纳豆抗氧化肽对H2O2诱导HEK293细胞氧化应激损伤的保护作用

目的 评价纳豆肽的抗氧化能力以及对氧化应激HEK293细胞的保护效果。方法 首先以DPPH、ABTS+、·OH和O2-清除能力以及总还原能力为指标,测定酶解得到纳豆肽粗品的抗氧化能力。利用超滤技术对纳豆肽进行分离,测定分离后各组分在不同浓度下对DPPH及ABTS+清除活性。将活性最强的两个组分作为纳豆抗氧化肽,测定它们对H2O2诱导氧化损伤HEK293细胞抗氧化酶含量的影响,评价其对氧化损伤HEK293细胞的保护效果。结果 纳豆肽粗品在8 mg/mL时具有良好的DPPH、ABTS+、·OH和O2-清除能力以及总还原能力,初步证实了其抗氧化潜力。超滤后得到了相对分子质量分别大于30 kDa、10~30 kDa、3~10 kDa、小于3 kDa的四个纳豆肽组分,其对DPPH及ABTS+清除活性均随着浓度的增加呈现上升趋势,特别是在8 mg/mL时,相对分子质量为3~10 kDa和小于3 kDa组分表现出最强的抗氧化活性,将这两个组分作为纳豆抗氧化肽继续研究。后续的细胞试验表明,这两个组分能够显著提高氧化应激下HEK293细胞的存活率。在50~300μg/mL的剂量范围内,小于3 kDa组分的纳豆抗氧化肽可使细胞存活率恢复至未损伤时的水平,而3~10 kDa组分也使损伤细胞的存活率提高了40.8%。同时,纳豆抗氧化肽均能提高氧化损伤HEK293细胞中的SOD、GPX和CAT等抗氧化酶的含量,小于3 kDa组分和3~10 kDa组分的纳豆抗氧化肽分别使SOD含量提高了49.52%和50.80%,GPX含量提高了49.52%和50.81%,CAT含量提高了93.64%和91.97%。结论 纳豆抗氧化肽可以有效地缓解H2O2诱导的HEK293细胞的氧化应激损伤,为纳豆抗氧化肽的应用提供理论依据。     

纳豆芽孢杆菌发酵菜用大豆中总黄酮的提取及其降血脂效果评价

本研究以菜用大豆等外品为原料,通过纳豆枯草芽孢杆菌发酵来提高其总黄酮含量,为提高菜用大豆产品的附加值提供理论支持。实验利用纳豆芽孢杆菌对菜用大豆等外品进行发酵,以发酵产品中总黄酮含量为评价指标确定纳豆发酵的最优条件,通过D101型大孔树脂对提取的总黄酮进行纯化,采用芦丁比色法测定总黄酮含量。体内实验分为肥胖预防实验和缓解实验:以C57BJ/6L小鼠为模型,预防实验在饲喂高脂饲料的同时,灌胃总黄酮提取物溶液（50 mg/kg·d）;缓解实验是利用高脂饲料建立起肥胖小鼠模型后,灌胃低、中、高剂量的总黄酮提取物溶液（分别为20、50和100 mg/kg·d）。通过小鼠体重、血脂以及促炎因子等指标评价总黄酮溶液的降脂效果。结果表明,菜用大豆发酵生产黄酮的最佳条件为:枯草芽孢杆菌接菌量为1.15 × 1011 CFU/100 g菜用大豆,发酵温度37 ℃,发酵时间24 h,后熟时间12 h,此时纳豆总黄酮得率为4.30 mg/g菜用大豆;测得该粗提物中黄酮含量为22.1%;预防实验组给予黄酮处理后,小鼠体重和Lee's指数与正常对照组相比均无显著差异(P >0.05)。缓解实验中高、中、低剂量黄酮提取物处理组小鼠血清中甘油三酯（TG）含量分别为313.10 ± 10.12、310.39 ± 31.76和310.1 ± 10.20 nmol/L,与正常对照组（330.80 ± 34.36 nmol/L）无显著差异（P>0.05）;黄酮各组灌胃干预后,小鼠血清总胆固醇（TC）、白介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量均较高脂模型组显著下降（P<0.05）。结论:利用纳豆芽孢杆菌发酵菜用大豆提高了其总黄酮含量,该黄酮提取物具有预防和缓解高脂饮食小鼠血脂升高的效果。