脂质过氧化对培养的人内皮细胞血管细胞粘附分子-1表达的影响

目的:观察脂质过氧化对培养的人内皮细胞血管细胞粘附分子-1表达的影响。方法:培养的人脐静脉内皮细胞随机分为实验组和对照组。实验组与不同浓度联胺(1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L)作用8h, 对照组不加联胺。细胞原位杂交和细胞酶联免疫吸附法分别测定内皮细胞血管细胞粘附分子-1mRNA和蛋白表达。结果:细胞原位杂交结果图像分析表明, 实验组平均吸光度值分别为0.147±0.013、0.292±0.020和0.396±0.022, 是对照组(0.077±0.011)的1.91倍、3.79倍和5.14倍。方差分析表明, 各组间两两比较有显著差异(P<0.01)。细胞酶联免疫吸附测定结果, 实验组平均吸光度值分别是0.158±0.008、0.220±0.017和0.321±0.023, 为对照组(0.104±0.016)的1.53倍、2.12倍和3.09倍。各组间两两比较有显著差异(P＜0.01)。结论:人脐静脉内皮细胞脂质过氧化增加血管细胞粘附分子-1mRNA和蛋白表达, 这可能促进单核细胞粘附血管内皮, 在动脉粥样硬化发生发展中起重要作用。     

脂质过氧化诱导培养的内皮细胞产生单核细胞趋化因子RANTES

为探讨脂质过氧化损伤是否诱导内皮细胞产生单核细胞趋化因子RANTES ,使培养的人脐静脉内皮细胞暴露于 5 μmol/L联胺后收取其条件培养基。继之 ,将其放在截留分子质量分别为 3.5kDa(外层 )和 10kDa(内层 )的双层透析袋中 ,间层注入适量的 0 .0 1mol/LPBS ,再将透析袋悬在装有PBS的锥形瓶内进行透析。透析完毕 ,取出间层液体 ,即为分子质量为 3 .5～ 10kDa的条件培养基 ,其中含RANTES。用微孔滤膜法进行单核细胞趋化实验 ,并应用鼠抗人RANTES抗体 ,以证明条件培养基中RANTES的趋化活性。结果发现 ,经联胺刺激的条件培养基引起的单核细胞迁移距离 (89.75± 11.33μm)明显大于不经联胺刺激的条件培养基 (77.30± 11.5 3μm)和随机移动组 (76 .18± 10 .5 0 μm)。方差分析显示 ,组间差异有极显著性 (F =47.2 0 ,P <0 .0 1)。加入鼠抗人RANTES抗体后 ,单核细胞迁移距离明显缩短 (F =2 1.31,P <0 .0 1)。结果提示 ,从功能实验方面表明脂质过氧化损伤能诱导内皮细胞产生RANTES增强 ,并可能在动脉粥样硬化病变的发生过程中起一定作用。     

脂质过氧化诱导培养的内皮细胞表达白细胞介素-1

为探讨脂质过氧化能否诱导内皮细胞表达白细胞介素-1(IL-1)及其是否具有对单核细胞的趋化活性,用不同浓度(1、5和10μmol/L)的联胺诱发培养的内皮细胞脂质过氧化,用硫代巴比妥酸微量荧光测定法测定样品中的丙二醛含量;用免疫细胞化学检测IL-1β蛋白的表达;用单核细胞趋化实验观察脂质过氧化诱导的白细胞介素-1的趋化活性.结果显示,随着联胺浓度的增高,细胞内的丙二醛含量逐渐升高,分别为对照组的2.60倍、5.88倍和11.67倍(F=129.10,P＜0.05).免疫细胞化学显示,正常内皮细胞可表达低水平IL-1β,加联胺后,各组IL-1β蛋白表达明显增加,分别为对照组的1.78倍、2.70倍和5.02倍(F=293.83,P＜0.05).趋化实验显示,经联胺刺激的条件培养基引起的单核细胞迁移距离明显大于非联胺条件培养基和随机移动组(F=612.55,P＜0.05),在联胺刺激的条件培养基中加入抗IL-1α或抗IL-1β抗体后,单核细胞迁移距离皆明显缩短(F=437.03,P＜0.05).结果提示,联胺可诱发内皮细胞的脂质过氧化,诱导其表达和分泌IL-1,并初步证明IL-1可招引单核细胞迁移,从而在动脉内膜单核/巨噬细胞的募集过程中起一定的作用.     

Expression of Macrophage Inflammatory Protein 1α in the Endothelial Cells Exposed to Diamide

ItisahallmarkofearlyatherosclerosisthatbloodmonocytesandTlymphocytesmigrateintoarterialsubendothelialspaceandbecomefoamcells[1] .Themigrationofmonocytesisregulatedbychemokines ,adhesionmoleculesandcytokines .Monocytechemoattractantprotein 1(MCP 1)isoneoftheim portantchemokinesthatwasdemonstratedtoatrractmonocytes[2 ] .Bothmacrophageinflammatory pro tein 1(MIP 1)andMCP 1belongtotheCCsubfam ilyofchemokines.OfbothMIP 1subtypes ,MIP 1αandMIP 1β ,theformerisoneofthemainchemoat tractantsf…     

人载脂蛋白A-Ⅰ的原核表达及二级结构和功能鉴定

目的为获得高产量并具有正常结构和生物学活性的原核表达人载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ).方法利用DNA重组技术对人apoA-Ⅰ的前8个氨基酸引入沉默突变,以pET-30b(+)为原核表达载体,在apoA-Ⅰ多肽链C-末端引入6×组氨酸标签,采用镍亲和层析对表达蛋白进行纯化.分别使用圆二色分析、浊度澄清试验和胆固醇外流试验对重组apoA-Ⅰ的α螺旋含量、脂质结合动力学及促细胞胆固醇外流能力进行评价.结果获得高表达产量的重组apoA-Ⅰ(12 mg纯化apoA-Ⅰ蛋白/L菌液);重组蛋白的α螺旋含量为(54±4)%,脂质结合动力学速率常数k1/2为0.059±0.002 min-1,胆固醇外流百分比为(16.68±1.77)%.结论可获得高产量并具有生物学活性的重组人apoA-Ⅰ;为构建apoA-Ⅰ其他突变体提供模式.     

人载脂蛋白A-I的原核表达及二级结构和功能鉴定

目的为获得高产量并具有正常结构和生物学活性的原核表达人载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ)。方法利用DNA重组技术对人apoA-Ⅰ的前8个氨基酸引入沉默突变,以pET-30b( )为原核表达载体,在apoA-Ⅰ多肽链C-末端引入6×组氨酸标签,采用镍亲和层析对表达蛋白进行纯化。分别使用圆二色分析、浊度澄清试验和胆固醇外流试验对重组apoA-Ⅰ的α螺旋含量、脂质结合动力学及促细胞胆固醇外流能力进行评价。结果获得高表达产量的重组apoA-Ⅰ(12 mg纯化apoA-Ⅰ蛋白/L菌液);重组蛋白的α螺旋含量为(54±4)%,脂质结合动力学速率常数k1/2为0.059±0.002 min-1,胆固醇外流百分比为(16.68±1.77)%。结论可获得高产量并具有生物学活性的重组人apoA-Ⅰ;为构建apoA-Ⅰ其他突变体提供模式。     

重组载脂蛋白A-I_(Milano)在心血管保护及冠心病治疗中的研究进展

冠心病是严重危害人类健康的一类心血管疾病。他汀类药物是近年来冠心病治疗的一个重大突破,该药物主要是通过抑制肝脏胆固醇合成限速酶———HMG-CoA还原酶,减少总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein-cholesterol,LDL-C)合成,降低循环血液中LDL-C,从而达到降低冠心病发病率和死亡率的疗效[1]。然而他汀类药物对于降低动脉粥样硬化灶中的脂质沉积作用并不明显。已知高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)或其主要蛋白质组分载脂蛋白A-I(apolipoprotein A-Ⅰ,apoA-Ⅰ)是体内逆向胆固醇转运的关键作用因子,通…