血压对rt-PA静脉溶栓后发生早期神经功能恶化及MMP-9水平的影响

目的探讨血压水平与rt-PA静脉溶栓后发生早期神经功能恶化的相关性及机制。方法对280例急性缺血性脑卒中rt-PA静脉溶栓患者为研究对象,收集一般基线资料,患者根据收缩压水平分为4组,采集患者治疗前后静脉血,测定血浆SOD、MDA、MMP-9水平,并进行为期3 m的随访,评估神经功能恢复情况。结果静脉溶栓后发生早期神经功能恶化与否,在性别、危险因素、发病到溶栓时间、血脂、血糖、白细胞计数、尿酸方面无明显差异,在溶栓24 h内收缩压水平、年龄、溶栓前NIHSS评分方面有统计学意义。在静脉溶栓24 h内将收缩压水平控制在140~159 mmHg,可上调SOD表达水平,下调MDA及MMP-9表达水平,减少静脉溶栓后发生早期神经功能恶化概率,增加患者神经功能恢复,改善预后。结论血压水平与阿替普酶静脉溶栓后发生早期神经功能恶化密切相关,氧化应激产物及MMP-9在其间可能发挥着作用。     

初级纤毛与Hedgehog信号通路相关性研究

早在20世纪中期以前,初级纤毛被认为是没有任何功能的原始运动纤毛的退化器官.但是近年发现初级纤毛参与了细胞内信号传导等一系列细胞过程,从而调控动物的发育和各种器官的正常生理功能.Hedgehog信号通路对胚胎发育、器官形成具有重要作用.     

白藜芦醇诱导大鼠骨髓基质细胞的神经元样细胞分化伴Shh信号激活

目的 研究Sonic Hedgehog(Shh)信号在白藜芦醇诱导大鼠骨髓基质细胞(marrow stromal cells,MSCs)分化为神经元样细胞中的作用.方法 采用全骨髓贴壁法分离培养MSCs.MSCs分为3组,白藜芦醇诱导组:用含白藜芦醇的无血清DMEM/F12诱导MSCs分化;对照组:用无血清DMEM/F12诱导MSCs分化;正常组:不做诱导处理.倒置显微镜下观察细胞形态,免疫荧光法、免疫印迹法检测NSE、MAP-2、GFAP、Smo和Gli1蛋白的表达和移位.结果 白藜芦醇诱导后细胞胞体收缩,伸出长突起,类似神经元.免疫荧光显示正常组及对照组MSCs轻度表达神经元NSE蛋白,白藜芦醇诱导组MSCs NSE、MAP-2阳性,但诱导前后细胞始终未表达胶质细胞GFAP蛋白.免疫荧光显示,MSCs具有初级纤毛,并表达Smo和Gli1.白藜芦醇诱导组Smo从细胞质进入初级纤毛,Glil从细胞质进入细胞核,同时,Smo、Glil蛋白的表达增加(P＜0.01).对照组则无明显变化.结论 白藜芦醇能诱导MSCs分化为神经元样细胞;此过程中Shh信号通路被激活,推测Shh信号在MSCs分化过程中可能发挥着重要作用.     

TGF-β1通过上调Shh 信号诱导大鼠脑膜成纤维细胞向肌成纤维细胞转化

目的 探讨TGF-β1在诱导脑膜成纤维细胞转化为肌成纤维细胞中对Shh信号的影响。方法 新生24 h SD大鼠脑膜原代成纤维细胞经Ⅳ型胶原酶提取纯化。原代脑膜成纤维细胞随机分为3个组：分别为空白对照组、10 ng/mL TGF-β1处理组（TGF-β1组）、10 ng/mL TGF-β1联合20 μmol/L TGF-β1受体抑制剂SB-431542组(TGF-β1+SB组)。各组细胞在药物处理前均用无血清培养基培养24 h后换用加入了药物的DMEM/F12完全培养基处理72 h。采用CCK-8法检测各实验组成纤维细胞的增殖能力;细胞划痕实验检测各实验组成纤维细胞的迁移能力;免疫荧光法检测各实验组纤维连接蛋白（Fn）的表达;Western blotting检测各实验组Fn、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Shh蛋白的表达;q-PCR检测各实验组细胞Shh mRNA的表达。结果 TGF-β1可促进原代脑膜成纤维细胞的增殖（P<0.05）;TGF-β1可促进原代脑膜成纤维细胞的迁移（P<0.05）。TGF-β1可促进成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化并增加Fn的分泌（P<0.05）。TGF-β1处理后可上调Shh蛋白和mRNA的表达（P<0.05）,TGF-β1受体抑制剂SB-431542则可抑制TGF-β1引起的原代脑膜成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化并减少纤维连接蛋白的分泌（P<0.05）。结论 TGF-β1可通过上调Sonic Hedgehog信号通路中Shh蛋白的表达,诱导脑膜成纤维细胞转化为肌成纤维细胞。     

白藜芦醇在缺氧缺糖再灌注损伤不同时间窗对大鼠皮质神经元氧化应激的影响

目的研究白藜芦醇在缺氧缺糖再灌注损伤不同时间窗对大鼠皮质神经元氧化应激的影响。方法大鼠皮质神经元缺氧缺糖处理150min,随即恢复正常培养24h。实验分为6组,即正常组、模型组、白藜芦醇预处理组(在缺氧缺糖前加入白藜芦醇干预24h)、造模时处理组(从缺氧缺糖开始加入白藜芦醇干预直至再灌注损伤后24h)、造模后处理组(从缺氧缺糖后加入白藜芦醇干预直至再灌注损伤后24h)和全程处理组(从缺氧缺糖前24h开始加入白藜芦醇干预直至再灌注损伤后24h)。倒置显微镜下观察细胞形态,用化学比色法测定神经元超氧化物歧化酶(SOD)活性以及一氧化氮(NO)的含量,免疫荧光检测观察核因子E2相关因子2(Nrf2)的核移位情况,免疫印迹法检测神经元Nrf2、血红素加氧酶1(HO-1)和苯醌氧化还原酶(NQO-1)蛋白表达。结果培养至第6天,神经元立体感及折光性强。与模型组比较,在白藜芦醇全程处理组中,各浓度(10、20、40、60、80μmol/L)白藜芦醇均可升高神经元SOD活性(P<0.05),降低NO含量(P<0.05),其中以40μmol/L白藜芦醇作用最佳;在缺氧缺糖再灌注损伤的不同时间窗内给予白藜芦醇干预,均能减轻缺氧缺糖再灌注导致的细胞损伤,促进Nrf2蛋白从细胞质转移到细胞核,上调Nrf2、HO-1和NQO-1蛋白的表达,其中全程处理组作用最佳,其次为预处理组。结论白藜芦醇对缺氧缺糖再灌注损伤的神经元有剂量依赖性的抗氧化应激作用,而且全程处理组作用最佳,预处理组次之。其机制可能是通过激活Nrf2/抗氧化反应元件(ARE)信号通路进而上调抗氧化蛋白的表达而实现。     

血浆B型脑钠肽前体和D-二聚体水平对急性脑梗死预后的影响

目的探讨急性脑梗死患者血浆B型脑钠肽前体(NT-proBNP)和D-二聚体水平对预后的影响。方法采用前瞻性对照研究。急性脑梗死组50例,为发病24h内住院的脑梗死患者;对照组20例,为本院同期的非脑血管疾病患者。观察指标:入院时血浆NT-proBNP和D-二聚体水平;患者一般情况;脑梗死面积;NIHSS评分;随访3个月时的预后。结果脑梗死组入院时血浆NT-proBNP和D-二聚体水平显著高于对照组(P<0.05);大面积脑梗死组NT-proBNP和D-二聚体水平显著高于非大面积脑梗死组(P<0.0 5)。有意识障碍者和高血压组血浆NT-proBNP和D-二聚体水平明显高于无意识障碍和正常血压组。随访3个月时,10例死亡,死亡组血浆NT-proB-NP和D-二聚体水平高于存活组。结论急性脑梗死后血浆NT-proBNP和D-二聚体水平增高。梗死面积越大,血浆NT-proBNP和D-二聚体水平越高,脑梗死预后越差。因此,血浆NT-proBNP和D-二聚体水平有可能成为监测脑梗死患者病情变化和预测预后的重要及快捷的指标之一。     

初级纤毛在白藜芦醇诱导大鼠骨髓基质细胞分化为神经元样细胞中的作用

目的:研究初级纤毛在白藜芦醇诱导大鼠骨髓基质细胞(MSCs)分化为神经元样细胞中的作用.方法:全骨髓贴壁法分离、培养、纯化MSCs.含15 μmol/L白藜芦醇的无血清DMEM/F12诱导MSCs分化.倒置显微镜下观察细胞形态,免疫印迹检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)、微管相关蛋白-2(MAP-2)的表达.免疫荧光法检测MSCs增殖情况.扫描电子显微镜检测MSCs表面初级纤毛,免疫荧光法检测初级纤毛蛋白(Ac-Tu)的表达.结果:白藜芦醇诱导后60％的细胞胞体收缩,立体感增强,类似神经元.免疫印迹显示MSCs及对照组细胞有NSE蛋白的轻度表达,诱导后NSE、MAP-2蛋白表达阳性,随着诱导时间延长,NSE、MAP-2的表达渐增强.经过24 h饥饿后,90％的MSCs处于生长静止状态.扫描电子显微镜及免疫荧光显示,处于生长静止期的MSCs具有初级纤毛,且白藜芦醇可诱导具有初级纤毛的MSCs分化为神经元样细胞.对照组则无明显变化.结论:白藜芦醇能诱导MSCs分化为神经元样细胞.在此过程中,初级纤毛可能发挥着重要作用.     

抑制Sonic Hedgehog信号能抑制脑缺血性损伤后纤维瘢痕形成且不利于神经功能恢复

目的 探讨抑制Sonic Hedgehog（Shh）信号对脑缺血性损伤后纤维瘢痕形成及神经功能的影响。方法 构建体内成年SD大鼠大脑中动脉闭塞/再灌注（MCAO/R）模型和体外新生24 h SD大鼠脑膜原代成纤维细胞氧糖剥夺/再复氧（OGD/R）模型。成年SD大鼠随机分成假手术组、缺血/再灌注组（I/R）、缺血再灌注腺病毒空载（rAd-NC）组和缺血再灌注腺病毒敲低Shh（rAd-ShShh）组。SD大鼠脑膜原代成纤维细胞随机分成正常组、缺血对照组、肿瘤生长因子-β1预处理组（TGF-β1）、TGF-β1预处理加环王巴明组（TGF-β1+CYC）。每组细胞被预处理24 h经OGD/R 150 min后复氧72 h。采用改良神经严重程度评分（mNSS）、改良Bederson评分评估神经功能缺损。CCK-8法测定细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,免疫荧光法检测缺血中心纤维连接蛋白（Fn）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Shh的表达,TUNEL染色检测缺血中心细胞凋亡,实时荧光定量PCR（qPCR）法检测缺血中心Fn、α-SMA及Shh mRNA的表达,WB法检测OGD/R后成纤维细胞Shh、α-SMA蛋白的表达。结果 体内实验中免疫荧光法及qPCR法结果显示与假手术组相比SD大鼠MCAO/R后可诱导缺血侧大脑半球Shh、α-SMA 、Fn蛋白和mRNA的表达升高（P<0.05）。而与MCAO/R组相比,rAd-Shshh组缺血侧大脑半球Shh、α-SMA、Fn蛋白和mRNA的表达降低（P<0.05）,缺血侧组织细胞的凋亡增加（P<0.05）,改良神经严重程度评分（mNSS）、改良Bederson评分增高（P<0.05）。体外研究中CCK-8实验显示与正常组和缺血对照组相比TGF-β1组A值升高（P<0.05）,而TGF-β1+CYC组与TGF-β1组相比A值没有明显差异（P>0.05）。细胞划痕实验结果显示与正常组和缺血对照组相比在24 h内TGF-β1组成纤维细胞的迁移距离增加（P<0.05）,而TGF-β1+CYC组与TGF-β1组相比成纤维细胞的迁移距离减少（P<0.05）。免疫荧光实验、Western blot及qPCR显示与正常组和缺血对照组相比TGF-β1组细胞Shh、α-SMA和Fn的表达升高（P<0.05）,而TGF-β1+CYC组与TGF-β1组相比Shh、α-SMA和Fn的表达降低（P<0.05）。结论 抑制Shh信号能抑制脑缺血性损伤早期纤维瘢痕的形成且不利于神经功能的恢复。     

住院老年患者社会支持与住院情况的相关性分析

目的 探讨社会支持与住院老人入院一般情况和结局事件(好转、自动出院或死亡)的相关性。方法 纳入我院老年医学科2018年1月至2019年1月入院的1 457例患者,分析患者家庭人均收入、居住环境、家庭照护情况、与家属的亲密程度等社会支持情况对患者近1年内住院次数、入院时日常生活能力(Bathel ADL)以及结局事件(死亡或自动出院)的影响。应用SPSS 22.0软件进行统计学分析,单因素相关性分析采用 Spearman 相关分析,多因素相关性分析采用 logistic 回归分析。结果 纳入患者的年龄、家庭人均收入、入院时Bathel ADL、慢病个数与患者近1年内住院次数相关(r=0.47、0.49、-0.45、0.69,P<0.05);logistic回归分析显示患者近1年内住院次数与年龄、家庭人均收入、入院时Bathel ADL有关(OR=2.73、2.15、3.51,P<0.05)。年龄影响患者入院时的Bathel ADL水平(r=-0.62,P<0.05)。结局事件(死亡或自动出院)与年龄、家庭人均收入、与家属亲密程度、Bathel ADL及慢病个数相关(r=0.70、-0.17、0.56、0.52、0.69,P<0.05);logistic回归分析显示患者结局事件与家庭人均收入、与家属亲密程度及入院时Bathel ADL有关(OR=4.22、1.65、4.81,P<0.05)。结论 年龄、家庭人均收入与入院时Bathel ADL影响患者住院次数及出院转归,提高社会经济水平及加强对老年人的关爱,可改善患者住院相关负性事件的发生。