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经Tris—HCl缓冲液(pH8.6)抽提,正丁醇脱脂,硫酸绥分级沉淀分离,DEAE—Sepharose Fast Flow和Sephacryl S-200柱层析,从黄鳝内脏中提取出电泳纯的碱性磷酸酶。用PCMB,NBS,PMSF,TNBS,SUAN,DTT及IAA在一定条件下选择性修饰该酶的各种氨基酸残基,并对酶活力的变化作出测定。结果表明,PMSF,NBS,TNBS,SUAN和DTT的修饰能显著抑制酶的活性,且酶活力降低程度与修饰别的浓度相关;IAA和PCMB的修饰不表现对酶的抑制作用。初步认为,Ser,Lys和Trp残基为黄鳝碱性磷酸酶的必需功能基团,部分二硫键对保护酶的催化能力是必需的。 相似文献
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采用NBS、PMSF、IAc、BrAc、SUAN、TNBS、PCMB、DTT以及金属离子和相关试剂在一定条件下选择性修饰蔗糖酶.结果表明:0.5mmol/L的PMSF使酶活性丧失95%,10/μmol/L的NBS使酶活性丧失93%0.5mmol/LNPCMB使酶活性降至12%,酶修饰呈一级反应,推测Trp、Ser的残基可能是薄荷叶片蔗糖酶的活啦必需基团,而His、Lys的残基不在薄荷蔗糖酶的活性中心. 相似文献
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鸭肝蛋白酶的分离纯化及其部分性质研究 总被引:1,自引:1,他引:1
经Tris-HCl缓冲液抽提、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析、Sephacryl S-200凝胶过滤层析,得到鸭肝蛋白酶电泳纯制品.纯化倍数为650.16倍,回收率为19.23%.经SDS-PAGE和凝胶过滤测得该酶的分子量为35kD.该酶在pH6.0~11.0,温度低于25℃稳定,当温度上升到55℃时活性迅速下降.该酶在pH10和60℃时达到最高活性.进一步研究得知:Cu^2+离子对该酶有明显促进作用,而Mn^2+却使酶几乎失活.以酪蛋白为底物,在pH10.0、37℃时测得米氏常数Km值为1.33%. 相似文献
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[目的]探讨ALP的作用机理,促进黄鳝水产养殖。[方法]研究多种金属离子、有机溶剂等效应物对黄鳝内脏碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。[结果]Na+、K+离子对酶活力影响不大,Mg2+和Ca2+离子对ALP有激活作用,Li+、Cu2+、Zn2+对ALP的酶活力则有抑制作用;酶催化磷酸苯二钠的产物HPO42-及产物类似物WO43-对酶均有较强的抑制作用,其中9.5 mmol/L的HPO42-使酶活力降低13%,而9.5 mmol/L的WO43-使酶活力降低34%,它们对酶活性的抑制类型均为竞争性抑制;有机溶剂甲醇、乙醇、乙二醇、异丙醇对ALP均有一定抑制作用,其抑制作用强弱顺序为异丙醇〉乙醇〉甲醇〉乙二醇。[结论]该研究从动力学角度探讨各种效应剂对黄鳝内脏ALP活性的影响,为进一步阐明ALP作用机理提供了依据。 相似文献
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经10 KD的膜超滤,DEAE-Sepharose离子交换柱层析,Sephacryl S-200凝胶过滤纯化,从薄荷(Mentha haplocalyx Briq)幼叶中分离纯化出电泳纯的转化酶,该酶提纯倍数为186.3倍,比活力为67.06 U/mg.酶学性质和动力学性质研究表明:该酶不可逆催化蔗糖生成果糖和葡萄糖,最适pH值为5.0,最适温度为55℃,米氏常数Km值为12.25 mmol/L. 相似文献
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鸭肝碱性磷酸酶的分离纯化及其部分性质研究 总被引:1,自引:0,他引:1
经过匀浆、正丁醇除脂、硫酸铵分级分离、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换柱层析、Sephacryl S-200凝胶过滤等步骤,从鸭肝中分离纯化出电泳纯的碱性磷酸酶,该酶纯化倍数达58.3倍,比活为337.4U/mg.经SDSPAGE和凝胶过滤测得该酶的全分子量为121.0kD,亚基分子量为60.5kD.以磷酸苯二钠为底物,测得该酶的最适pH为9.0,最适温度为40℃.Na^+、K^+、Li^+等一价离子对该酶活性基本无影响,Mg^2+、Mn^2+对该酶活性有激活作用,Cd^2+对该酶活性有抑制作用.米氏常数Km为1.28mmol/L. 相似文献