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新城疫病毒HN蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
【目的】应用酵母双杂交技术构建新城疫病毒的血凝素-神经氨酸酶(HN)蛋白线性中和表位区的诱饵载体pGBKT7-HN-neu,为筛选靶向新城疫病毒HN蛋白的中和性纳米抗体奠定基础。【方法】合成HN蛋白的线性中和表位区HN-neu,将其克隆至酵母双杂交系统诱饵载体pGBKT7中,构建诱饵载体pGBKT7-HN-neu,经酶切鉴定和测序验证正确后,将pGBKT7-HN-neu转化酵母菌Y2H Gold,检测其在酵母细胞中的毒性和自激活作用。【结果】成功合成了HN-neu,构建的pGBKT7-HN-neu在酵母细胞Y2H Gold中无毒性和自激活能力。【结论】成功构建了诱饵载体pGBKT7-HN-neu。 相似文献
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高效液相色谱法检测猪组织中硝基咪唑类药物残留 总被引:1,自引:0,他引:1
【目的】 建立猪肌肉、脂肪、肝脏和肾脏中羟基地美硝唑、洛硝唑、甲硝唑、替硝唑、地美硝唑和奥硝唑残留的高效液相色谱(HPLC)测定法。【方法】样品中硝基咪唑类药物用二氯甲烷萃取,盐酸反萃取。盐酸溶液用K2HPO4碱化,再用二氯甲烷反萃取,萃取液于40℃水浴中旋转真空蒸干。残余物用流动相0.5 ml溶解,进样分析。色谱柱为Hypersil ODS2,紫外检测器,检测波长320 nm。以甲醇﹕水(14﹕86,V﹕V)为流动相,进样量20μl。【结果】6种药物标准液浓度在0.005~2.0μg8226;ml-1时,与响应值呈良好线性关系,相关系数均>0.999。羟基地美硝唑、洛硝唑和甲硝唑在肌肉和脂肪组织中检测限为0.5μg8226;kg-1,在肝脏和肾脏中为1.0μg8226;kg-1; 替硝唑、地美硝唑和奥硝唑在肌肉、脂肪、肝脏和肾脏中均为1.0μg8226;kg-1。空白样品添加药物浓度为0.5~4.0μg8226;kg-1时,6种药物的回收率为60%~83%,日间变异系数均<15%。【结论】该方法能灵敏、准确的检测猪组织中硝基咪唑类药物。 相似文献
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地美硝唑(dimetridazole,DMZ)为硝基咪唑类药物,具有抗原虫和抗菌活性,同时具有很强的抗厌氧菌作用,用于治疗鸡组织滴虫病、猪密螺旋体性痢疾、肠道和全身的厌氧菌感染。但它有致癌、致突变及潜在毒性。地美硝唑的主要代谢物羟基地美硝唑(hydroxy dimetridazole,DMZOH)同样可能有致突变性,欧盟和美国都把地美硝唑列为禁用的兽药,我国规定地美硝唑的MRL为0。国外建立了多种检测动物组织中地美硝唑及其他硝基咪唑类药物的检测方法,主要有气相色谱法、高效液相色谱(HPLC)-电化学检测法、高效液相色谱-紫外法、质谱法等。国内谢凯舟等用HPLC测定地美硝唑在肉鸡组织中的残留,沈建忠等分别建立了检测鸡肉、家禽肌肉组织中硝基咪唑类药物的液相色谱法。有关同时检测DMZ和DMZOH的报道较少,且检测限高。因此建立了测定鸡肌肉组织中DMZ和DMZOH的高效液相色谱法。 相似文献
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高效液相色谱法检测鸡肌肉组织中地美硝唑及其羟基代谢物 总被引:1,自引:0,他引:1
地美硝唑(dimetridazole,DMZ)为硝基咪唑类药物,具有抗原虫和抗菌活性,同时具有很强的抗厌氧菌作用,用于治疗鸡组织滴虫病、猪密螺旋体性痢疾、肠道和全身的厌氧菌感染.但它有致癌、致突变及潜在毒性.地美硝唑的主要代谢物羟基地美硝唑(hydroxy dimetridazole,DMZOH)同样可能有致突变性,欧盟和美国都把地美硝唑列为禁用的兽药,我国规定地美硝唑的MRL为0.国外建立了多种检测动物组织中地美硝唑及其他硝基咪唑类药物的检测方法,主要有气相色谱法、高效液相色谱(HPLC)-电化学检测法、高效液相色谱-紫外法、质谱法等.国内谢凯舟等用HPLC测定地美硝唑在肉鸡组织中的残留,沈建忠等分别建立了检测鸡肉、家禽肌肉组织中硝基咪唑类药物的液相色谱法.有关同时检测DMZ和DMZOH的报道较少,且检测限高.因此建立了测定鸡肌肉组织中DMZ和DMZOH的高效液相色谱法. 相似文献
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纳米抗体(Nb)是一种新型基因工程抗体,因其分子量小、稳定性强、亲和力高、能识别隐蔽表位、组织穿透力强、易于制备、成本低廉且便于进行改造与修饰,是疾病诊断、治疗和研究的理想分子。因此,纳米抗体受到了的各国学者的广泛关注,在癌症、脑部神经性疾病、毒素中毒性疾病、艾滋病以及其它感染性疾病和蛋白质功能、晶体结构解析等领域已有大量的相关研究报道。本文主要就Nb在动物疫病防控中的研究与应用进行了总结,探讨了其在动物疫病诊断、治疗和研究方面的发展潜力,并对未来发展方向做出了展望。 相似文献
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为了建立特异性、敏感性和适用性强的LAMP检测方法,采用分子生物学方法,根据GenBank数据库中该细菌的outL基因,进行了多序列比对和保守区域确定。根据其保守序列,在线设计和筛选了一套LAMP引物。温度优化及特异性和敏感性验证后建立了检测该病菌的LAMP检测方法,并对青藏高原放牧牛、羊临床粪便样品进行了检测。结果表明,LAMP检测方法的最适温度为63℃;检测其与大肠杆菌、沙门氏菌、阪崎肠杆菌、金黄色葡萄球菌、多杀性巴氏杆菌及蜡样芽胞杆菌无交叉反应;检测下限为100 fg目的基因;利用建立的方法检测了208份放牧牦牛、藏羊粪便DNA样品,共检测到26份阳性样品,阳性率为12.5%。这表明成功建立了一种检测该病的特异性、敏感性和适用性强的LAMP检测方法。 相似文献
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HPLC法测定猪肉中磺胺类药物残留 总被引:3,自引:0,他引:3
采用HPLC测定猪肉中磺胺类药物的残留,以Cloversil C18色谱柱、甲醇-1%乙酸水溶液作为流动相进行梯度洗脱,柱温30℃,进样量5μL,流速0.6 mL/min,240-280 nm波长紫外检测.测定结果表明,猪肉中含有磺胺嘧啶、磺胺甲基异噁唑、磺胺噻唑、磺胺二甲嘧啶和磺胺喹噁啉等磺胺类药物.利用HPLC法检测猪肉中磺胺类药物残留快速、准确. 相似文献