人源性基质金属蛋白酶-1原核表达载体的构建与鉴定

目的构建人源性基质金属蛋白酶-1(MMP-1)原核表达载体. 方法从人肝组织提取总RNA,以此为模板,逆转录巢式 PCR扩增MMP-1全编码区基因片段,构建含目的片段的T载体克隆及原核表达载体pMAL-C2x重组质粒亚克隆,经双酶切及核苷酸测序进行分析鉴定. 结果成功地构建了人MMP-1原核表达载体. 结论构建的人MMP-1原核表达载体,为以后MMP-1融合蛋白的表达并获得具有抗原性的MMP-1融合蛋白奠定了基础.     

乙型肝炎患者自然杀伤细胞G2D受体差异表达及其临床意义

目的 探讨乙型肝炎患者自然杀伤(NK)细胞表面NKG2D受体差异表达及临床意义.方法 应用流式细胞术和RT-PCR方法检测慢性乙型肝炎(CHB)患者22例、急性乙型肝炎(AHB)患者18例、HBV携带者(HBVC) 10例以及18名健康对照者(HD)的外周血NK细胞NKG2D蛋白和NKG2D mRNA表达水平,分析NKG2D表达水平与血清中HBV DNA定量的相互关系.采用方差分析和直线回归进行统计学处理.结果 NKG2D mRNA表达水平HBVC组为0.96±0.17、HD组为1.03±0.12、AHB组为1.53±0.30、CHB组为1.51±0.35,各组间的差异有统计学意义(q=7.586、7.485、7.920、7.880,均P＜0.01).NK细胞中NKG2D蛋白表达量AHB组为0.87±0.14、HD组为0.89±0.17、CHB组为0.67±0.09、HBVC组为0.59±0.13,各组间的差异有统计学意义(q=6.92、7.67、7.53、8.16,均P＜0.01).乙型肝炎患者NK细胞NKG2DmRNA表达水平与其对应的血清中HBV DNA水平分别呈负相关(CHB组r=-0.75,P＜0.01;AHB组r=-0.66,P＜0.01;HBVC组r=-0.69,P＜0.01).AHB、CHB NK细胞NKG2D蛋白表达量与血清HBV DNA水平呈负相关(r=-0.47、-0.45,均P＜0.05).结论 NKG2D诱导的NK细胞毒可能在乙型肝炎HBV清除中起一定的作用.     

人NKG2D基因重组质粒的构建及鉴定

目的 构建人NKG2D重组质粒。方法 应用RT-PCR，自健康人外周血单个核细胞(PB-MC)中获取NKG2D cDNA，克隆于pMDl8-T载体中，并经酶切和测序鉴定。结果 重组载体中插入片段序列与GeneBank登录的cDNA序列一致。结论 成功地构建了重组载体pMDl8T-NKG2D，为研究NKG2D的生物学活性奠定了基础。     

人成熟型转化生长因子-β1融合蛋白的纯化及其多克隆抗体的制备与初步临床应用

目的 获得兔抗人成熟型转化生长因子-β1(TGF-β1)多克隆抗体,并将其初步应用于临床检测.方法 将人成熟型TGF-β1融合蛋白经亲和层析法纯化,并将其作为抗原免疫家兔,获得兔抗血清,经饱和硫酸铵纯化,获得初步纯化的兔抗人TGF-β1多克隆抗体.采用双抗夹心间接酶联免疫吸附试验(ELISA)测定健康对照者、慢性肝病及肝硬化患者血清TGF-β1的OD值.结果 获得初步纯化的兔抗人TGF-β1特异性多克隆抗体,该抗体能与人TGF-β1起反应.各组血清TGF-β1的检测OD450值为轻、中度慢性肝炎组11.333±6.136,慢性重症肝炎组16.400±6.959,肝硬化组14.975±6.090,健康对照组7.275±3.222;前三组分别与健康对照组比较,差异均有显著性(P＜0.01);慢性重症肝炎组、肝硬化组分别与轻、中度慢性肝炎组比较,差异亦有显著性(P＜0.01).结论 制备的TGF-β1多克隆抗体可初步用于临床检测,判断肝纤维化程度.     

重症病毒性肝炎患者血中五种微量元素的观察

本文观察30例重症病毒性肝炎病人全血中5种微量元素含量的变化并与427例健康人进行对照。结果表明铁、锰、硒在重症肝炎病人组较健康人组明显降低(P<0.01),锌、铜无显著差异(P>0.05),见表1。30例中死亡14例,存活16例,死亡病例组的血硒含量明显低于     

丙型肝炎病毒包膜蛋白基因片段的克隆与表达

应用ＲＴ－ＰＣＲ和基因重组技术，从湖南地区丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染者血清中克隆了ＨＣＶ包膜蛋白基因片段（Ｅ１，Ｅ２／ＮＳ１），经与已知基因型的ＨＣＶ－１，ＨＣＶ－Ｊ，ＨＣＶ－Ｊ６和ＨＣＶ－Ｊ８进行核苷酸序列的比较分析，这些基因片段属１ｂ型ＨＣＶ基因。将克隆基因重组于表达质粒ＰＭＡＬ－ＣＲＩ中，在大肠杆菌内进行高效表达，获得了融合蛋白ＭＢＰ－Ｅ１，ＭＢＰ－Ｅ２／ＮＳ１，经ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ分析证实这些融合蛋白具有ＨＣＶ的特异抗原活性，提示这些融合蛋白可用于ＨＣＶ感染的临床诊断和发病机理的研究。     

应用非条件Logistic回归分析肾综合征出血热病情影响因素

应用非条件Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归分析肾综合征出血热病情影响因素湖南医科大学附属湘雅医院谢玉桃胡国龄鲁猛厚刘文恩对１９８例肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）患者的临床状况（病情影响因素）进行多因素分析，目的在于提醒注意这些因素的出现，以便及时处理、降低病死率。１...     

31例中毒性肝炎临床分析

目的：观察中毒性肝炎病因和临床预后分布情况。方法：回顾性分析31例确诊为中毒性肝炎患者的肝功能和临床表现。结果：31例中毒性肝炎中药物性肝炎占80．65％,毒蕈中毒死亡率最高（100．00％）。结论：针对中毒性肝炎的不同病原,积极治疗各种严重并发症,降低死亡率。     

丙型肝炎病毒核心区蛋白在HepG2细胞中的表达

目的 :构建能稳定表达丙型肝炎病毒核心区蛋白的哺乳动物细胞系 ,以便对丙型肝炎病毒核心区蛋白的抗原性及其他功能作进一步研究。方法 :通过PCR扩增丙型肝炎病毒核心基因 ,将其亚克隆入真核表达质粒pcDNA3.1( )中 ,用脂质体包裹后转染肝癌细胞系HepG2 ,通过G4 18筛选获得稳定转染细胞系 ,并通过间接免疫荧光法检测HepG2中丙型肝炎病毒核心区蛋白的表达。结果 :克隆的基因全长 5 94bp ,并经测序和重组质粒双酶切证实为所需目的基因 ;经间接免疫荧光验证实转染了目的基因的HepG2细胞中有丙型肝炎核心区蛋白的表达。结论 :丙型肝炎病毒核心区蛋白能在HepG2细胞中稳定表达。