一定差异，但它们的基本框架结构及主要基团是一致的，且在发酵过程中都检测到L-多巴，说明它们都属于多巴类黑色素；不同菌株在同一条件下和同一菌株在不同条件下发酵黑色素的产量差别很大。其中WS和H2的黑色素产量可分别达到1720mg／L和1040mg／L，有进一步开发成为工业发酵生产黑色素应用菌株的潜力。