黑色浅灰链霉菌次级代谢产物杀螺活性及其作用机制初步研究

目的　评价放线菌黑色浅灰链霉菌（Streptomyces nigrogriseolus XD 2⁃7）代谢产物储存稳定性及其分离纯化产物实验室杀螺活性,并初步探讨其杀螺作用机制。方法　制备黑色浅灰链霉菌发酵上清液,将其于-20 ℃、4 ℃和28 ℃无光照条件下放置10 d后,测定其72 h浸杀灭螺效果;将发酵上清液置于100 ℃水浴中煮沸30 min后恢复至室温,测定其72 h浸杀灭螺效果;用浓盐酸和氢氧化钠调节发酵上清液pH值为4.0、6.0和9.0,室温下静置12 h,再调节发酵上清液pH至7.0,测定其72 h浸杀灭螺效果。用大孔树脂、硅胶和十八烷基硅烷键合硅胶依次对黑色浅灰链霉菌发酵产物进行4次分离纯化,将最终分离纯化产物配置成10.00、5.00、2.50、1.25 mg/L和0.63 mg/L浓度药液,测定其72 h浸杀灭螺效果。各实验设立空白对照组以脱氯水处理,阳性对照组以0.10 mg/L氯硝柳胺处理。采用高效液相色谱法测定经纯化代谢产物浸泡后钉螺软体组织中三磷酸腺苷（adenosine triphosphate, ATP）和二磷酸腺苷（adenosine diphosphate, ADP）含量。结果　黑色浅灰链霉菌发酵上清液在-20 ℃、4 ℃和28 ℃无光照条件下放置10 d后,原液及稀释10、50倍药液浸杀钉螺72 h,钉螺死亡率均为100.00%（30/30）;经100 ℃煮沸30 min后,原液及稀释10、50倍药液浸杀钉螺72 h,钉螺死亡率均为100.00%（30/30）。发酵上清液在pH值为4.0、6.0条件下存储12 h后浸杀钉螺72 h,钉螺死亡率均为100.00%（30/30）;在pH值为9.0条件下存储12 h后浸杀钉螺72 h,钉螺死亡率为33.33% (10/30,[χ2] = 30.000,P < 0.05)。发酵上清液最终分离纯化产物100.00%（30/30）杀死钉螺所需最低浓度为1.25 mg/L。以0.10 mg/L和1.00 mg/L浓度最终分离纯化产物处理钉螺后,钉螺软体组织中ATP水平较对照组显著降低（F = 7.274,P < 0.05）,ADP水平与对照组差异无统计学意义（F = 2.485,P > 0.05）。结论　黑色浅灰链霉菌代谢产物中杀螺活性成分可在-20 ℃、4 ℃和28 ℃条件下稳定储存10 d,且耐热、耐酸而不耐碱,其杀螺机制可能是使钉螺能量代谢发生紊乱而死亡。     

氯硝柳胺乙醇胺盐喷雾剂的研究Ⅱ预防耕牛日本血吸虫感染效果的现场观察

目的现场观察氯硝柳胺乙醇胺盐喷雾剂预防耕牛日本血吸虫感染的效果,为实施以传染源控制为主的血吸虫病综合防治策略提供技术支撑。方法以血吸虫病流行区江西省永修县吴城镇160头耕牛为实验对象,对实验耕牛逐一编号,收集牛粪采用顶管孵化法检查耕牛血吸虫感染情况。在给予吡喹酮治疗后,全部粪检阴性实验耕牛随机分成A、B、C 3组:A组每隔15 d采用氯硝柳胺乙醇胺盐喷雾剂对耕牛全身喷药1次,剂量为每次500 ml/头;B组每隔30 d采用氯硝柳胺乙醇胺盐喷雾剂对耕牛全身喷药1次;C组为对照组,每隔15 d采用不含氯硝柳胺乙醇胺盐的空白剂对耕牛喷药1次。试验期间,每隔30 d采用顶管孵化法检查全部试验耕牛血吸虫感染情况。结果持续喷药90 d后,喷药组A、B及对照组耕牛血吸虫病患病率分别为4.00%、4.08%和24.49%;与对照组相比,喷药组A和喷药组B耕牛血吸虫病患病率分别下降83.67%和83.34%。结论采用氯硝柳胺乙醇胺盐喷雾剂对耕牛进行全身喷药可预防耕牛感染日本血吸虫,降低耕牛血吸虫病患病率。     

羊在日本血吸虫病传播中的作用Ⅱ温度和湿度对羊粪中虫卵存活的影响及虫卵在自然环境中的存活状况

目的调查羊粪中日本血吸虫虫卵在江滩自然环境中的存活情况及其影响因素,为研究羊在日本血吸虫病传播中的作用提供实验依据。方法建立日本血吸虫感染山羊动物模型,收集感染性山羊粪便,观察环境温度和羊粪含水量对羊粪中日本血吸虫虫卵孵化率的影响。选择江堤外一块草滩作为实验现场,观察春、冬季羊粪在江滩的暴露时间对虫卵孵化率以及阳光直晒对虫卵生存的影响。结果在25℃实验室环境中,羊粪中日本血吸虫虫卵孵化率与羊粪含水量呈高度正相关(r=0.87)。当羊粪含水量降至7.6%时,虫卵失去孵化能力。保持羊粪含水量不变,将羊粪暴露在-5℃环境中,随暴露时间延长,粪便中虫卵孵化率逐渐降低;暴露5 h后,孵化率降至0。将羊粪样本暴露于5、15℃和25℃环境中,随暴露时间延长,粪便中虫卵孵化率逐渐降低,暴露52 d后仍有2.3%、5.0%和0.9%虫卵存活并可孵化出毛蚴。将羊粪暴露于35℃环境中,随暴露时间延长,粪便中虫卵孵化率逐渐降低,暴露13 d后孵化率降为0。冬季(气温-2~10℃)随暴露时间延长,暴露于江滩滩面的羊粪中虫卵孵化率逐渐下降,暴露21 d后孵化率降至0。春季(气温16~19℃)随暴露时间延长,暴露在江滩滩面的羊粪中虫卵孵化率逐渐下降,暴露5 d后虫卵孵化率降至0.9%。同一滩块暴露相同时间后,暴露在有阳光直晒滩面羊粪中的虫卵孵化率低于无阳光直晒滩面。结论羊粪中的日本血吸虫虫卵生存与环境温度和羊粪含水量(即湿度)有关,温度和湿度是影响虫卵孵化的主要自然因素。     

基于WebofScience数据库评估我国在血吸虫病研究领域的发展

目的从文献计量学角度分析2000-2009年我国血吸虫病研究领域的发展。方法以美国IslwebofScience的ScienceCitationIndexExpanded（SCIE）引文数据库为检索对象,检索2000-2009年间SCIE收录的有关我国血吸虫病和血吸虫学方面的文献,分别对不同机构、著者的发文量、被引频次,文献来源期刊及论文学科分布、h指数等进行统计分析。结果2000～009年间我国发表血吸虫病和血吸虫相关文献527篇,分布于100种期刊;各年发表的文献数量总体上呈上升趋势;主要学科分布为寄生虫学,热带医学,公共、环境和职业卫生学．免疫学及生物化学与分子生物学。2000-2009年我国血吸虫病研究领域的论文数量、被引频次等取得了较大发展,但与美国、澳大利亚等发达国家相比,无论是国家、机构、作者发文量,还是被引频次及h指数,仍然存在差距。结论近年来,我国在血吸虫病领域研究发展较快,但与发达国家相比仍有较大差距。中国血防工作者需进一步提高血防科研水平和论文质量。     

氯硝柳胺乙醇胺盐降解规律研究 Ⅱ同位素示踪及光解终产物含量测定

目的观察同位素示踪技术解析氯硝柳胺乙醇胺盐(NES)在水体中的稳定性及测定光解终产物CO2的变化。方法实验室配制pH5的0.05μg/ml、pH7的0.5μg/ml和pH9的2.5μg/mlNES溶液,采用氙灯光源作为模拟日光照射上述NES溶液,照射8、16、24、32、40、48h和72h后,分别测定NES溶液在光解管顶的气态样品,采用GasBenchⅡ进样针插入直接分析;液体样品则取2.5ml注入用高纯氦吹过的密封顶空样品瓶中,用加酸泵滴加无水磷酸,30℃超声反应1h,再插入GasBenchⅡ进样针进行分析;与DELTAPLUS/XP稳定同位素质谱仪联用测定光解产物CO2的量及碳稳定同位素。结果在氙灯光光照条件下,pH70.5μg/ml和pH92.5μg/mlNES溶液的光解,随光照时间的增加,CO2的量也增加,并呈线性增长,72h时其产量接近NES的实际产量。同位素结果显示,随光照时间的增加,CO2的碳同位素值逐渐变负,72h时接近NES原药的碳同位素值,为-25.36±0.11,光降解已接近完全。而pH50.05μg/mlNES溶液的光解,随光照时间的增加,CO2的量也在增加,但其产量超出了NES的实际产量;同位素结果显示,随光照时间的增加,产出CO2的碳同位素值逐渐变负,但在光照16h后其产CO2的碳同位素值比NES的碳同位素值偏负。结论 NES能够在水中快速光解,终产物为CO2。     

基于WebofScience数据库评估我国在血吸虫病研究领域的发展

目的从文献计量学角度分析2000-2009年我国血吸虫病研究领域的发展。方法以美国IslwebofScience的ScienceCitationIndexExpanded（SCIE）引文数据库为检索对象,检索2000-2009年间SCIE收录的有关我国血吸虫病和血吸虫学方面的文献,分别对不同机构、著者的发文量、被引频次,文献来源期刊及论文学科分布、h指数等进行统计分析。结果2000～009年间我国发表血吸虫病和血吸虫相关文献527篇,分布于100种期刊;各年发表的文献数量总体上呈上升趋势;主要学科分布为寄生虫学,热带医学,公共、环境和职业卫生学．免疫学及生物化学与分子生物学。2000-2009年我国血吸虫病研究领域的论文数量、被引频次等取得了较大发展,但与美国、澳大利亚等发达国家相比,无论是国家、机构、作者发文量,还是被引频次及h指数,仍然存在差距。结论近年来,我国在血吸虫病领域研究发展较快,但与发达国家相比仍有较大差距。中国血防工作者需进一步提高血防科研水平和论文质量。     

血吸虫对吡喹酮抗药性的研究XIIV湖沼型流行区日本血吸虫对吡喹酮的敏感性评价

目的比较中国大陆湖沼型流行区日本血吸虫不同分离株对吡喹酮的敏感性,为建立吡喹酮敏感性检测/监测技术提供实验依据。方法从湖南、湖北、江西、安徽和江苏5省湖沼型血吸虫病流行区现场采集感染性钉螺,分离尾蚴,以40条各虫株尾蚴感染小鼠,感染35 d后分为6组,5个用药组分别一次灌服37.5、75、150、300 mg/kg和600 mg/kg吡喹酮,对照组小鼠灌服2.5%Cremophor EL溶液。所有小鼠于感染后50 d解剖,收集小鼠体内成虫,统计虫负荷和减虫率,计算并比较不同分离株血吸虫的吡喹酮半数有效剂量(ED50值)。结果37.5、75、150、300 mg/kg和600 mg/kg吡喹酮一次灌胃给药后,各组小鼠减虫率分别为10.37%～19.81%、23.22%～33.09%、39.25%～49.61%、62.87%～74.44%和91.26%～98.09%。经不同剂量吡喹酮给药后,各组小鼠减虫率差异无统计学意义(P>0.05)。7株日本血吸虫不同分离株的吡喹酮ED50值为134.1～186.7 mg/kg,但各分离株的吡喹酮ED50值差异无统计学意义(P>0.05)。结论中国大陆湖沼型流行区日本血吸虫不同分离株对吡喹酮的敏感性差异无显著性。血吸虫吡喹酮ED50值作为定量指标,能够客观反映血吸虫种群对吡喹酮的敏感性。     

芳香吡咯类化合物杀灭日本血吸虫尾蚴活性及对鱼类急性毒性研究

目的　探讨芳香吡咯类化合物杀灭日本血吸虫尾蚴活性及对鱼类的急性毒性。方法　以4⁃苄基⁃5⁃（三氟甲基）⁃1H⁃吡咯⁃3⁃腈为先导化学法合成并表征一系列芳香吡咯类化合物。将合成的化合物配制成10.00、1.00、0.10、0.01 mg/L浓度的药液作用于10 ~ 30条新鲜逸出的日本血吸虫尾蚴,观察并分析其30 min内在各药液中存活情况;以0.10、0.01 mg/L氯硝柳胺水溶液为阳性对照,以含1%二甲基亚砜（DMSO）的脱氯水为空白对照。将10条斑马鱼暴露于浓度分别为0.50、0.25、0.12、0.06、0.03 mg/L的各化合物药液,连续观察72 h斑马鱼在药液中的存活情况;以0.15、0.30 mg/L氯硝柳胺水溶液为阳性对照,以含1% DMSO的脱氯水为空白对照。结果　成功合成7种芳香吡咯类化合物。0.01 mg/L化合物102、104和106作用30 min均杀灭全部尾蚴,化合物105和化合物107无杀蚴活性。空白对照组未见血吸虫尾蚴死亡; 0.10 mg/L氯硝柳胺处理10 min后尾蚴全部死亡,但0.01 mg/L氯硝柳胺未能杀死血吸虫尾蚴。0.03 mg/L浓度化合物101、104和105处理72 h未导致斑马鱼死亡,化合物102、103和106作用12 h可导致全部斑马鱼死亡。0.50 mg/L化合物104作用72 h未导致斑马鱼死亡,空白对照组未见斑马鱼死亡,0.30 mg/L氯硝柳胺处理24 h后斑马鱼全部死亡。结论 　 0.01 mg/L化合物104作用30 min可杀灭全部日本血吸虫尾蚴, 0.50 mg/L作用72 h未导致斑马鱼死亡,可以作为杀蚴剂候选化合物。     

曼氏血吸虫中间宿主光滑双脐螺的生物学特性: 生殖与生存

目的　比较光滑双脐螺自体受精和异体受精的繁殖力差异,观察昼夜和光照对产卵的影响,以及成螺对缺水缺食的耐受性,旨在为现场控制该螺提供依据。方法　采用实验室条件下培育的光滑双脐螺,分成自体受精组和自然受精组,比较两组受精螺的产卵能力、所产卵的发育和孵化、幼螺生长发育等状况。将成螺分成全天光照组、全天避光组、日间光照和夜间避光（自然环境状态）组、日间避光和夜间光照组等4种饲养环境,比较各组螺的产卵情况。将光滑双脐螺成螺分别暴露在相对湿度为0、65%、87%和100%的不同环境中,观察其生存情况。采用快速烘干法去除光滑双脐螺成螺软体内水分,观察螺体重分别减轻10%、20%、30%、40%、50%、52%、55%、57%、60%和70%后的存活率。 结果　在25 ℃环境条件下,自体受精组和自然受精组螺15 d的产卵数分别为（8.77 ± 16.92）枚/螺和（149.71 ± 142.28）枚/螺,两组间差异有统计学意义（t = 0.999 999,P < 0.01）;所产螺卵的孵化率分别为50.1%和78.9%（χ2 = 18.18,P < 0.01）,生殖成熟率分别为19.3%和3.8%（χ2 = 11.83,P < 0.01）,两组间差异均有统计学意义。全天光照组、全天避光组、日间光照和夜间避光组、日间避光和夜间光照组等4种饲养环境下产卵量分别为（999.07 ± 444.00）、（602.93 ± 510.68）、（944.07 ± 392.53）、（577.07 ± 279.76）枚/d;其中日间光照和夜间避光组的日间和夜间产卵量分别占10.1%和89.9%,提示该螺产卵以夜间为主;但光照可改变其昼夜节律性。光滑双脐螺成螺在相对湿度分别为0、65%、87%和100%的25 ℃环境中的最长生存时间分别为7、70、150 d及100 d,而缺食对照组为50 d。光滑双脐螺成螺软体脱水率10%、20%、30%、40%、50%、52%、55%、57%、60%和70%后存活率分别为100%、100%、100%、100%、70%、30%、0、0、0、0。结论　光滑双脐螺可通过异体受精或自体受精完成生殖过程;自体受精螺的繁殖力弱于异体受精螺,但其生殖成熟率高于异体受精螺。光滑双脐螺对缺水缺食具有一定的耐受性,提示光滑双脐螺孳生区旱季后仍存活的螺对当地螺种群的维持及曼氏血吸虫病传播具有重要意义。     

氯硝柳胺展膜油剂水面分布及杀尾蚴效果观察

目的观察了解氯硝柳胺展膜油剂水面铺展速度、水面分布和水面杀尾蚴效果。方法取直径4 mm的泡沫塑料作为浮标,置于大型静止水面中心处,待静止后,在距浮标0.5 cm处滴加氯硝柳胺展膜油剂,开始计时并测定浮标在水面漂浮距离,计算氯硝柳胺展膜油剂的铺展速度及面积。将塑料桶(直径40 cm,高50 cm)装满脱氯水后,水温(25±1)℃,待水体静止后在水表面圆心处滴加氯硝柳胺展膜油剂60μl。分别在距离滴加展膜油剂处的水体表面10 cm和20 cm,并且水深10、20、30、40 cm和50 cm处提取水样1 ml,采用高效液相色谱法测定水样中氯硝柳胺浓度。将氯硝柳胺展膜油剂用乙醇稀释成有效浓度为1.25 mg/L和0.62 mg/L的溶液,各取10μl溶液加入含有尾蚴的24孔培养板中,使各孔中氯硝柳胺浓度分别为6.25×10-3mg/L和3.13×103mg/L,观察不同时间尾蚴存活情况。结果氯硝柳胺展膜油剂滴入量为20、30、40、50、60、70μl和80μl时,铺展速度分别为59、55、71、90、111、122 cm/s和153 cm/s,铺展面积分别为5.31、5.89、7.07、10.06、12.56、15.20 m2和16.61 m2,且随着滴入量的增加,铺展速度呈加快趋势,铺展面积相应增加,铺展速度与滴入量成良好的线性关系。水表面滴入氯硝柳胺展膜油剂60μl后,其浓度最高可达1.27 mg/L,2 h后浓度仍维持在0.07 mg/L以上。距离水面10 cm以下水体中氯硝柳胺浓度均<0.04 mg/L。氯硝柳胺展膜油剂浓度为6.25×10-3mg/L时,1 min尾蚴内全部死亡;当浓度为3.13×10-3mg/L时,1、2、3、5、10、20 min和30 min尾蚴死亡率分别为0、13.89%、19.44%、43.06%、69.44%和79.17%。结论氯硝柳胺展膜油剂铺展速度快、水面滞留时间长,具有较好的表面杀蚴作用,可用于现场水面杀尾蚴,阻断血吸虫病的传播。