中药肝毒性研究方法技术的新进展及其应用

中药肝毒性问题受到了日益广泛的重视。目前,肝细胞系、亚细胞、三维培养、模式动物等体内体外模型在中药肝毒性的筛选中发挥着重要作用。随着现代系统观和整体论的引入,基因组学、蛋白质组学、代谢组学以及网络毒理学等新方法开始逐步应用于中药肝毒性标志物挖掘和肝毒性预警等方面。该文通过总结近年来中药肝毒性研究领域的成果,分析和探讨其中存在的主要问题,提出具有中医药特色的"结合病/证模型和网络毒理学的中药量-效-毒关系研究"的新思路,同时也对该课题组开展的淫羊藿潜在肝毒性的初步研究进行了概述,希望能为中药肝毒性的评价方法和技术指导原则提供理论基础,推动中药肝毒性研究体系的发展与完善。     

肠康方对肠易激综合征内脏高敏感模型大鼠的作用

[目的]探讨肠康方对肠易激综合征(IBS)内脏高敏感模型大鼠的作用.[方法]制备肠易激综合征内脏高敏感模型,将72只Sprague-Dawley大鼠随机分为6组,即模型组,空白对照组,阳性药物对照组,肠康方高、中、低剂量组.在造模第60天开始灌胃给药或0.9％氯化钠溶液共10d,干预后通过腹肌回缩反射(AWR)半定量评分测定大鼠内脏敏感性.[结果]不同压力下模型组AWR评分显著高于空白对照组,肠康方高、中、低剂量组治疗后AWR评分均显著低于模型组(P＜0.05或P＜0.01).[结论]肠康方可通过改善内脏高敏感治疗IBS.     

犀角地黄汤对脑缺血大鼠的自噬相关蛋白Atg-5、Be-clin-1表达的研究

目的探讨犀角地黄汤对内毒素诱导下持续性大脑中动脉栓塞模型(pMCAO)大鼠脑组织的自噬相关Atg-5、Beclin-1蛋白的mRNA表达,以及透射电镜下观察染色的LC-3抗体表达。方法造模后进行分组,并采用不同剂量犀角地黄汤进行干预,分别提取RNA、PCR检测Rat-atg-5、Beclin-1基因表达,透射电镜下观察染色的LC-3抗体表达。结果 "瘀热"证pMCAO模型大鼠中Atg-5、Beclin-1mRNA、模型组Atg-5和Beclin-1mRNA明显上升,犀角地黄汤中剂量治疗组和阳性药组与模型组比较均显著降低其表达。LC-3抗体染色颗粒提示,空白组表达不明显,模型组造模成功,尤其在第6天,模型组明显增多;阳性药组明显抑制LC-3的表达,第3和第6天到达最佳;低剂量组抑制效果不明显;中剂量组抑制效果好于高剂量组,第6天抑制效果最佳。结论犀角地黄汤通过显著的降低Atg-5、Beclin-1mRNA的表达,以及明显抑制LC-3的表达,能够起到脑保护的作用。     

雪胆素片联合阿霉素增强细胞免疫原性死亡的抗肝癌作用研究

目的 研究雪胆素片联合阿霉素协同抗肝癌的作用,以及对细胞免疫原性死亡相关蛋白表达的调控。方法 采用高效液相色谱法对雪胆素片主要成分进行分析;采用MTT法考察雪胆素片与阿霉素联合使用对人肝癌HepG2细胞存活率的影响;采用平板克隆观察雪胆素片与阿霉素联合使用对HepG2细胞集落形成的影响;采用流式细胞仪分析雪胆素片与阿霉素联合使用对HepG2细胞凋亡率和细胞周期的影响;采用免疫荧光检测免疫原性细胞死亡关键指标钙网蛋白（calreticulin,CRT）和高迁移率蛋白1(high mobility group protein B1,HMGB1)表达;采用ELISA法检测细胞内外三磷酸腺苷（adenosine triphosphate,ATP）浓度。建立小鼠肝癌H22细胞皮下移植瘤模型观察雪胆素片与阿霉素联合使用的体内抗肿瘤效果;采用免疫组化法检测小鼠肿瘤组织CRT和HMGB1表达;采用苏木素-伊红（HE）染色法观察雪胆素片与阿霉素联合使用对小鼠心肌毒性的影响。结果 雪胆素片联合阿霉素对HepG2细胞具有浓度相关性的细胞毒性和促凋亡作用,可促进CRT膜外暴露,HMGB1向胞外分泌,ATP胞外...     

潜在肝毒性中药的成分研究进展

近年来,中药在科研中所占的比例及其临床上的使用量逐渐增高。其研究价值也越来越大,然而中药在使用过程中随之而来的毒副作用也引起人们越来越多的关注。随着中药毒性研究逐渐深入,一些传统性的无毒中药也被发现有潜在的毒性。除了中草药的本身对肝脏有损伤作用之外。还包括以下原因:1中药在生长、加工、炮制、运输等环节上受到污染或变质也会引起对机体的副作用;2临床上应该以中医理论为指导合理用药,应当遵循对症用药,配伍得当的原则;3患者体质皆不相同,除了少部分品种中药是固有型肝毒性中药外,大部分中药的潜在肝毒性具有特异质型的特征。肝脏在药物代谢中发挥重要的作用,容易受到药物的损伤作用,因此中药潜在肝毒性及其毒性成分研究成为中药研究的基本领域之一。该文在查阅肝毒性文献的基础上,归纳了肝毒性的临床分型,靶细胞损伤发病机制,并且系统的对中药潜在肝毒性成分及其毒性机制进行了一定的总结。以期为中药肝毒性研究提供思路,为中药临床安全用药提供保障。     

姜黄素纳米混悬剂在大鼠体内药代动力学考察

目的: 探讨姜黄素纳米混悬剂在大鼠体内的药代动力学过程。方法: 将同等剂量的姜黄素原料药与姜黄素纳米混悬剂分别灌胃给2组大鼠,于灌胃后20,40 min和1,2,4,6,8,12,24 h眼底静脉丛取血,采用HPLC测定血浆姜黄素含量,Xterra C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),C₁₈预柱(4.0 mm×2.0 mm),柱温35℃,流动相甲醇-1%乙酸水溶液(78:22),流速1.0 mL·min^-1,进样量20 μL,计算姜黄素最低定量限,同时测定血浆中姜黄素原料药与姜黄素纳米混悬剂的药代动力学参数。结果: 血浆中姜黄素的定量限15 μg·L^-1(S/N>10),低、中、高质量浓度的提取回收率(x±s,n=5)分别为(91.3±5.7)%,(93.0±4.1)%,(93.3±5.2)%。姜黄素纳米混悬剂的Cmax和AUC均显著高于姜黄素原料,Cmax分别为(863.1±390.4),(91.8±22.9) μg·L^-1;原料药和混悬剂的Tmax分别为(4.4±2.2),(4.8±4.4) h,t1/2分别为(4.6±3.2),(5.4±3.7) h,均无显著性变化。结论: 建立的HPLC分析条件稳定可靠,纳米混悬剂能明显促进姜黄素的吸收,提高其生物利用度,但吸收和代谢速度无明显差异。     

一种感染后咳嗽动物模型制作方法的建立及评价

目的：评价用小剂量内毒素（LPS）滴鼻诱导慢性吸入纸烟烟雾的大鼠,建立感染后咳嗽（PIC）动物模型的方法。方法：采用随机数字表法将50只SPF级雄性纯白SD大鼠分为空白组、感染后咳嗽模型A组、模型B组、模型C组、模型D组。首先迫使各模型组大鼠慢性吸入纸烟烟雾造成其气道高反应,然后分别用浓度为0.2mg/mL、0.4mg/mL、0.6mg/mL、1mg/mL的LPS溶液滴鼻诱导大鼠气道炎症,最后用辣椒素刺激法创建PIC动物模型。观察大鼠行为变化及咳嗽性质,检测BALF中细胞分类计数,经TP-603T型传感器测定咳嗽反应性;HE染色观察肺组织病理变化。结果：①模型A组与B组大鼠咳嗽频发,且咳嗽动作较典型,其中模型B组更明显。②咳嗽反应性测定：各模型组与空白组相比5min内咳嗽次数均有明显增加（P〈0.001）,但数据分析显示A组、B组更具有统计学差异。③模型A组与B组BALF中白细胞总数、巨噬细胞、中性粒细胞及淋巴细胞比率与空白组相比均有明显差异（P〈0.05）,其中B组差异更显著（P〈0.01）。④病理结果显示模型A组与B组大鼠均出现气道炎症表现,尤以模型B组更为明显,而均未见明显的肺间质炎症和肺泡的融合。结论：用小剂量LPS滴鼻诱导慢性吸入纸烟烟雾的大鼠建立PIC动物模型的方法可使大鼠咳嗽反应性增高,并产生显著的气道炎症改变,而肺实质则无明显炎症表现。     

HPLC-MS-MS法测定大鼠血浆中6种CYP450探针药物及甘草对CYP450酶活性的影响

目的: 建立高效液相色谱-二级质谱联用(HPLC-MS-MS)法同时测定大鼠血浆中6种细胞色素P450(CYP450)探针药物,即非那西丁、甲苯磺丁脲、奥美拉唑、酒石酸美托洛尔、氯唑沙宗和睾酮,并用于体内评价甘草对CYP1A2,CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6,CYP2E1,CYP3A4酶活性的影响. 方法: 采用汉邦C₁₈柱(2.0 mm×150 mm,5 μm),流动相为甲醇-0.1%甲酸水溶液(70:30),流速为0.2 mL·min^-1,柱温35℃.电喷雾离子化,检测方式为多反应离子监测.大鼠分为2组,分别ig生理盐水和甘草提取液,连续10 d,于第11天给予大鼠探针药物,用HPLC-MS-MS法测定6种探针药物的血药浓度,并分析比较其药动学参数. 结果: HPLC-MS-MS方法的灵敏度、精密度、回收率及稳定性良好.甘草能明显诱导大鼠体内CYP1A2,CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6,CYP2E1的活性,抑制 CYP3A4的活性. 结论: 本法简便、准确,适用于甘草或其他药物对CYP450同工酶活性的研究.     

泽兰通过保护糖萼核心蛋白缓解高糖诱导的肾小球内皮细胞损伤

目的:观察泽兰对肾小球内皮细胞(glomerular endothelial cells,GECs)糖萼核心蛋白的影响,揭示泽兰缓解高糖诱导GECs损伤的机制.方法:高糖环境下培养大鼠GECs,予泽兰及厄贝沙坦含药血清处理2 d,收集处理后的细胞,West-ern blot 检测大鼠GECs糖萼核心蛋白Syndecan...     

痛宁胶囊对硝酸甘油型偏头痛大鼠下丘脑、脑干NOS和5-HT表达的影响

目的 通过观察痛宁胶囊对偏头痛大鼠下丘脑、脑干一氧化氮合酶(NOS)及五羟色胺(5-HT)表达的影响,探讨痛宁胶囊治疗偏头痛的神经生物学机制.方法 SD大鼠随机分成6组:空白对照组、模型对照组、阳性药物对照组、研究药物组(痛宁胶囊高、中、低剂量组).除空白对照组外,其余各组采用皮下注射硝酸甘油法复制大鼠偏头痛模型.30min后研究药物组给予痛宁胶囊药液高、中、低剂量灌胃.阳性药物对照组按照6mg/kg给予琥珀酸舒马普坦药液灌胃.空白对照组和模型对照组均给予等容积的蒸馏水灌胃.造模4h后取脑组织标本,采用免疫组化SABC法观察下丘脑、脑干NOS、5-HT表达情况.结果 模型对照组大鼠下丘脑、脑干NOS表达明显增强,而5-HT表达显著降低,与空白对照组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);痛宁胶囊尤其是高剂量组能显著抑制偏头痛大鼠下丘脑、脑干增强的NOS表达,而且能明显上调5-HT的表达,与模型对照组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);痛宁胶囊尤其是高剂量组与阳性药物组比较统计学无显著性差异.结论 痛宁胶囊可以降低NOS的表达及上调5-HT的水平,这可能是其治疗偏头痛的作用机制之一.