两步控制策略优化生防菌B579芽孢生成条件

[目的]优化生防菌-枯草芽孢杆菌B579芽孢生成的发酵条件,提高芽孢浓度.[方法]采用2步控制策略,即发酵的第1阶段(菌体生长阶段,0-10 h)促进细胞生长,发酵的第2阶段(菌体对数生长后期,芽孢生成阶段,10-30 h)促进芽孢生成,分别考察了培养基初始葡萄糖浓度、发酵pH、第2阶段摇床转速、第2阶段发酵温度对芽孢生成的影响.通过单因素试验确定其水平,在单因素试验基础上进行正交试验优化,确定获得高浓度芽孢的最佳发酵条件.[结果]培养基初始葡萄糖浓度是影响芽孢生成的显著因素,芽孢生成的最佳发酵条件为培养基初始葡萄糖浓度5g/L,发酵pH 7.0,第1阶段的发酵温度37℃,摇床转速180 r/min,约10 h后进入第2阶段,发酵温度提高到40℃,摇床转速调节为200 r/min.发酵30 h,最终获得的芽孢浓度为(9.43±0.15)×10<.8>CFu/ml,芽孢生成率为90.99%,分别是优化前的6.70和2.43倍.[结论]利用两步控制发酵策略可提高生防菌B579芽孢浓度,建立的发酵工艺为生防菌剂的大规模生产奠定了基础.     

巴斯德醋酸杆菌AC2005乙醇脱氢酶基因克隆与蛋白序列分析

以具有优良醋酸发酵性能的巴斯德醋酸杆菌AC2005基因组DNA为模板,利用PCR的方法分别克隆了编码乙醇脱氢酶亚基Ⅰ和乙醇脱氢酶亚基Ⅱ的基因adhA和adhB。序列分析表明,adhA与GenBank已报道的序列（accessio nnumber：D13893.1）具有94%的同源性,氨基酸序列同源性达98%;adhB与GenBank已报道的序列（accession number：D13893.1）同源性为93%,氨基酸序列同源性达97%。利用TMHMM 2.0软件,对乙醇脱氢酶跨膜结构进行了分析,发现乙醇脱氢酶亚基Ⅰ和乙醇脱氢酶亚基II均为膜结合蛋白。利用Swiss-Model在线软件模拟了巴斯德醋酸杆菌AC2005乙醇脱氢酶亚基I的三维立体结构。该研究对该酶的结构和功能的进一步分析提供了基础。