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利用猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)GP5抗原表位串联表达重组蛋白作为包被抗原,建立检测PPRSV抗体的间接ELISA方法。重组蛋白最佳包被浓度为7.5 μg/mL,最佳封闭液为5%脱脂奶粉,37 ℃封闭2 h;血清最适稀释度为1∶100,37 ℃作用2 h;兔抗猪IgG/辣根酶(HRP)(1∶3000),37 ℃作用2 h;37 ℃避光显色15 min读取D450 nm值。结果经统计学分析得出,S/P值≥0.254为阳性,S/P值≤0.212为阴性。所建立的ELISA方法检测其他5种猪常见病原阳性血清,其D450 nm值均小于0.212。利用建立的ELISA方法对临床免疫勃林格殷格翰猪繁殖与呼吸综合征活疫苗4周后的猪血清70份进行检测,其D450 nm值均大于0.85,表明本研究建立的重组GP5表位蛋白间接ELISA方法可用于临床样品的监测。 相似文献
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猪流行性腹泻病毒ORF3和M基因的克隆与序列分析 总被引:2,自引:0,他引:2
为了解福建省猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)毒株ORF3和M基因变异情况,本研究从4个不同规模猪场发生仔猪“顽固性腹泻”疾病的病料中扩增到4株PEDV的ORF3和M基因,并进行了序列分析.结果表明:4株PEDV ORF3基因均含有675个碱基,编码224个氨基酸,与GenBank中登录的代表性PEDV核苷酸的同源性为89.7%~100.0%,氨基酸的同源性为94.7%~99.6%,其中FJPT毒株核苷酸的同源性与CV777 truncated毒株最低,仅为89.7%,FJNP毒株核苷酸的同源性与中国北方流行的CH ZKFG 11毒株最高,达100.0%.M基因含有681个碱基,编码226个氨基酸,与GenBank中登录的代表性PEDV核苷酸的同源性为94.8%~100.0%,氨基酸的同源性为94.8%~99.6%,其中FJPT毒株核苷酸的同源性与日本D89752毒株最低,仅为94.8%,FJNP毒株核苷酸的同源性与韩国CPF193、泰国毒株最高,达100.0%.4株PEDV毒株均与国内外流行强毒株的亲缘关系较近,与attenuate DR13弱毒株的亲缘关系较远. 相似文献
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1 生物技术在禽病病原学研究上的应用1.1 单克隆抗体在病毒蛋白结构及功能检测中的应用单克隆抗体是针对单一抗原决定族的同质性抗体,所以,可以将其作为探针用于病毒的抗原表位的定位、抗原表位的数量及相互关系的研究。由于单克隆抗体与相应的抗原决定族相结合能抑制抗原的功能,因此,单克隆抗体也可以用于抗原性蛋白生物性功能的研究。如单克隆抗体用于NDV的HN蛋白抗原定位和F蛋白空间结构和抗原性的研究。1.2 单克隆抗体技术用于病毒变异分析及毒株分型单克隆抗体仅仅识别一个抗原位点,用抗病毒蛋白的单克隆抗体就可以检测出各种… 相似文献
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猪繁殖与呼吸综合征病毒灭活疫苗安全性和免疫原性测定 总被引:1,自引:0,他引:1
选用猪繁殖与呼吸综合征病毒福建分离株(PRRSV Fuzhou 01株)为制苗种毒。病毒经Marc 145细胞增殖、超速离心浓缩、甲醛灭活后,分别制成新型佐剂IMS1312灭活疫苗和油乳剂灭活疫苗,两种疫苗病毒含量约为108.0TCID50.mL-1。30头25日龄的PRRSV抗体阴性的断奶猪被随机分成5组,每组6头,用于检测疫苗的安全性和免疫原性。结果表明两种疫苗首次免疫断奶仔猪后14 d可以检测到抗体,二免14 d抗体水平达到高峰,一免180 d后抗体水平可以维持在1∶320。两种佐剂苗在4℃放置12个月均不分层,并对断奶仔猪具有良好的安全性和免疫原性。 相似文献
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将减蛋综合征(EDS-76)H株和新城疫(ND)La Sota弱毒株分别接种鸭胚和鸡胚,收获胚液(HA价分别达2~(15)和2~(11)以上),福尔马林灭活后配制成EDS-ND二联油佐剂灭活苗。经无菌与安全性检验,免疫效力测定和田间应用结果表明,该苗安全性良好,于蛋鸡开产前1个月左右皮下或肌肉注射0.5ml/羽,免疫后21天HI抗体效价均达1:2~(10)以上,免疫期达6个月以上。 相似文献
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单克隆抗体与免疫荧光染色技术 总被引:6,自引:0,他引:6
自从Kohla和Milstein于1975年首创杂交瘤技术以来,单克隆抗体已应用于免疫学、生理生化、药理学、组织学、肿瘤学、微生物学等不同的学科,其应用之广、发展之快,促使医学、生物学领域起着巨大的变革.单克隆抗体是利用细胞融合技术,在体外大量培养融合细胞,由融合细胞产生大量的抗体.由于单克隆抗体只识别某一特定的抗原决定簇,所以它具有特异性强、成分均一、灵敏度高、产量大、容易标准化生产等优点而明显优于多克隆抗体.目前世界上己建立的单克隆抗体品种数以万计,其中数千种已经上市. 相似文献