高压酶解法提取硫酸皮肤素工艺优化及其抗氧化活性分析

以猪肠粘膜提取肝素过程中透过液为原料,优化硫酸皮肤素提取工艺,探讨硫酸皮肤素的抗氧化能力。以硫酸皮肤素浓度为检测指标,筛选酶解最佳用酶,在单因素基础上通过Box-Behnken响应曲面试验优化高压酶解工艺,筛选最优大孔树脂,优化动态吸附洗脱条件纯化硫酸皮肤素,探究体外抗氧化活性。结果显示:在最佳酶解条件温度56 ℃,pH9.0,时间8.4 h,压力135 MPa下实测酶解硫酸皮肤素浓度为13.05 ng/mL,接近模型值;D312树脂以1.5 BV/h流速上样,4% NaOH 1.5 BV/h流速洗脱纯化效果最好,高效凝胶渗透色谱测定纯度达73.32%;硫酸皮肤素抗氧化能力与浓度呈正相关,DPPH自由基在2.4 mg/mL时清除率为36.29%,表现出一定清除能力,对于·OH 2.4 mg/mL时清除能力较强为68.2%,总还原力于2.4 mg/mL时为0.22。该研究为分离纯化硫酸皮肤素及其在抗氧化功能方面开发利用提供理论依据。     

高水分挤压温度对绿豆蛋白结构的影响

本文以绿豆蛋白为原料,在不同挤压温度下通过高水分挤压技术制备组织化绿豆蛋白,利用傅里叶红外光谱、内源荧光光谱、SDS-PAGE凝胶电泳、扫描电镜等方法对蛋白质结构进行分析。结果表明,高水分挤压后,离子键、疏水相互作用、二硫键含量呈先上升后下降的趋势,游离巯基含量呈先降低后上升的趋势。绿豆蛋白二级结构中β-折叠含量显著降低（P<0.05）,α-螺旋和β-转角含量显著增加（P<0.05）。通过内源荧光光谱发现,蛋白质在130和140℃条件下最大发射波长发生红移,在150和160℃条件下蛋白的最大发射波长没有明显变化。通过扫描电镜可以明显观察到绿豆蛋白形成了纤维结构。综上,经过高水分挤压处理后的绿豆蛋白结构会发生变化,挤压温度对绿豆蛋白高水分挤压组织化产品有显著影响。     

汉麻提取物生物学功能及汉麻在动物营养上的应用

本研究以汉麻分离蛋白（Hemp Protein Isolate,HPI）为原料,通过超高压辅助酶解反应对HPI进行改性,测定不同压力下汉麻蛋白酶解产物（hydrolysate of hemp protein isolate,HPIH）的聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS polyacrylamide gelelectrophoresis,SDS-PAGE）电泳特性、表面疏水性、巯基含量、傅立叶红外光谱和内源荧光光谱分析改性前后汉麻分离蛋白的结构变化。结果表明,超高压（ultra-high pressure,UHP）（0.1、100、200、300 MPa）处理对HPI酶解反应具有一定的辅助作用,且随压力的升高酶解反应程度逐渐增大,分子量逐渐降低;HPI经改性后,疏水性基团逐渐暴露,表面疏水性随压力的增大先上升后下降,且变化差异性显著（P<0.05）,在200 MPa时表面疏水性达到最大;酶解反应后,HPIH游离巯基含量显著降低（P<0.05）,而表面巯基含量随压力增大呈先上升后下降的趋势;通过测定改性前后蛋白质氨基酸组成及含量可知,改性前后HPI氨基酸组成不变,但各氨基酸含量存在不同程度下降;由傅立叶红外光谱图可以看出,与HPI相比,HPIH的吸收峰强度、峰型及峰面积等均发生不同程度变化,说明超高压辅助酶解反应使蛋白质二级结构发生改变;内源荧光光谱显示,HPIH荧光强度增大且最大发射波长发生红移,说明酶解反应改变了HPI的三级结构;抗氧化活性结果表明,适当的压力处理可有效提升酶解产物的抗氧化能力,当压力为200 MPa时,HPIH的DPPH、ABTS⁺自由基清除能力及还原能力达到最高。综上所述,超高压辅助酶解改性处理能显著改变汉麻分离蛋白的二、三级结构,暴露出疏水基团等活性基团,从而提高其抗氧化性。

     

超高压条件下大豆分离蛋白美拉德反应及乳化性质

本文研究超高压（High Hydrostatic Pressure,HHP）条件下,不同压力（0.1、100、200、300 MPa）在60 ℃时,对大豆分离蛋白（Soybean Protein Islates,SPI）与果糖（Fructose,Fru）美拉德反应产物的影响。以接枝度及乳化活性为指标,并分析最佳条件下所得产物以及产物乳状液的结构性质。结果表明在压力200 MPa、质量比0.8:1、反应时间24 h、溶液pH 8.0条件下,产物的乳化活性及乳化稳定性均有提升,乳化活性为(85.36±0.04) m2/g,是SPI与Fru混合物的1.71倍,是SPI的2.17倍,乳化稳定性为(27.66±0.03) min,是SPI与Fru混合物的1.15倍,是SPI的1.40倍。凝胶电泳图分析表明糖分子以共价键的形式接入到SPI分子中。圆二色谱图分析得知在200 MPa的条件下改性SPI二级结构发生改变,内源荧光光谱分析表明在200 MPa的压力可以使SPI的空间结构发生改变。粒径、电位和激光共聚焦显微镜微观图均可表明200 MPa的压力对蛋白乳状液稳定性的提升。     

热处理温度和离子强度对汉麻蛋白热聚集行为的影响

本研究以汉麻分离蛋白（Hemp Protein Isolate,HPI）为原料,通过超高压辅助酶解反应对HPI进行改性,以溶解度和水解度为判定指标筛选酶解改性反应最佳条件,并探究超高压辅助酶解反应对酶解产物溶解性、起泡性、乳化性、持水性、持油性的影响。结果表明,HPI酶解反应最适条件为：加酶量（复合蛋白酶）5000 U/g、酶解改性pH8.0、酶解改性温度55 ℃、酶解改性时间50 min。以HPI为对照,当压力为200 MPa时,酶解产物的溶解度、起泡性、乳化性、持油性最高,压力为100 MPa时,泡沫稳定性最好,酶解后的乳化稳定性存在不同程度的下降,压力为0.1 MPa时其持水性达到最大值。综上所述,超高压技术能够有效促进HPI的酶解改性反应,且压力为200 MPa时,酶解产物的理化性质最好。