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目的 建立检测博尔纳病病毒(BDV)RNA的实时定量RT-PCR(real-time RT-PCR)方法.方法 设计BDV-p40基因特异性引物和探针,优化反应条件;并以已知的BDV-p40基因扩增产物的克隆为标准品,建立标准曲线;然后对已知BDV RNA进行实时定量RT-PCR的特异性和敏感性检测.结果 建立了特异检测BDV RNA的实时定量RT-PCR技术,并且可以检测到感染细胞中1个拷贝以上BDV RNA.结论 本技术可以直接用于BDV感染的检测和定量分析. 相似文献
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医学微生物学实验教学是理论教学的有益补充,也是教学中不可或缺的组成部分,对于学生消化吸收理论课内容、培养学生动手能力有着重要的作用.为了更好地提高医学微生物学实验教学效果,将实际教学工作中的一些改革办法作一总结. 相似文献
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目的 对氯丙嗪(chlorpromazine,CPZ)处理后的大鼠脑皮质中凝血因子Ⅲ表达进行检测及分析.方法 按每组6只,将wistar大鼠随机分为:正常对照组、CPZ高、中、低剂量(20 mg/kg、10 mg/kg、5 mg/kg)单次注射组以及中剂量连续注射组(10 mg/kg/2周),采用腹腔注射CPZ的方法制备动物模型.免疫组化和Western印迹法检测大鼠脑皮质中凝血因子Ⅲ的表达.结果 免疫组化结果显示,中剂量(10 mg/kg)的CPZ单次注射及连续注射均能显著增加大鼠脑皮质中凝血因子Ⅲ的表达(P值分别为0.0007、0.0005).Western印迹结果显示,与正常对照组相比,CPZ高、中剂量(20 mg/kg、10 mg/kg)单次注射(P值分别为0.0141、0.0163)以及中剂量(10 mg/kg)长期连续注射组大鼠脑皮质中凝血因子Ⅲ表达显著增加(P =0.0094).结论 CPZ能够上调大鼠脑皮质中凝血因子Ⅲ的表达.除了已知的多巴胺受体和钙调素之外,凝血因子Ⅲ也是CPZ调控的靶分子之一. 相似文献
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博尔纳病病毒感染对新生大鼠脑内单胺类受体基因转录的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的分析博尔纳病病毒(BDV)感染对新生大鼠脑内单胺类受体基因转录的影响。方法选择病毒滴度为2·0×106FFU/ml的BDV病毒液对新生大鼠进行颅内接种,接种量为10μl/只新生大鼠。30d后用RT-PCR和间接免疫荧光方法确定BDV感染情况;并采用半定量RT-PCR方法检测BDV感染大鼠脑组织中多巴胺2(D2)受体和5-羟色胺2α(5-HT2α)受体基因的mRNA转录情况。结果病毒接种后新生大鼠的BDV感染阳性率为88·89%。病毒感染大鼠脑组织中5-HT2α受体和D2受体基因的mRNA转录水平均明显低于对照组,差异有统计学意义。结论BDV感染可以明显抑制新生大鼠脑组织中D2受体和5-HT2α受体基因的mRNA转录,提示单胺类受体基因的转录与表达参与BDV感染的致病过程。 相似文献
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随着对自身抗体研究的不断深入,功能性自身抗体已成为自身抗体研究领域的新热点。这类免疫球蛋白大多为受体抗体,其在疾病中的作用机制为目前的热点研究内容。该类抗体对介导机体心血管功能异常、内分泌紊乱以及神经系统传导功能异常等具有重要作用。本文将对功能性自身抗体的作用机制以及应用价值进行综述。 相似文献
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Objective Investigate the effects of the recombinant adenoviral vector containing microRNA-184 (ADV-miR-184) on the migration of human lens epithelial cells in vitro.Methods ADV-miR-184 WaS amplified,purified,and titmted in 293 cell line.Human lens epithelial cells (HLE-B3) were then transfected with ADV-miR-184.The) effect of miR-184 on the migration of these transfected cells was evaluated by the scratch assay.Results The original titer of ADV-miR-184 was 1.6×109 puf/mL.HLE-B3 cells were transfected with ADV-miR-184 at different multiplicity of infection (MOI),including MOI10,MOI50,MOI100,MOI200 and MOI500,for a period of 72 h.The migrating distances of HLE-B3 cells were inbitied by MOI100 significantly higher titers of ADV-miR-184 transfection.Transfection with inhibited the migration of HLE-B3 cells compared with groups of control,MOI10,or MOI50 (P<0.05).In contrast,no differences were showed between MOI100 and MOI200 or MOI500 groups.The migrating distances of HLE-B3 ceils transfected with MOI100 were also significantly inhibited at 24h,48h and 96h tremments compared with controls (P<0.05).Conclusion ADV-miR-184 could be successfully used to tnmsfect human lens epithelial cells.The miR-184 inhibited the migration of human lens epithelial cells,which suggests that the miR virus may play a role in the development of the posterior capsular opacification. 相似文献
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目的 本研究旨在从系统性红斑狼疮(systemmic lupus erythematosus,SLE)患者外周血淋巴细胞中获得自身抗体,并从中鉴定筛选出抗核抗体.方法 利用人B细胞杂交瘤技术制备SLE患者来源的全人单克隆自身抗体,采用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immuno sorbenk assay,ELISA)方法测定阳性杂交瘤细胞上清抗体浓度,并以HEp-2细胞为底物,采用间接免疫荧光法鉴定筛选出抗核抗体.结果 共获得48株稳定分泌IgG型全人单克隆自身抗体的杂交瘤细胞株,其中12种细胞上清抗体浓度大于1 500 ng/mL,占25%,通过免疫荧光鉴定从中筛选出3种抗核抗体,荧光核型分别为周边型、斑点型和核仁型.结论 全人单克隆自身抗体的制备及抗核抗体的筛选鉴定,为开发新型单克隆抗体药物以及研究SLE的致病机制奠定了良好的实验基础. 相似文献
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TNF-α与特发性血小板减少性紫癜患者激素抵抗的相关性研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的研究特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenia purpura,ITP)患者肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达及其对糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)表达的影响,探讨TNF-α与糖皮质激素抵抗的相关性。方法ELISA方法检测ITP激素敏感型、激素抵抗型患者及正常对照组的血浆中TNF-α的含量;分离健康志愿者外周血单个核细胞(PBMC),一组用TNF-α刺激培养,一组单独培养作为对照,分别采用RT-PCR方法及Western blot法分析其GRα和GRβmRNA及蛋白表达的变化。结果血浆TNF-α浓度在ITP患者激素敏感组、激素抵抗组、正常对照组分别为(13.69±4.92)pg/mL、(19.73±4.66)pg/mL、(7.51±2.79)pg/mL,二组ITP患者血浆中TNF-α的含量均高于正常对照组(P〈0.01),其中激素抵抗组ITP患者血浆中TNF-α的含量高于激素敏感组(P〈0.05);经TNF-α刺激培养24 h后,培养组与对照组GRα/GAPDHmRNA分别为1.16±0.73,1.20±0.51,培养组与对照组相比,其GRαmRNA表达无显著变化(P〉0.05);培养组与对照组GRβ/GAPDHmRNA分别为1.62±0.59,0.81±0.66,培养组与对照组相比,GRβmRNA表达明显增加(P〈0.05);GRα蛋白的表达在各组之间无显著差别,但GRβ蛋白的表达在TNF-α刺激组较对照组明显增高。结论ITP激素抵抗型患者血浆TNF-α含量增高;TNF-α可以增加PBMC中GRβ的表达,这可能是炎性细胞因子诱发糖皮质激素抵抗的内在机制。 相似文献