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成功克隆了A型肉毒毒素重链C片段部分基因.以肉毒梭菌(62A)基因组DNA为模板,以此基因特异性引物为介导,采用Touchdown PCR方法,从肉毒梭菌基因组中扩增出目的基因片段后,将其克隆入T载体,进行酶切鉴定和序列分析.结果表明,此基因片段与(Genbank中的BoNTa基因(收录号:M30196)核苷酸序列的同源性为100%,说明目的基因得到了成功地克隆,为后续研究奠定了基础. 相似文献
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[目的]获得抗Cu2+的单克隆抗体。[方法]以异硫氰酸苄基乙二胺四乙酸(ITCBE)为双功能螯合剂,使Cu2+分别与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)偶联,获得免疫原(Cu-ITCBE-BSA)和检测原(Cu-ITCBE-OVA)。用非变性聚丙烯凝胶电泳鉴定偶联结果。免疫Balb/C小鼠,通过细胞融合,获得能稳定分泌抗Cu2+的杂交瘤细胞株,并通过亲和层析法纯化腹水获得抗Cu2+的单克隆抗体。[结果]获得了1株能稳定分泌抗Cu2+的单克隆抗体的细胞株(4A6),所分泌的抗体亚类为IgG1,细胞培养上清效价可达1∶1.0×103,腹水效价可达1∶6.4×105。以该细胞株接种Balb/C小鼠腹腔,获得抗Cu2+的腹水型单抗;该腹水经过亲和层析法纯化后,纯度可达95%。[结论]获得了抗Cu2+的单克隆抗体,为环境水样中Cu2+的免疫学检测奠定基础。 相似文献
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试验旨在鉴定吉林省某雏鸡孵育基地病死雏鸡组织中分离出的1株致病性菌CCGGD201101株并测定其致病性。对疑似致病菌进行生理生化试验、16S rDNA测序鉴定,并人工接种昆明鼠,测定其半数致死量,验证细菌毒力。经鉴定该菌为鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)。以鲍曼不动杆菌CCGGD201101分离株为研究对象,并以鲍曼不动杆菌标准株(ATCC 19606)为对照,测得半数致死量,进一步证明鲍曼不动杆菌病死鸡分离株CCGGD201101具有较强致病性。 相似文献
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本研究旨在克隆白介素1β(IL-1β)全长cDNA,为深入研究其生物学功能提供全长cDNA信息和试验材料.本试验利用前人构建的布鲁氏菌强、弱毒株感染小尾寒羊白细胞层抑制性差减杂交(SSH)cDNA文库,获得小尾寒羊IL-1β部分cDNA序列信息,利用cDNA末端快速扩增技术(RACE),克隆小尾寒羊IL-1β全长cDNA,并申请GenBank登录号KC425612.2.该cDNA全长1494 bp,含有801 bp开放阅读框(ORF),可编码266个氨基酸残基,预测其编码蛋白分子质量为30.622 ku,与林麝、牛、海豚、虎鲸的IL-1β一致性较高,亲缘关系较近. 相似文献
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Hepcidin(Hepc)是一类性质独特的抗菌肽,具有广谱的抗革兰氏阳性、阴性细菌和真菌等作用。利用RT-PCR和RACE等技术,从经过多种细菌攻毒的花鲈(Lateolabrax japonicus)肝组织中克隆出Hepc全长cDNA,命名为Hepc2,Genbank登录号为AY604195。Hepc2有581个碱基,其中阅读框有258个碱基,编码86个氨基酸。预测氨基酸序列和白鲈及其他鱼种在相同保守的区域有8个半胱氨酸,相对分子量为9418.55dal。在3’非编码区有225bp,包含终止密码子下游189nt处的多腺苷酸化AATAAA信号和212nt处的polyA信号。预测蛋白的信号肽断裂位点在第24和第25个密码子之间。通过与白鲈(Morone chrysops)、人和其他鱼种来源的Hepc cDNA和蛋白质同源性分析表明,从花鲈肝中分离的Hepc2 cDNA属于Hepc基因家族的新成员。 相似文献
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从疑似患猫鼻气管炎的幼猫鼻拭子样品分离到1株猫疱疹病毒(FHV-HB),对该分离株进行了形态学、血清学、免疫原性和动物回归试验分析。结果显示,分离毒株FHV-HB在电镜下具有疱疹病毒粒子的典型形态特点。第5代细胞培养物的病毒滴度为107.5 TCID50/mL,灭活后免疫猫并进行攻毒试验,免疫组猫全部存活,对照组猫全部发病甚至死亡。结果表明本试验分离到的FHV-HB株免疫原性较好,并且具有较强的毒力,既可作为疫苗生产用候选毒株,也可作为疫苗评价用候选毒株,为猫鼻气管炎疫苗研发提供毒种和科学依据。 相似文献
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试验旨在对羊白介素1受体颉颃因子(interleukin-1 receptor antagonist,IL-1Ra)基因进行全长cDNA克隆及生物学分析。根据布鲁氏菌感染羊白细胞层SSH cDNA文库中的IL-1Ra基因序列信息及已知核苷酸序列(GenBank登录号:KC425613.1)设计引物,利用RT-PCR结合RACE方法扩增并克隆IL-1Ra基因,对其进行序列及相关分子特性分析。结果表明,羊IL-1Ra基因全长为1 228 bp,可编码174个氨基酸,含有1个完整的IL-1保守结构域和1个IL-1Ra结构域(PHA02651结构域)。IL-1Ra分子质量为19 765.8 u,等电点(pI)为5.72,其分子式为C885H1385N235O256S11,且含有信号肽。二级结构分析显示,IL-1Ra分子存在较多的β折叠及受体结合位点,与三级结构预测结果一致,且与人/鼠IL-1Ra分子的空间结构相似度极高,达到90%以上。羊IL-1Ra有IL-1特有的三叶草结构,其酶结合结构域位于TYR47至GLU66之间。将羊IL-1Ra与牛、虎鲸、宽吻海豚、猪、家犬、人、鼠等14个物种进行蛋白质同源性比对,发现在各物种间存在5个高度同源的半胱氨酸位点。系统进化树分析发现,羊IL-1Ra基因全长cDNA所编码的氨基酸序列同山羊、牛单独形成一个分支。本研究结果为今后深入研究IL-1Ra基因的生物学功能奠定了基础。 相似文献
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