pcDNA3.1(-)/PSMA7真核表达质粒的构建及其在A549细胞中的表达

目的 构建pcDNA3.1(-)/PSMA7真核表达质粒并建立人肺腺癌细胞株A549的稳定表达株.方法 采用RT-PCR法从正常人支气管上皮细胞株HBE135-E6E7中克隆得到PSMA7 cDNA全长序列,将之与pMD18-T载体连接.双酶切和测序鉴定后,再将PSMA7片段亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-)上.构建好的pcDNA3.1(-)/PSMA7真核表达质粒经双酶切和测序鉴定后,经脂质体转染法转入A549细胞株中,经CA18筛选,得到阳性克隆细胞株,再用RT-PCR及Westem blotting法检测转染后PS-MA7的mRNA及蛋白表达水平.结果 pcDNA3.1(-)/PSMA7质粒经双酶切鉴定和DNA测序证实.目的 基因PSMA7的序列完全正确,真核表达质粒构建成功.RT-PCR检测显示,转染pcDNA3.1(-)/PSMA7组的PSMA7 mRNA表达水平(2.698±0.661)明显高于未转染组(1.243±0.176)和转染pcDNA3.1(-)组(1.198±0.514,P<0.05),后两者间无明显差异.Western blotting检测同样显示,转染pcDNA3.1(-)/PSMA7组的蛋白表达水平(1.978±0.661)明显高于未转染组(0.891±0.234)和转染pcDNA3.1(-)组(0.782±0.375,P<0.05),后两组间亦无明显差异.结论 成功构建了PSMA7基因的真核表达质粒,并建立了稳定表达PSMA7的A549细胞株,为后续研究奠定了基础.     

应用GSP筛查新生儿G6PDd的性能验证及cut-off值设定

目的 对全自动荧光免疫分析仪(GSP)检测干血片葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)的性能进行验证,并初步建立该方法筛查葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症(G6PDd)的cut-off值。方法 前期确定验证方案,对试剂盒自带标准品B、D、E 3个浓度的标本,L、H两个浓度的质控品及试剂盒自带标准品B、C、D、E、F 5个浓度标本进行GSP系统的精密度、正确度和线性范围的验证。采用GSP和目前临床常规使用的Victor2D 1420型荧光免疫分析仪(半自动荧光免疫分析仪)同步检测2 742例新生儿干血片G6PD水平,比较两种仪器结果,并使用百分位数分布及受试者工作特征(ROC)曲线初步建立中山市博爱医院产前诊断中心GSP筛查G6PDd时G6PD水平的cut-off值。结果 应用GSP检测G6PD时,批内变异系数分别为2.09%、1.54%和1.90%,总变异系数分别为3.08%、1.72%和2.12%,分别小于厂家声明的3.40%和3.90%;质控浓度L的25份标本的测量总均值与靶值的相对偏差为3.84%,质控浓度H的25份标本的测量总均值与靶值的相对偏差为3.44%;5个浓度标本的检测值和理论...     

40例亲属活体肾移植临床报告

目的：总结我中心4年40例亲属活体肾移植的经验.方法：40例患者中3例为夫妻间供肾,其余为血缘亲属供肾.术前均行HLA配型、PRA及淋巴毒试验检查.手术全为开放手术取肾,取左肾32例,右肾8例;受者均为第一次接受肾移植手术.术后以环孢素A（或他克莫司）、霉酚酸酯及泼尼松三联抗排斥反应治疗.结果：供者术后1周内出院,随访至今,肾功能均正常.受者术后36 d内出院,出院时肾功能正常,随访2～48月,未见肾功能异常病例. 结论：术前对供、受者的正确评价及成熟的手术技术是手术成功的保证,术后坚持随访和合理应用免疫抑制剂是受者长期存活的关键.亲属活体肾移植组织配型好,术前可充分准备,术后用药量少,手术成功率和长期存活率高,是一种安全可靠经济的治疗手段.     

水蛭提取物对大鼠大脑皮层神经细胞缺氧性坏死的保护作用

目的研究水蛭提取物对体外培养新生大鼠大脑皮层神经细胞缺氧性坏死的保护作用。方法采用MTT法观察水蛭提取物对体外缺氧培养的神经细胞坏死的影响。结果水蛭提取物在0．5-2mg／ml浓度范围有抗神经细胞缺氧性坏死作用,其神经细胞坏死率明显下降,较凋亡模型组有显著性差异（P〈0．05）,且随着浓度增加其抗缺氧性坏死作用随之增大。结论水蛭提取物对体外培养神经细胞缺氧性坏死有明显的保护作用。     

人泛素偶联酶UBE2C/UbcH10基因的克隆、原核表达载体的构建及表达

目的 获取泛素偶联酶家族成员之一的UBE2C/UbcH10的基因,构建具有His标签的原核表达载体,在大肠杆菌中表达UBE2C/UbcH10蛋白.方法 利用RT-PCR的方法 从肝癌细胞HepG2中获得UbcH10的基因,克隆到pMD-19T载体中并测序鉴定,酶切回收后插入原核表达载体pET32a(+)中,构建重组表达载体pET32a-UbcH10,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达.结果 重组表达载体pET32a-UbcH10在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导4h获得稳定高效的融合表达.重组蛋白以可溶形式存在,大小在29.0 kD左右.结论 UbcH10重组表达载体的成功构建以及重组蛋白的表达,为进一步其结构和功能的研究奠定了基础,有望揭示该蛋白在癌症发生发展过程中的作用.     

泊马度胺联合地塞米松治疗系统性轻链型淀粉样变性的临床观察

目的：观察泊马度胺联合地塞米松(PD)方案治疗系统性轻链型(AL型)淀粉样变性的疗效及安全性。方法：回顾性研究国家肾脏疾病临床医学研究中心应用PD方案治疗的AL型淀粉样变性患者,观察疗效和不良反应。结果：共纳入19例患者,其中男性9例、女性10例,起病年龄59±11岁,心脏受累比例31.58%,肾脏受累100%。有2例初治患者,难治和复发患者各7例,3例一线治疗有效但不耐受。患者中位接受2(1,4)周期泊马度胺治疗,总血液学反应31.58%,初治者血液学反应为50%,难治者28.57%,复发者42.86%,且血液学反应均在治疗4周期内获得;有2例(10.53%)心脏受累程度进展,其余维持稳定;6例(31.58%)肾脏进展,3例(15.79%)部分缓解,2例(10.53%)较好的部分缓解,8例(42.11%)维持稳定。3级及以上不良发生发生率为21.04%,主要为乏力、白细胞减低、血清肌酐升高和腹胀及水肿,停药及对症治疗可缓解。结论：PD方案是治疗AL型淀粉样变性安全有效的候选方案之一,部分患者可获得早期快速的血液学缓解,长期疗效有待进一步观察。     

新生儿脐带血红细胞指标在新生儿地中海贫血筛查中的价值

目的:探讨新生儿脐带血红细胞指标与地中海贫血的相关性,揭示其在新生儿地中海贫血筛查中的临床价值.方法:收集2017年7月至2018年12月在南方医科大学附属中山市博爱医院出生的2 919例新生儿脐带血,进行血常规检测,另采集外周血检测地中海贫血基因,确定各指标中的cut-off值,并计算灵敏度、特异度等评价指标.结果:...     

pcDNA3.1-HMOX1重组质粒载体的构建与鉴定

目的：构建pcDNA3．1－HMOX1重组质粒载体。方法使用基因合成法合成HMOX1基因,在其N端添加Kozak序列及His标签序列,将扩增后的目的基因双酶切连接至pcDNA3．1载体的BamHⅠ和 NotⅠ之间。转化DH5α大肠杆菌后,挑取阳性克隆子进行质粒抽提电泳及测序鉴定。结果 pCDNA3．1－HMOX1重组质粒经酶切电泳及DNA测序证实,目的基因HMOX1的序列完全正确,重组质粒载体构建成功。结论成功构建pCDNA3．1－HMOX1融合基因并在DH5α大肠杆菌内表达,为进一步探讨HMOX1的生物学功能奠定了基础。     

喜炎平注射液联合哌拉西林他唑巴坦治疗老年性肺炎临床观察

老年性肺炎是由细菌、真菌、病毒、支原体或其他微生物等引起的感染性肺部疾病。老年人因免疫功能下降,抵抗力差,且多数患者具有基础疾病,入院前在社区或门诊应用抗生素多次治疗,使细菌产生耐药性,普通抗菌素单一治疗效果差,病程长。我们应用喜炎平注射液联合哌拉西林他唑巴坦治疗老年性肺炎,报道如下。     

pCDNA3.1-MT2A真核表达载体的构建及亚细胞定位

目的:构建pCDNA3.1-MT2A真核表达载体并观察其在293T和SMMC7721细胞株中的定位和表达情况。方法:使用基因合成法合成MT2A基因,在其N端添加Kozak序列及His标签序列,将扩增后的目的基因双酶切连接至pcDNA3.1(+)载体的BamHⅠ和NotⅠ之间。转化DH5α大肠杆菌后,挑取阳性克隆子进行质粒抽提电泳及测序鉴定。将鉴定正确的pCDNA3.1-MT2A质粒采用脂质体法转染293T和SMMC7721细胞株,激光共聚焦显微镜观察其在真核细胞中的表达和定位情况。结果:pCDNA3.1-MT2A重组质粒经酶切电泳及DNA测序证实,目的基因MT2A的序列完全正确,真核表达载体构建成功,激光共聚焦观察发现该重组质粒表达于293T和SMMC7721细胞的胞质中。结论:成功构建pCDNA3.1-MT2A融合基因并进行真核表达,发现MT2A主要定位于293T和SMMC7721细胞的细胞质中。本研究为探讨MT2A在肝癌细胞内的功能奠定了基础。