大肠杆菌O157:H7特异基因的实时荧光定量PCR检测

为建立快速、特异的检测大肠杆菌O157:H7的实时荧光定量聚合酶链式反应(real time polymerase chainreaction,RT-PCR)方法,针对大肠杆菌O157:H7的特异基因rfbE设计一对特异引物,建立SYBR GreenⅠ实时定量PCR检测方法,并进行灵敏度、重复性和特异性实验,同时与常规PCR方法进行比较。结果显示所建立的SYBRGreenⅠ实时定量PCR方法可以快速、特异地检测出大肠杆菌O157:H7,细菌纯培养物中其灵敏度可达2×101CFU/mL,临床模拟污染肉样中能最低能检测到1×102CFU/mL的大肠杆菌O157:H7。与常规PCR方法相比,SYBR GreenⅠ实时定量PCR方法对临床样品中大肠杆菌O157:H7的检出率大大提高。本研究建立的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR技术能快速准确、特异、敏感地检测大肠杆菌O157:H7。     

传染性喉气管炎病毒gD基因重组禽痘病毒的制备、纯化及初步鉴定

目的制备传染性喉气管炎病毒(ILTV)gD基因重组禽痘病毒,并进行纯化及初步鉴定。方法将含有ILTV河南长葛株gD基因的禽痘病毒转移载体转染禽痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞,采用蓝色蚀斑筛选纯化重组禽痘病毒,并经PCR及间接免疫荧光试验(IFA)进行鉴定。结果经过5轮蚀斑筛选纯化,获得1株重组禽痘病毒rFPV-ILTV-gD,其PCR产物经琼脂糖凝胶电泳,可见约1400bp的ILTVgD特异性条带。IFA检测显示重组禽痘病毒中的ILTVgD基因得到了表达。结论已成功制备并纯化了ILTVgD基因重组禽痘病毒,为预防ILT提供了新的途径。     

鸡传染性鼻炎的诊断与治疗

鸡传染性鼻炎是由鸡副嗜血杆菌引起的鸡的急性上呼吸道传染病。 1993年3月,郑州市郊某鸡场的蛋鸡群爆发了一种以流鼻涕、打喷嚏、颜面和肉髯肿胀,产蛋减少,体重减轻为特征的传染病。经流行病学调查,病原的分离与鉴定,确诊