克隆缺失连接片段——一种基于PCR技术的缺失型假肥大型肌营养不良症的携带者检测

目的 依据dystrophin基因缺失后断端重接可形成一段变异的DNA序列,提出一种利用缺失连接片段进行缺失型假肥大型肌营养不良症携带者检测的新方法.方法 实验以来自广东省肇庆地区的一个Becker型肌营养不良(Becket muscular dystrophy,BMD)家系为研究对象,其中2例确诊的男性BMD患者,3例待诊的女性携带者,1例待诊的人工流产绒毛.先证者经外显子PCR检测确定第3～5外显子缺失,随后采用PCR步移法在相应内含子设计引物定位断裂点的位点,最后利用靠近断裂点设计的引物直接对家系的6例基因组DNA进行缺失连接片段的PCR扩增和测序.结果 6例基因组DNA均扩增出阳性的产物片段且连接片段的测序序列完全一致,绒毛的性别诊断结果为女性,可以确诊本家系中的3个女性和流产绒毛均为缺失型BMD携带者.结论 作者成功地将整个家系患者和携带者的缺失连接片段进行克隆和测序分析,实现了利用缺失连接片段对缺失型假肥大型肌营养不良症携带者进行准确基因诊断的设想,同时对在产前诊断上的应用前景进行了探讨.     

大鼠尾静脉留置针新方法

笔者在动物实验中,利用人工静脉留置针,发明了一种可多次采血和注药的方法,现以大鼠为例介绍如下.     

自发性小脑出血26例临床分析

通过对26例经CT或MRI确诊为自发性小脑出血的病例进行分析,研究小脑出血的病因、临床表现、CT表现、保守治疗及外科手术的指征和预后。     

基底神经节的书写功能

目的通过葡萄糖代谢率比值的测定评价基底神经节在汉语书写中的作用,探讨其神经心理学机制.方法10名大学本科一年级学生,以正电子发射计算机断层显像为检测手段,观察和比较受试者在假写状态及文字书写状态下基底神经节的葡萄糖代谢情况.结果10名受试者在文字书写状态较假写状态,左侧豆状核差值(0.0435±0.0396),右侧豆状核差值(0.0634±0.0301),左侧尾状核差值(0.0463±0.0384),右侧尾状核差值(0.0566±0.0396),差异具有显著性(均P＜0.05);双侧豆状核、尾状核的激活值差异无显著性(均P＞0.05).结论双侧基底神经节均参与了汉语文字书写的过程.     

缺血再灌注损伤大鼠脑组织细胞因子EGF mRNA的变化及通心络对其影响

目的:探讨表皮生长因子(EGF)mRNA在缺血/再灌注损伤大鼠脑组织的表达情况及通心络对其影响。方法:采用大鼠缺血/再灌注损伤(MCAO)模型并予通心络灌胃,应用逆转录集合酶链式反应(RT-PCR)检测缺血再灌注损伤后5、7、14、21、30天神经干细胞增殖分化相关细胞因子EGF mRNA的变化。结果:缺血再灌注模型组EGF mRNA在不同时间段均有表达,EGF mRNA在造模后第3天开始表达增强,第5天表达最高;给予通心络处理后第3天缺血侧EGF mRNA开始表达增强,第5、7、14、21、30天时PCR表达均高于缺血对照组。结论:大鼠脑缺血再灌注后缺血区脑组织细胞因子EGF mRNA表达增强,通心络可强化其反应,进而可能诱导神经干细胞增殖和分化。     

通心络治疗缺血再灌注损伤机制的脑片研究

目的通过器官型脑片研究通心络含药血清对缺血再灌注损伤的治疗作用及机制。方法制备生后3d SD的全脑器官型脑片,随机分为缺血再灌注脑片模型组和正常对照组,各组根据干预方式的不同再分为大剂量含药血清组、小剂量含药血清组、对照血清组、空白组,于干预后不同时间通过倒置显微镜及免疫荧光染色观察通心络对脑片上神经干细胞增殖、迁移、分化的影响。结果经含药血清干预后室下区、海马齿状回单位区域新生细胞(nestin )数量增多,正常对照组新生细胞密度高于缺血再灌注脑片模型组(P<0.05);两组1,3,7d时新生细胞数量均按照大剂量含药血清组、小剂量含药血清组、对照血清组、空白组顺序递减(P<0.05);因新生细胞向外迁移,随着培养时间延长上述区域新生细胞密度逐渐减少;1d时各组均有大量nestin 新生细胞,7d时只有大、小剂量含药血清组有少量nestin 新生细胞。结论通心络可能通过促进神经干细胞的增殖迁移和分化来治疗缺血再灌注损伤,其效应随剂量增加而增强。     

大鼠脑缺血再灌注损伤后血浆内皮素、一氧化氮含量变化及通心络对其影响

目的：探讨大鼠脑缺血再灌注损伤后血浆一氧化氮（NO）、内皮素（ET）含量变化及通心络对其的作用。方法：采用大鼠MCAO模型，应用放免方法观察缺血后第3、5、14及30d NO、ET含量变化。结果：MCAO后血浆ET浓度显著升高（P〈0．05），而NO浓度显著下降（P〈0．05）；通心络能升高血浆NO浓度，降低ET浓度。结论：MCAO缺血损伤时，NO、ET起着重要作用，通心络则具有防治脑缺血性损害的作用。     

实验性脑出血血肿周围血脑屏障超微结构的动态观察

【目的】动态观察实验性脑出血血肿周围血脑屏障的形态学变化。【方法】建立稳定的脑出血大鼠模型，观察脑出血后不同时间血肿周围血脑屏障超微结构变化。【结果】脑出血后24h，毛细血管内皮细胞出现肿胀；48h，内皮细胞高度肿胀，胞质突向管腔，紧密连接消失；d7血管内皮细胞胞膜、核膜溶解．核固缩．紧密连接开放、管周高度水肿，可见红细胞阻塞毛细血管。【结论】采取措施预防脑出血血肿周围血脑屏障的损伤，是脑出血治疗的一个重要方面。     

Alzheimer病乳头体体积变化的磁共振成像研究

[摘要] 目的 通过磁共振成像三维体积测量,观察阿尔茨海默病（Alzheimer Disease, AD）患者乳头体体积的变化。方法 AD患者21例、老年对照（AC）组32例、非老年对照（NC）组29例,以1.5T MRI成像系统三维扰相梯度回波（3D-SPGR）序列,三维监视下手动追踪确定边界,测量乳头体体积,以颅腔容积作标准化校正,比较各组乳头体体积变化。结果 AD组左、右侧及合并后双侧乳头体体积均小于老年对照组及非老年对照组（p<0.05）,尤以左侧乳头体体积缩小明显,与右侧比较差异显著（p<0.01）,而老年对照组与非老年对照组乳头体体积无显著差异（p>0.05）。结论 MRI三维成像可显示乳头体萎缩并精确测量其体积,乳头体体积缩小可能是早期AD的特征性影像学表现之一。