MSCs-肝细胞共培养上清对体外培养L02细胞的影响

目的以体外培养L02细胞为实验对象,了解骨髓间充质干细胞(MSCs)与肝细胞共培养上清的生物活性。方法采用两步酶分离法、全骨髓贴壁筛选法分别分离肝细胞、MSCs,按比例直接共培养,收集不同时段的共培养上清,用于人肝细胞系-L02细胞的培养。分别以单独培养的肝细胞上清、MSCs上清为对照,观察共培养上清对L02细胞活力和总蛋白合成的影响;同时观察其对L02细胞损伤模型的AST、LDH及细胞凋亡的影响。结果肝细胞上清、MSCs上清以及共培养上清对L02细胞的活力和增殖均有显著促进作用,表现为L02增殖活跃,总蛋白合成量增加;加入上述细胞上清的酒精损伤L02细胞AST、LDH释放和细胞凋亡显著低于未加细胞上清的对照组,其中共培养上清效果最为显著(P<0.05)。结论共培养上清对L02有明显的刺激增殖和损伤保护作用。     

不同叶型半夏蛋白质含量测定

目的研究并比较不同叶型半夏蛋白质含量。方法采用分光光度计测定药材中蛋白质含量。结果不同生境条件下,芍药叶型半夏间蛋白质含量差异明显,桃叶型半夏蛋白质含量差异不明显;同一生境条件下,芍药叶型半夏蛋白质含量高于桃叶型。结论半夏栽培生产中,应根据栽培生产需要提高种子纯度。     

猪圆环病毒2型CAP蛋白新型表位抗原肽的设计、合成及免疫原性研究

目的设计合成PCV2 CAP的B细胞表位抗原肽并对其进行鉴定。方法采用DNAStar和BcePred分析软件并结合吴玉章氨基酸抗原指数计算方法预测PCV2 CAP的B细胞表位,以此合成4分支多重抗原肽结构,同时串联一个通用型Th表位;采用Fmoc法合成4分支PCV2 CAP多重抗原肽(MAP),通过高效反相液相色谱(RP-HPLC)、质谱(MS)分析对其进行初步鉴定。以合成的抗原肽免疫昆明系小鼠及兔,观察体液免疫反应。结果初步筛选出3种抗原指数较高的表位,即98~103aa(命名为B98),156~162aa(命名为B156),228~233aa(命名为B228);合成的多重抗原肽经RP-HPLC层析后,纯度达到92.49%,MS鉴定其相对分子质量一致,误差小于0.1%。以合成的MAP疫苗免疫小鼠及兔后,可产生高滴度的特异性抗PCV2 CAP抗体。结论 PCV2 CAP的B细胞新表位多重抗原肽有免疫原作用,将为PCV2 CAP表位肽疫苗的研究奠定基础。     

HPV18E7重组质粒的构建及在大肠杆菌中的表达优化

目的构建HPV18E7基因重组质粒,并探索其在大肠杆菌中的最佳表达条件。方法以提取的HeLa细胞株中的DNA为模板PCR扩增HPV18E7基因;将HPV18E7基因与载体pET-32a(+)连接为重组质粒pET-32a(+)-HPV18E7;将该重组质粒转入大肠杆菌BL21-DE3-pLysS细胞中,探索优化表达的条件,以获得大量HPV18E7致癌蛋白。结果 PCR扩增的目标基因大小序列与HeLa细胞中的HPV18E7基因的大小序列一致。用LB培养基,IPTG和乳糖诱导表达显示不同浓度、不同温度、不同诱导起始量等表达量均不高,尝试用ZYM-5052自动诱导培养基诱导,HPV18E7融合蛋白的表达量远远高于用异丙基-β-D-硫代吡唃半乳糖苷(IPTG)和乳糖诱导表达的表达量。结论测序正确的HPV18E7重组质粒在自动诱导培养基ZYM-5052中获得远远高于用异丙基-β-D-硫代吡唃半乳糖苷(IPTG)和乳糖诱导表达的HPV18E7融合蛋白。     

FPA与ELISA方法在我国部分地区牛布鲁菌病诊断应用中的比较研究

目的 评价荧光偏振试验(FPA)在我国部分地区临床牛血清样品检测中的应用。方法 荧光偏振试验(FPA)检测1 286份牛血清样本,其中布病感染阳性血清309份,阴性血清977份,ROC曲线分析FPA临界值;荧光偏振试验(FPA)、间接ELISA(IELISA)及竞争ELISA(CELISA)同时检测1 160份牛血清样本,其中布病感染阳性血清231份,阴性血清929份,Kappa分析检测方法一致性。结果 ROC曲线分析FPA最优临界值(cutoff)为95 mP,此时敏感性为100%,特异性为99.6%;比较FPA、IELISA、CELISA 3种方法,敏感性分别为97%、99.56%和98.27%,特异性分别为100%、98.06%和99.56%,同时3种方法一致性均≥0.75。结论 FPA检测技术可以用于动物布病诊断,在田间条件下,快速、准确诊断布病,避免动物二次抓捕,适于推广应用。     

单克隆技术在肺癌诊断中的应用

美国癌症协会(ASC)估计，肺癌在2000年美国造成死亡的人数将占癌症死亡总数的30％左右，是严重威胁人类健康和生命的头号杀手之一。     

他汀类药物在高脂血症大鼠体内的PK-PD关系研究

目的:探讨他汀类药物在高脂血症大鼠体内暴露水平(药代动力学参数AUC)与药效之间的关系.方法:建立大鼠高脂血症模型,给予不同剂量的他汀类药物干预治疗,进行药代动力学和药效学测定,计算药代动力学/药效学(PK/PD)值,并进行相关分析.结果:TG-AUC在药代动力学(AUC)变化范围内(0～10.96倍)线性关系良好,Y=0.01036X-7.6445(γ=0.9599).胆固醇(CHOL)-AUC、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)-AUC、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)-AUC由于中间数据偏低,与预测样本数据偏差太大,线性关系不明显.结论:TG-AUC在药代动力学(AUC)变化范围内(0～10.96倍)线性关系良好,可以在知道药代动力学的相关数据基础上对药效进行预测.     

肺癌抗体药物的研究进展

肺癌作为最常见的恶性肿瘤之一,其目前诊断和治疗手段尚不完善,近年来免疫疗法成为检测和治疗肺癌的热点,其中肺癌抗体为研究的其中之一。本文闸述了血清p53抗体和单克隆抗体的研究进展及其在肺癌诊断中的应用,此外,又分别介绍了新近开发的主要5类肺癌抗体用于治疗肺癌。肺癌抗体对辅助诊断、预后、临床监测和免疫治疗肺癌上有很好的效果,具有广阔的应用前景。     

抗禽流感病毒轻链抗体库的构建

目的: 构建抗禽流感病毒 (AIV)抗体Fab轻链库,以便进一步构建完整AIV噬菌体抗体库。方法: 采用RT PCR技术, 从经禽流感灭活油乳剂疫苗免疫的罗曼蛋鸡的外周血淋巴细胞中扩增抗AIV抗体轻链基因, 将扩增的抗体轻链基因与载体PComb3HSS连接后, 电转化入大肠杆菌XLI Blue, 克隆筛选重组抗体Fab轻链基因的质粒, 并进行酶切鉴定和序列分析。结果: 扩增的AIV抗体轻链基因片段的大小约为 617bp。经克隆筛选鉴定和序列分析证明, 获得抗AIV抗体轻链库, 该轻链库库容量为 2. 5×106, 轻链基因的重组率为 50%。结论: 构建了库容量为 2. 5×106 的抗AIV抗体轻链基因库, 为下一步构建鸡抗AIV噬菌体抗体库和筛选特异性的AIVFab抗体奠定基础。     

肺癌细胞爬片的免疫组化检测分析

目的应用免疫组化法检测肺癌细胞爬片。方法制备阳性大细胞肺癌细胞爬片和阴性小细胞肺癌细胞爬片,采用免疫组化检测法对其进行检测。结果阳性大细胞肺癌细胞爬片检出率为100%,阴性小细胞肺癌爬片未出现假阳性结果。结论肺癌细胞爬片的免疫组化检测分析可为临床肺癌的免疫组化检测提供一定的技术支持。