HBV-Alu-PCR法与乙型肝炎病毒基因整合的研究

HBV的慢性感染,与肝细胞癌(HCC)的发生发展密切相关.HBV DNA整合入肝细胞基因组可见于大量HBV相关性HCC样本中,HBV DNA与肝细胞基因组DNA之间的整合在HCC的发病过程中具有十分重要的意义.目前有许多方法用于乙型肝炎相关性肝癌HBV基因整合的研究;HBV-Alu-PCR法在研究乙型肝炎相关性肝癌的发生机制中是一个非常简单实用的方法.     

乙型肝炎病毒相关性肝细胞癌中分泌型卷曲相关蛋白基因甲基化分析

目的 研究HBV相关性肝细胞癌(HCC)中分泌型卷曲相关蛋白(SFRP)1、SFRP2基冈甲基化状态及其与肝细胞癌发牛发展的关系.方法 利用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)法检测45例肝细胞癌患者术中取得癌组织、癌旁组织及6例胆囊结石或肝脏血管瘤患者正常肝组织中SFRP1、SFRP2基因的甲基化状态.数据行X2检验、Fisher's 确切概率法统计分析.结果 在45例HCC患者中,癌组织和癌旁组织中SFRP1基因的甲基化率分别占62.2%和35.6%(X2=6.403,P＜0.05);SFRP2基因的甲基化率分别占51.1%和28.9%(X2=4.630,P＜0.05);6例正常肝组织均未检测到甲基化.癌组织中SFRPI与SFRP2基因甲基化在性别、年龄、HBV血清标志物、癌旁组织类型、有无转移和病理分级等因素之间差异均无统计学意义(P＞0.05),癌组织中SFRP1与SFRP2基因异常甲基化具有线性相关性(r=0.381,P=0.01).结论 SFRP1和SFRP2基因甲基化在HBV相关性HCC中是个频发事件,将来有可能作为一种预测HCC形成的分子生物学标志物.     

乙型肝炎病毒-Alu-聚合酶链反应检测肝细胞癌中乙型肝炎病毒DNA的整合

目的 了解肝细胞癌(HCC)中HBV DNA的整合情况.方法 收集24例HBsAg阳性患者的HCC组织,提取其DNA,应用套式PCR原理,在设计的引物中引入U碱基,根据已知基因序列和人Alu重复序列分别设计引物,建立克隆整合的HBV DNA及其相邻的细胞基因序列的PCR技术.PCR产物测序所获结果经美国国家生物技术信息中心(NCBI)BLAST及Map Viewer检索确定HBV整合在染色体上的精确位置.结果 24份HCC组织中,14份存在HBV整合现象,整合的标本中11份正向插入宿主基因,8份反向插入宿主基因,其中5份标本既有正向插入也有反向插入,从病毒基因分析,整合可发生于X基因的任何长度,且均以截短形式插入宿主细胞DNA.另有8份标本未测到整合.结论 HBV在HCC细胞染色体上的整合呈不均衡分布.     

合肥地区丙型肝炎病毒基因分型分布特征

目的了解合肥地区丙型肝炎病毒(HCV)基因型分布特点。方法收集251例HCV患者的临床流行病学资料和外周静脉血,采用sanger测序法检测HCV基因型。结果合肥地区HCV患者中共检出4种基因型,8种基因亚型,以1b型最多占68.12%,其次2a、2i型占12.75%、10.36%,3a、3b、6a、6n、6v均有分布。各基因型在不同性别中的比较差异无统计学意义(P0.05);不同年龄段基因型相比较,差异有统计学意义(P0.05),在30～60岁年龄组,基因型分布最为广泛;在时间分布上,早期HCV基因型较为单一,主要以1b和2a型为主,近年来基因1b型逐渐减少,2i、3a、3b、6a基因型逐渐增多,总的基因类型增多。经输血、血液透析、母婴传播感染患者基因型主要为1b、2a及2i型,性转播、其他途径(拔牙、纹身、纹眉、穿耳、职业暴露等)传播以基因1b型为主,2a、2i、3a、3b型均有分布,而静脉吸毒患者基因型分布较为广泛,1b、2a、2i、3a、3b、6a、6n、6v均有分布。结论合肥地区的HCV基因分型呈多样化,以1b型为主,其次为2a、2i型,同时存在3a、3b、6a、6n、6v基因型。     

慢性HBV感染者外周血单个核细胞CTLA-4基因多态性与病情转归的关联研究

目的初步探讨慢性HBV感染者外周血细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4（CTLA-4）基因第1外显子区49位基因单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）与乙型肝炎病毒感染转归的关系。方法采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性法检测190例慢性HBV感染者和93例既往HBV感染者外周血CTLA-4基因49位点的多态性。结果慢性HBV感染者CTLA-4基因49位点A／G基因型分布与对照组比较差异有显著性（P=0．034），慢性感染者G等位基因频率明显低于对照组（0．561对0．677，P=0．008，OR=0．607）。结论CTLA-4第1外显子49位基因多态性可能与乙型肝炎病毒感染慢性化相关。