人兽共患疾病的流行现状、危害及其防控对策

人兽共患疾病是一类严重威胁人类和动物健康的疾病，有些疾病一旦发生会给人类社会和经济发展带来灾难性的影响。自从其发现以来，人类与其的斗争一直就没有停止。在国际组织和各个国家的参与下，人类已有效控制和消灭了天花、鼠疫等曾给人类带来灾难的人兽共患疾病。然而，21世纪的今天，一些新发现的和曾被有效控制的人兽共患疾病又频频爆发和肆虐，甚至愈演愈烈，有的发展到难以控制的局面，使人类社会又一次面临严峻的考验。本文概括介绍了人兽共患疾病的流行现状与危害、频繁发生的根源以及防控策略等，积极呼吁和倡导世界各国加强合作，采取协调统一的有效措施控制这类疾病的发生和蔓延，造福人类社会。     

分子工具在寄生虫学研究中的应用

现代分子技术对寄生虫的基础研究和应用研究都有着重要的影响,尤其是PCR相关技术有着更广泛的应用,因为PCR反应能够极其敏感的从少量的寄生虫材料中扩增到所需的DNA片段,另外高分辨率的电泳技术和基因组方法应用也越来越多.本文对核酸技术如聚合酶链式反应、突变扫描技术、指纹技术的发展和应用进行了综述,并着重强调了这些核酸技术在寄生虫方面的用途和潜力.     

猪带绦虫六钩蚴TSO18基因的克隆和表达

囊虫和绦虫在中国大部分地区是一个重要的公共卫生问题,对人的健康危害很大。猪的囊尾蚴感染率也较高。每年造成的经济损失达20亿元。猪囊虫病的免疫预防是一个难度很大的课题。主要原因是抗原成分复杂且不能大量生产。随着分子生物学技术在寄生虫研究领域的应用。通过寻找免疫相关基因,在体外克隆并表达该基因,用表达产物作为抗原进行免疫和诊断无疑是一个新的研究方向和热点。     

猪带绦虫TSO45W-4BX与猪CD58分子在大肠埃希菌中的联合表达

目的 以猪CD58为分子佐剂，将CD58基因与猪带绦虫疫苗候选抗原基因TSO45W-4BX联合表达，寻找新型抗猪囊尾蚴疫苗。 方法 分别以重组质粒pGEM-4B和pGEM-CD58为模板，PCR扩增猪带绦虫TSO45W-4BX基因和猪CD58基因，将TSO45W-4BX与酶切处理的pGEX-4T-1定向连接，转化大肠埃希菌JM109，重组质粒经鉴定正确后，在其下游酶切插入CD58基因，PCR扩增和测序证明阅读框正确后，用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达，用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE））和蛋白质印迹法（Western blotting）分析表达产物的免疫活性。 结果 pGEX-4BX和pGEX-4BX/CD58分别表达Mr 41 000和Mr 69 000的融合蛋白，pGEX-4BX表达产物主要以可溶性形式存在，而pGEX-4BX/CD58却以包涵体形式存在，但两者都能被囊尾蚴病患者血清识别。 结论 TSO45W-4BX与CD58基因联合表达，TSO45W-4BX仍具有免疫活性。     

CpG DNA重组质粒对猪囊尾蚴抗原的免疫佐剂效应研究

用CpG基序寡核苷酸的重组质粒（CpG DNA）与猪囊尾蚴抗原制备疫苗免疫小鼠，检测小鼠抗囊尾蚴总抗体和IgG2a抗体亚类以及体外诱导免疫脾细胞分泌白介素-4（IL-4）和干扰素-γ（IFN-γ）的含量，观察其免疫佐剂效应。发现CpG DNA重组质粒中无论插入CpG基序多或少都能增强小鼠抗囊尾蚴总抗体和IgG2a抗体亚类含量，都具有免疫佐剂效应，但其免疫强度有差别，其中CpG2的佐剂效应最强；此外，CpG DNA重组质粒能与铝胶、206佐剂配伍发挥免疫增强协同作用。     

猪带绦虫TSO45W-4BX与猪CD58分子在大肠埃希菌中的联合表达

目的以猪CD58为分子佐剂,将CD58基因与猪带绦虫疫苗候选抗原基因TSO45W-4BX联合表达,寻找新型抗猪囊尾蚴疫苗。方法分别以重组质粒pGEM-4B和pGEM-CD58为模板,PCR扩增猪带绦虫TSO45W-4BX基因和猪CD58基因,将TSO45W-4BX与酶切处理的pGEX-4T-1定向连接,转化大肠埃希菌JM109,重组质粒经鉴定正确后,在其下游酶切插入CD58基因,PCR扩增和测序证明阅读框正确后,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE))和蛋白质印迹法(Westernblotting)分析表达产物的免疫活性。结果pGEX-4BX和pGEX-4BX/CD58分别表达Mr41000和Mr69000的融合蛋白,pGEX-4BX表达产物主要以可溶性形式存在,而pGEX-4BX/CD58却以包涵体形式存在,但两者都能被囊尾蚴病患者血清识别。结论TSO45W-4BX与CD58基因联合表达,TSO45W-4BX仍具有免疫活性。     

5株猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7全长基因的克隆及序列分析

目的通过测定5株猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7基因序列,结合GenBank登录的国内外PRRSV分离株核苷酸序列,分析PRRSV核衣壳蛋白(N蛋白)的遗传变异情况。方法根据GenBank公布的PRRSV ATCCVR-2332株全基因组核苷酸序列,设计合成1对特异性引物,用RT-PCR方法扩增出3株PRRSV甘肃流行株(命名为GSZY、GSBY、GSZY株)、1株陕西流行株(命名为Shanxi株)和1株PRRSV江西分离株(命名为Jingxi株)的ORF7全长基因,克隆到pGEM-T Easy载体,然后分别测定插入的核苷酸序列。应用DNAStar序列分析软件对所测ORF7基因核苷酸序列及其推导的氨基酸序列与不同来源的13个PRRSV毒株进行同源性比较。结果5株PRRSV ORF7基因与以ATCC VR-2332为代表的早期引发PRRS的美洲型毒株的核苷酸序列间的同源性为91.9%~94.3%,与国内其他PRRSV分离株的同源性为98.7%~99.7%,与欧洲型代表株LV的同源性为57.7%~58.2%。结论美洲型PRRSV N蛋白氨基酸发生了变异,但国内毒株相对保守。     

猪囊尾蚴RNA聚合酶亚基基因的筛选及结构初探

目的　从构建的剪切引导序列(SL)cDNA文库中筛选猪囊尾蚴相关基因。　方法　提取猪囊尾蚴总RNA,利用SL特异序列和带有噬菌体M13M4的olig(dT)为引物,反转录成cDNA,构建猪囊尾蚴SLcDNA文库。随机筛选并通过酶切、PCR鉴定阳性克隆,分析其同源性。　结果　鉴定出一 332bp的插入片段,含有204bp的开放阅读框(ORF)和 3′端20bp的polyA尾巴,经核苷酸和氨基酸序列分析,所克隆的基因的氨基酸序列与其他真核生物如人、秀丽隐杆线虫、果蝇及拟南芥等的RNA聚合酶亚基基因同源性均高达71.6%以上。　结论　筛选鉴定的基因推测为猪囊尾蚴RNA聚合酶亚基基因,而且在不同物种间很保守。     

猪囊尾蚴AgB基因的克隆表达及其免疫学特性分析

目的 克隆猪囊尾蚴 AgB 基因并在大肠杆菌中表达,为研制猪囊尾蚴病诊断试剂和基因工程疫苗奠定基础.方法 从猪囊尾蚴虫体中提取总 RNA,利用反转录聚合酶链式反应及重叠延伸 PCR 法扩增 AgB 完整序列,并克隆到原核表达载体 pGEX-4T-1,在大肠杆菌中诱导表达.通过 SDS-PAGE、Western-blotting检测AgB的表达和免疫反应活性.通过对包涵体的洗涤、纯化及变复性研究,纯化目的蛋白.采用ELISA法检测纯化蛋白检出猪囊尾蚴阳性血清率和免疫小鼠血清中抗猪囊尾蚴抗体的水平.结果 测序证实扩增出AgB基因序列并正确插入到原核表达载体.表达质粒在大肠杆菌BL21中高效表达.纯化的目的蛋白,具有良好的抗原性和免疫原性.结论 成功扩增了全长AgB基因并得到了高效表达,纯化了具有免疫性的重组蛋白,为进一步开展AgB的诊断试剂和重组疫苗研究奠定了基础.