烟草T-DNA插入位点侧翼序列扩增方法的筛选与优化

烟草T-DNA激活标签插入突变体库的创制过程中,需要进行大量的T-DNA插入位点的侧翼序列扩增,因此选择一种适用于烟草T-DNA侧翼序列扩增的高效方法尤为必要。本研究比较了TAIL-PCR、PCR-walking、FPNI-PCR三种方法对T-DNA插入位点侧翼序列的扩增效率、插入位点确定的比例和同源蛋白比对结果,并对3种方法的PCR程序、体系和引物设计等方面进行了优化,确定TAIL-PCR更适合烟草的侧翼序列扩增,通过产率、条带长度、插入位点和同源蛋白比对结果的比较,得出TAIL-PCR更适合烟草的侧翼序列扩增。这一结果为应用烟草突变体开展烟草基因功能的研究奠定了基础。     

烟草基因组计划进展篇：6．烟草全基因组过量表达和RNA干涉体系的建立与应用

随着烟草基因组测序计划的逐步完成,烟草重要基因的克隆及其功能鉴定已成为研究的热点。RNA干涉和基因过量表达是研究基因功能必不可少的方法。利用RNA干涉和过量表达从正反两方面对烟草重要性状基因进行功能研究是克隆和阐明烟草重要功能基因的主要方法和必经之路,将为烟草分子育种奠定基础。在中国烟草总公司科技重大专项资助下,中国农业科学院烟草研究所和生物技术研究所联合运用生物信息学方法,通过RNA干涉技术和过量表达技术对与烟碱、有害成分、主要抗性、香气物质、主要矿物质吸收利用效率、烟叶成熟和烘烤特性等重要性状相关基因进行了发掘和功能研究。