短杆菌属产胆固醇氧化酶的发酵条件优化

短杆菌属(Brevibacterium sp.)是胆固醇氧化酶高产菌,对其进行底物诱导及发酵条件的优化,其最适培养基为蔗糖0.3%,酵母膏0.2%,蛋白胨0.3%,牛肉膏0.3%,K2HPO4 0.1%,MgSO4 0.05%,pH6.8。最适培养条件为接种量5%,24℃培养20h,通气量为50mL培养基/250mL三角瓶,200r/min。结果表明,胆固醇氧化酶的酶活力可达到2439U/L,比未优化前195U/L提高了12倍。在pH6.5和温度54℃条件下测得酶米氏常数Km值为7.1×10-5 mol/L。     

胆固醇酯酶高产菌株的筛选及动力学性质研究

通过平板初筛和摇瓶复筛,得到一株胆固醇酯酶的高产菌株,研究了pH值、温度、底物浓度、一些有机和无机试剂对胆固醇酯酶酶促反应速度的影响。研究发现,胆固醇酯酶有较好的酸碱稳定性,pH值为5.0￣8.0;最适pH值和最适温度分别为pH7.0和40℃,该酶的动力学研究表明,对胆固醇亚油酸酯和胆固醇油酸酯都表现为典型的米氏规律,Km值分别为2.2×10-5mol/L3.1×10-5mol/L,同时研究了一些金属离子和有机化合物对酶活性的影响,发现Mg2+、EDTA对胆固醇酯酶有激活作用。     

Rhodococcus sp.发酵条件及其胆固醇酯酶的部分性质

Rhodococcussp.经发酵培养可合成分泌胆固醇酯酶。对该菌种进行诱导及发酵条件的优化,确定其培养基为(%):蛋白胨1.3,KCl 0.5,牛肉膏0.1,Na2HPO40.632,MgSO40.06,油酸0.4,卵磷脂0.25,Triton X-100 0.16;最适培养条件为:pH7.4,250 mL三角瓶中装量40 mL,接种量6.0%,摇床转速180r/min,30℃培养24h。在最适培养基及最适培养条件下,胆固醇酯酶比活力可达到5.47 U/mg。酶学性质研究结果表明,该酶的最适温度为40℃,最适pH为7.0。