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HBx基因下调p21对HepG2细胞增殖与凋亡的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:构建转基因细胞模型HepG2/HBx,观察HBx基因对HepG2细胞增殖、周期和凋亡的影响, 探讨细胞周期蛋白P21在其中的作用和意义.方法:应用脂质体转染和G418筛选构建稳定表达HBx的转基因细胞HepG2/HBx,RT-PCR和Western blot鉴定HBx mRNA与蛋白的表达.分别以四唑蓝(MTT)比色法、流式细胞术检测HepG2/HBx细胞及对照组HepG2与HepG2/pcDNA3.1细胞(转染空载体pcDNA3.1的HepG2细胞)的增殖、周期和凋亡.另半定量RT-PCR检测各组细胞中细胞周期蛋白P21与抑癌基因p53mRNA的表达.结果:HepG2/HBx细胞中有HBx mRNA和蛋白的表达.HepG2/HBx细胞生长速度加快.HepG2/HBx中G0/G1期细胞比例较对照组显著减少(43.34%±3.11%vs57.69±4.28%,P<0.01),S期细胞比例明显增加(28.69%±1.17%vs22.41%±1.99%,P<0.05),同时还发现与对照组相比其凋亡率也显著降低(1.19%±0.06%vs 5.43%±0.42%, P<0.001).细胞周期蛋白p21 mRNA在HepG2/HBx细胞中的表达较对照组细胞显著降低(0.16±0.05vs0.78±0.15,P<0.001),而p53表达则无显著变化.结论:HBx基因可下调细胞周期蛋白P21mRNA的表达,可能参与HBx基因加速HepG2细胞周期进程、促进细胞增殖以及抑制细胞凋亡的作用. 相似文献
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目的 探讨沉默热休克蛋白(HSP)70-2对肝癌细胞生长、凋亡的影响,以及诱导肝癌细胞凋亡的详细作用机制. 方法 Westem blot、免疫细胞化学法检测HSP70-2在4种肝癌细胞和正常肝细胞中的表达.设计合成针对HSP70-2基因的特异性短发夹状RNA(shRNA),构建真核表达载体HSP70-2 shRNA1和HSP70-2 shRNA2.转染肝癌细胞后,四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖,膜联蛋白/碘化丙啶双染法检测细胞凋亡情况,罗丹明染色检测细胞线粒体跨膜电位变化,Western blot检测多聚ADP-核糖聚合酶、caspase-3、caspase-9蛋白切割情况,以及细胞色素C、Bax,Bcl-2蛋白的表达变化. 结果 HSP70-2在4种肝癌细胞中均高表达,在L02细胞中仅有微量表达.HSP70-2 shRNA1、shRNA2均能有效抑制肝癌细胞中HSP70-2的表达.沉默HSP70-2基因显著抑制肝癌细胞生长,诱导肝癌细胞凋亡,转染48 h后,shRNA1和shRNA2诱导HepG2细胞的凋亡指数分别为55.8%±1.8%和57.1%±1.6%,诱导Huh细胞凋亡指数分别为54.9%±1.1%和60.2%±2.6%,与对照组相比,差异均有统计学意义,P值均<0.01.转染HSP70-2 shRNA 48 h后,肝癌细胞线粒体跨膜电位显著下降,细胞色素C从线粒体释放到胞质中,caspase-3、caspase-9激活,多聚ADP核糖聚合酶被剪切降解,抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少,促凋亡蛋白Bax表达明显增加.结论 沉默HsP70-2能通过激活线粒体凋亡通路导致肝癌细胞凋亡. 相似文献
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目的构建小鼠内皮抑制素(endostatin)真核表达质粒,进行分泌性表达,研究其体外生物学活性,以进一步用于肿瘤的基因治疗。方法人工合成小鼠Igκ轻链信号肽序列,RT-PCR获得小鼠内皮抑制素编码序列,一起克隆入真核表达载体pcDNA3.1中,对其进行酶切鉴定和序列分析。重组质粒经脂质体介导转染受体细胞BHK-21,ELISA检测细胞培养上清中内皮抑制素的含量。用此上清作用于经bFGF刺激的ECV304内皮细胞和HepG2肝癌细胞,MTT法检测细胞的增殖。结果经酶切鉴定及DNA测序分析,Igκ信号肽序列及内皮抑制素编码序列成功克隆到目的位点上,其转染细胞上清中可以检测到分泌出的内皮抑制素,含量为(65.5±10.9)ng/106细胞;并且可以抑制ECV304内皮细胞的增殖,抑制率约为29.2%,而对HepG2肝癌细胞增殖没有影响。结论成功构建了小鼠内皮抑制素真核质粒,其分泌性表达产物可以抑制内皮细胞的增殖,具有较好的生物学活性。 相似文献
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化疗联合重组Endostatin对小鼠种植瘤的治疗作用 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:了解化疗联合重组Endostatin对小鼠种植瘤的治疗作用。为肿瘤的免疫治疗提供条件。方法;构建小鼠En-dostatin原核表达质粒,在大肠杆菌表达小鼠Endostatin融合蛋白,分离纯化后,与丝裂霉素C联合应用,治疗种植在小鼠腿部肌肉内的小鼠肝癌H22肿瘤。观察瘤重,免疫组化检测肿瘤血管密度和肿瘤坏死情况。结论:单纯应用重组Endostatin治疗种植瘤即产生明显的抑制作用。和化疗合用后,抑制作用更强,肿瘤血管密度减少,肿瘤细胞大量坏死。 相似文献
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目的 观察神经生长因子(NGF)在原发性肝癌组织中的表达及在患者血清中的含量,了解血清NGF水平与肝癌临床病理特征的关系. 方法 26例肝细胞癌及对应癌旁组织,采用半定量PCR、免疫印迹及免疫组织化学分析NGF mRNA和蛋白的表达及其分布.健康对照者、慢性肝炎、肝硬化及肝癌患者共150例,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清NGF的水平,分析其临床意义.两组之间差异的显著性比较用t检验、Mann-Whitney U检验,多组之间差异的显著性比较应用Kruskal-Wallis H检验.数据均采用SPSS 11.5统计软件处理.结果 肝癌组织中NGF在mRNA及蛋白水平的表达高于癌旁组织,NGF主要分布于肝细胞胞质.血清NGF水平:肝癌组、肝硬化组、慢性肝炎组患者和正常对照组分别为(33.86±16.11)pg/ml、(20.57±9.73)pg/ml、(13.20±6.23)pg/ml和(11.13±6.12)pg/ml,肝癌组、肝硬化组显著高于慢性肝炎组患者和正常对照组,x2值分别为39.119和12.041,P值均<0.01.肿瘤直径大于5cm及TNM分级为Ⅲ、Ⅳ级的肝癌患者血清NGF的水平高于肿瘤直径小于5cm及TNM分级为Ⅰ、Ⅱ级的患者.结论 NGF在肝癌组织中高表达,肝癌患者血清NGF水平明显升高,与肿瘤体积和TNM分级相关,提示NGF在肝癌的发生和发展过程中可能发挥一定作用,血清NGF有助于肝癌患者的病情评估和预后估计. 相似文献
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目的:探讨学员轮流演示点评方法在胃镜教学中的应用价值。方法:以消化内镜培训基地胃镜初学人员51名为研究对象,采用回顾性队列研究方法,根据学员初学胃镜时所接受的教学方法分为对照组(采用传统教学法)和实验组(采用学员轮流演示点评法)。通过问卷形式调查二组学员在本中心初学胃镜情况,以评价两种胃镜教学方法的培训效果。结果:实验组学员在术前准备和揣摩、注意操作细节、操作规范、观察全面、进步速度、学员满意度等方面均优于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:学员轮流演示点评教学相对于传统胃镜教学,有利于提高教学效果,学员满意度更高,值得进一步探索和推广。 相似文献
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原发性肝癌合并胆道出血致急性胰腺炎1例 总被引:1,自引:0,他引:1
原发性肝癌可继发多种并发症,其中胆管癌栓临床上较少见,胆道出血及急性胰腺炎比较罕见.因此,通过报道该例患者的诊治经过,阐述原发性肝癌并胆管癌栓及其相关并发症的诊治进展.本研究认为内镜逆行胰胆管造影术(endoscopic retrograde cholangiopancreatography,ERCP)技术对于原发性肝癌合并胆管癌栓致胆道出血、急性胰腺炎患者的早期诊治具有重要价值,对于无法耐受手术的患者可结合肝动脉化疗栓塞(transcatheter hepatic arterial chemoem-bolization,TACE)治疗有效控制癌栓出血,从而有助于延长患者生存期以及改善生活质量. 相似文献
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小鼠内皮抑制素原核表达质粒的构建及表达 总被引:2,自引:1,他引:1
内皮抑制素具有强烈的抑制新生血管形成的作用,其主要在肝脏合成。提取小鼠肝细胞总RNA,设计合适的引物,用RT-PCR扩增出小鼠内皮抑制素cDNA片段,插入原核表达载体pRSET-A中,构建出重组质粒pRSET-ES。将其转化入大肠杆菌DH5α中扩增,质粒酶切筛选,DNA测序予以证实。重组质粒转化入大肠杆菌BDPS中,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测到约19.8ku大小的融合蛋白。 相似文献
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我院消化内镜中心2009年1月至2011年4月胃镜检查发现胃石症患者25例,部分患者口服可口可乐治疗后胃石明显缩小、软化或溶解,配合内镜下机械碎石取得了良好效果,现总结如下。 相似文献