嗜酸乳杆菌细菌素Lactobacillin XH2分离纯化研究

采用氯仿萃取和硫酸铵梯度盐析两种方法对嗜酸乳杆菌细菌素Lactobacillin XH2进行粗提,氯仿萃取获得的粗提物抑菌直径为17.40mm;硫酸铵饱和梯度盐析,其中60%~80%饱和梯度粗提物抑菌效果较好,抑菌直径为15.50mm。两种粗提物经离子交换cellufine A-500柱层析纯化后,抑菌效价和比活力显著增强,分别是380.60Au/mL和355.60Au/mL、5.55Au/μg和9.96Au/μg,提纯倍数分别为15.86、28.46。Tricine-SDS-PAGE电泳测得Lactobacillin XH2分子量在14.4~20.1ku之间。     

嗜酸乳杆菌发酵干酪成熟过程中蛋白质降解产生的肽类的性质分析

对嗜酸乳杆菌和嗜热链球菌发酵生产的具有功能性的低脂和全脂干酪4℃成熟90d时蛋白质的降解程度进行了研究。通过电泳分析表明,两种干酪成熟后蛋白质的降解程度比市售的普通低脂和全脂干酪要充分,且低脂干酪比全脂干酪蛋白降解程度要深,降解物含量要多;反相高效液相色谱(RP-HPLC)显示的干酪中肽图谱表明,成熟后,虽然低脂干酪和全脂干酪中仍然存在和牛奶中相同的蛋白物质,但部分发生了降解并产生了新的肽类,且两种干酪所生成的肽组分各不相同。     

嗜酸乳杆菌细菌素Lactobacillin XH2抑制大肠杆菌作用机理的探讨

将离子交换色谱纯化获得的抑菌效价为380.60 AU/mL的嗜酸乳杆菌细菌素Lactobacillin XH2作用于大肠杆菌（Escherichia coli）,从死亡率、细胞膜损伤及引起胞内物质外泄方面,探讨Lactobacillin XH2抑制大肠杆菌的机理。结果表明：Lactobacillin XH2作用于大肠杆菌后,在3 h内大肠杆菌死亡率达96%,菌体细胞变形并出现孔洞,菌体短小且不规整。进一步分析发现,细胞膜通透性增大,胞内K+快速大量泄露,膜电位紊乱失衡;胞内紫外吸收物质、乳酸脱氢酶等生命大分子物质大量流失;同时导致了大肠杆菌胞内三磷酸腺苷（adenosine triphosphate,ATP）外泄,细胞物质代谢、能量代谢失常,最终导致了菌体死亡。这些现象表明,孔道形成（pore formation）理论可能同样适用于Lactobacillin XH2对革兰氏阴性菌大肠杆菌的作用机理。     

嗜酸乳杆菌同化吸附降胆固醇作用机理研究

嗜酸乳杆菌具有降低血清及培养介质中胆固醇水平能力,其机理主要体现在其对胆固醇的吸附作用和同化吸收作用。实验采用MATH法测定了胆固醇介导嗜酸乳杆菌La-XH1和La-XH2表面疏水性、对超声波的抗性及胞内脂肪酸组成变化。结果表明,La-XH1和La-XH2对正十六烷和二甲苯具有较强表面疏水性,并通过电镜扫描结果显示,La-XH1和La-XH2可以将胆固醇吸附到自身表面,并随菌体一起在离心条件下沉淀下来,而且生长在含有胆固醇培养基内的菌株对超声波的抗性要明显高于生长在普通MRS培养基内的菌株。胞内脂肪酸含量GC-MC分析得出,添加胆固醇后,嗜酸乳杆菌La-XH1和La-XH2胞内饱和脂肪酸相对含量分别由16.99%与18.31%下降为13.55%与17.87%,不饱和脂肪酸相对含量分别由33.69%与32.22%增加至53.73%与53.91%,改变了菌体自身脂肪酸组成,胆固醇被菌体吸收同化到菌体内。     

嗜酸乳杆菌胆盐水解酶的分离纯化及酶学性质

对嗜酸乳杆菌La-XH1产生的胆盐水解酶进行分离纯化,并对其部分酶学性质进行研究。结果表明：嗜酸乳杆菌La-XH1胆盐水解酶的粗酶液经硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose CL-6B柱层析后的酶比活力分别为47.82 U/mg和115.85 U/mg,纯化倍数分别为4.46 倍和10.82 倍,酶的回收率分别为59.89%和25.11%;通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecylsulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）电泳分析,该酶的分子质量约为43 kD,最适温度为40 ℃,最适pH值为6.0,Fe3+、Ca2+、Mg2+、Mn2+、Zn2+对该酶有激活作用,其中Fe3+的激活作用最强,Na+、K+对该酶几乎无作用,而Cu2+、Ba2+对该酶有很强的抑制作用。     

酸胁迫下嗜酸乳杆菌菌体形态的扫描电镜观察

对嗜酸乳杆菌在pH为1.5、3.5和6.2三种培养条件下的菌体形态进行了扫描电镜观察(SEM)。电镜扫描结果显示,嗜酸乳杆菌菌体呈典型杆状菌,无鞭毛和荚膜,以单个或成双排列,无分支;且在不同pH条件下菌体形态存在差异。在pH为1.5的条件下,嗜酸乳杆菌菌体呈短杆状,且菌体粗壮、两端钝圆;在pH为6.2的条件下,嗜酸乳杆菌菌体纤细,杆状较长。通过对比发现,随着pH的下降,嗜酸乳杆菌的菌体形态由长杆状变成短杆状,由菌体纤细变成菌体粗壮。