PRV、PCV2与PPV三重PCR检测方法的建立与初步应用

为建立可同时检测猪伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)与猪细小病毒(PPV)的三重PCR方法,根据Gen Bank登录的病毒相关基因序列,选择保守区域设计引物,经过反应条件的优化,建立了可同时检测以上3种病毒的PCR诊断方法,扩增的目的片段长度分别为192 bp(PRV)、255 bp(PCV2)和759 bp(PPV)。对PRV、PCV2和PPV的核酸检测最低浓度分别为:2.5×10-2,2.2×10-3和3.7×10-2ng,证明该方法具有良好的特异性和较高的敏感性。应用该方法对56份临床样品进行检测发现,PRV、PCV2和PPV的阳性率分别为16.1%、50.0%和19.6%,二重感染率为12.5%,三重感染阳性率为3.6%。该方法的成功建立为快速高效地检测以上3种病毒提供了有效手段。     

2BQM-6型免耕播种机结构设计及开沟器的力学分析

保护性耕作技术因其具有减少风蚀、保墒、提前播种期等作用,近年来在北方干旱地区得到逐步推广。免耕播种机作为保护性耕作的主要机具,其使用性能直接影响着这一技术的应用。为此,根据目前免耕播种机存在的主要问题,设计了2BQM-6型气吸式免耕播种机,实现了切茬、排茬、施肥、播种及覆土镇压等联合作业。在此基础上,对该免耕播种机重要部件开沟器进行了力学分析,寻找出了开沟器最容易疲劳失效的部位。     

边界病病毒RT-PCR检测方法的建立和应用

边界病(border disease)由边界病病毒(border disease virus, BDV)引起,导致绵羊和山羊持续感染和繁殖疾病,2012年在国内首次报道,但目前尚无特异的RT-PCR方法对该病原进行检测。本研究通过比对黄病毒科瘟病毒属病毒的全基因组序列,以3′-UTR基因为靶基因,设计了特异扩增BDV的引物。通过构建重组质粒pMD18-T-BDV,以其作为标准品建立了BDV的RT-PCR检测方法。进一步优化该方法的反应条件,并进行特异性、敏感性及临床样品检测。结果显示,该方法在退火温度48～60℃时均可特异扩增BDV,通过检测牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV-1)、牛病毒性腹泻病毒2型(BVDV-2)和猪瘟病毒(CSFV)提取的RNA,该方法可特异扩增BDV而对其他同属病毒检测均呈阴性,表明其特异性良好;同时,该方法具有良好的敏感性,最低检出限可达10¹拷贝/μL,敏感性极高。利用该方法检测BDV持续感染羊和人工感染羊,发现持续感染羊的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、淋巴结、卵巢、脑等器官均可检测到BDV,而人工感染羊只能在感染3～7 d的血液和淋巴结...     

伪狂犬病病毒Guizhou-DY株gE基因主要抗原表位区原核表达及免疫原性研究

根据GenBank公布的伪狂犬病病毒GDSH株（EF552427）的gE基因序列设计1对特异引物,对伪狂犬病病毒 Guizhou-DY分离株的gE基因进行PCR扩增,将扩增产物克隆到pMD19-T载体上,构建重组质粒pMD19-T-gE636,经双酶切鉴定、核苷酸序列分析后,将gE基因主要抗原表位区亚克隆到pET-32a(+)原核表达载体上,成功构建原核表达质粒pET-32a(+)-gE636,并将其转化至BL21(DE3)中,诱导表达目的蛋白,表达产物经SDS-PAGE电泳、Western blot分析,得到了约42.7 ku的条带,与预期大小相符,进一步提取、纯化目的蛋白,将目的蛋白加入弗氏佐剂免疫小鼠,免疫后采血检测抗体,结果显示目的蛋白能诱导小鼠产生一定的抗体,该研究为伪狂犬病亚单位疫苗的研究奠定了基础。     

伪结核棒状杆菌的分离鉴定及病原性研究

从疑似羊干酪性淋巴结炎的肩前淋巴结脓肿中分离到1株细菌,经革兰氏染色为无芽孢的阳性棒状杆菌;伪结核棒状杆菌特异性引物进行PCR扩增测序表明,该细菌的序列与伪结核棒状杆菌同源性达99.0%以上,确定其为伪结核棒状杆菌。用15种常用抗生素纸片进行药敏试验,结果显示,该菌对青霉素、头孢曲松、左氧氟沙星和氟苯尼考高度敏感;对链霉素、丁胺卡那霉素、环丙沙星、林可霉素和大观霉素耐药。致病性试验发现,腹腔注射小白鼠的半数致死量为1×10-6.0CFU/m L;皮下注射小白鼠2 d后出现大小不等的脓肿;分别用2×108、2×106CFU/m L 2种剂量皮下注射羊后出现体温持续升高,接种部位和周边的浅表淋巴结出现脓肿,切开后有干酪样脓汁,并从病变器官和脓汁中分离到细菌。组织病理学观察显示,皮肤和肌肉层有坏死灶及肉芽肿形成,肌纤维断裂坏死,淋巴细胞浸润,淋巴结出现化脓灶,并有大量上皮样细胞和成纤维细胞增生。本研究为伪结核棒状杆菌疫苗研制及致病机理研究奠定了基础。     

农村养殖蛋鸡的常见误区

农村养殖专业户在饲养蛋鸡中存在种种误区．这在养鸡业形式不好、效益不佳的情况下，直接影响了蛋鸡饲养业的健康发展。     

猪细胞因子IL-2、IL-4和IFN-γ作为免疫增强剂和新型基因工程疫苗的研究

通过综述猪IL-2、IL-4和IFN-γ的基因结构、作为免疫佐剂和作为构建新型基因工程疫苗方面研究进展,以了解细胞因子IL-2、IL-4和IFN-γ的相关研究成果,为细胞因子进行更深入的研究提供参考。     

中草药添加剂对关岭黄牛生长及免疫功能的影响

为探明中草药添加剂对牛增重及免疫功能的影响,选取贵州关岭黄牛15头,随机分为对照组、试验Ⅰ组、试验Ⅱ组、试验Ⅲ组和试验Ⅳ组,每组3头,对照组饲喂基础日粮,试验Ⅰ～Ⅳ组分别在基础日粮中添加首乌、黄芪等12味中草药添加剂3％、4％、5％和6％,试验期29 d;试验前和试验后分别空腹称重,计算日增重、料肉比,并采集血样检测血常规指标、免疫球蛋白（IgG、IgA 和 IgM）含量变化。结果表明：在基础日粮中添加不同比例的中草药添加剂对关岭黄牛的增重均有促进作用,能提高大未染色细胞数和单核细胞百分率以及 IgG、IgM 和 IgA 的水平,降低中性粒细胞百分率和血小板平均体积。中药添加剂具有促进关岭黄牛增重、增强免疫功能的作用,其中以添加5％的比例最佳。     

猪伪狂犬病诊断技术研究进展

猪伪狂犬病是由猪疱疹病毒1型所引起的猪、羊、牛等多种家畜及野生动物的一种以发热、奇痒(猪除外)、脑脊髓炎为主要症状的急性传染病。各种年龄的猪都易感,且流行广泛,严重制约了养猪业的发展。猪伪狂犬病临床上常与猪圆环病毒病、猪繁殖与呼吸综合征以及猪细小病毒病等常见的猪病毒病混合感染,且临床症状较为相似。目前该病的诊断技术主要有临床诊断方法、病原学诊断方法、免疫学诊断方法及分子生物学诊断方法等。近年来随着科学技术的迅猛发展,灵敏度高、特异性强的分子生物学诊断技术越来越受人们重视。本文针对该病最新的诊断技术进行综述,以期为猪伪狂犬病的防治提供参考。     

规模化猪场主要病毒性腹泻病的临床表现及病理变化

对规模化猪场危害最大的病毒性腹泻病主要有轮状病毒感染、猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻3种。对于该类疫病,猪群有时单一感染其中的某一病毒致病,有时混合感染多种病毒致病,但这些传染病一旦在规模化猪场暴发,就很难得到有效控制,将会带来严重的经济损失。对规模化猪场的主要病毒性腹泻病的临床表现及病理变化进行了综述,以期为规模化猪场预防和控制该类疫病的发生提供一些参考依据。