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目的应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建丙型肝炎病毒(HCV)E2蛋白反式调节基因差异表达的cDNA消减文库,克隆HCVE2蛋白反式调节相关基因。方法以HCVE2表达质粒pcDNA3.1(-)_E2转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为对照,制备转染后的细胞裂解液,从中提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaI酶切后将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性聚合酶链反应(PCR)扩增,将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析。结果成功构建人HCVE2蛋白反式调节基因差异表达的cDNA消减文库。文库扩增后得到78个阳性克隆,进行菌落PCR分析,均得到100~1000bp插入片段。挑取38个含有插入片段的阳性克隆测序分析,获得35个已知基因序列和3个未知基因。通过生物信息学分析获得其全长序列,其功能正在研究中。结论应用SSH技术成功构建了HCVE2反式调节基因差异表达的cDNA消减文库。该文库的建立为进一步阐明HCVE2反式调节的靶基因及致慢性肝脏疾病发生的分子生物学机制提供理论依据。 相似文献
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目的观察阿尔茨海默病(AD)发病进程中海马结构在断层影像上的形态学改变。方法依据AD发病进程,分别采集正常对照(NC)组、轻度认知损害(MCI)组、AD组各34例共102例受试者脑核磁共振图像,每组男、女各17例。观测海马面积、横径、矢径和颞叶钩回间距、颞角宽度等。分析组间各测量值变化趋势,以及海马面积等相关测量值与各神经评定量表评分的相关性。结果各组海马面积侧别均无统计学差异。各组间测量值比较,AD组海马面积小于NC组及MCI组(P均<0.05);AD组海马横径小于NC组及MCI组,MCI组海马横径小于NC组(P均<0.01);AD组颞叶钩回间距大于NC组及MCI组(P均<0.01),MCI组颞叶钩回间距大于NC组(P<0.05)。海马面积、海马横径与临床痴呆分级量表(CDR)及汉密尔顿抑郁量表(HAMD)评分均呈负相关,与蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评分均呈正相关;颞叶钩回间距与神经心理量表评分相关性同海马面积、海马横径相反。结论海马面积与海马横径随AD病情进展逐渐缩小,颞叶钩回间距随AD病情进展逐渐增大;海马结构的改变可损伤其认知功能。 相似文献
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目的:探讨MRI丘脑与毗邻结构形态学变化规律和意义,为与丘脑形态改变相关的疾病提供线性测量指标方法:利用成人活体头部MRI扫描资料,观测丘脑及其毗邻结构,分析各线性指标与丘脑面积、丘脑体积的相关性。结果:在断层标本上采用单因素方差分析显示:丘脑矢径、丘脑宽、丘脑面积性差和侧差未见显著性差异;丘脑横径、丘脑长侧差未见显著性差异,但其性差差异性显著(P<0.05)。方差齐性检验后Pearson相关分析显示:丘脑长与壳横径、壳矢径、壳面积、尾状核头矢径成正相关,丘脑宽与尾状核头矢径负相关,丘脑矢径、丘脑长与侧脑室前角间距成负相关。在体积测量中标准化后各组样本采用单因素方差分析显示:丘脑体积、尾状核头横径、尾状核头矢径及壳矢径左、右侧差异显著(左侧>右侧,P<0.05),其余各数据无显著性差异。标准化后与丘脑体积相关程度最为密切的线性指标分别是丘脑横径、丘脑矢径、丘脑长、丘脑宽(正相关)。结论:丘脑毗邻结构参数与丘脑参数存在线性关系,其毗邻结构的形态变化可作为研究丘脑形态变化的参考指标,丘脑横径、丘脑矢径、丘脑长、丘脑宽可作为丘脑形态变化的初筛指标。 相似文献
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目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)体外感染人绒膜滋养细胞株JEG-3后对细胞凋亡水平的影响,明确HBV感染胎盘的可能机制。方法用人HBVDNA+血清体外感染JEG-3,免疫组化和WesternBlot检测细胞内HBVX抗原(HBxAg)的表达;用Annexin—V荧光素探针标记细胞表面的Ps磷脂酰丝氨酸,利用流式细胞仪检测早期细胞凋亡,碘化丙啶(PI)检测中晚期细胞凋亡。结果HBV体外感染人绒癌细胞株JEG-3后,细胞内检测到HBxAg的表达;细胞的早期凋亡率和晚期凋亡率明显降低。流式细胞仪AnnexinV+PI双染方法检测细胞凋亡状态,HBV血清感染组细胞的早期凋亡水平和晚期凋亡水平均低于正常人血清对照组(t值分别为3.27、2.01,均P〈0.05),差异均有统计学意义。结论HBV体外感染人绒癌细胞株JEG-3可表达HBxA2,从而抑制了细胞的早期凋亡及晚期凋亡;其是HBV感染胎盘的可能机制。 相似文献
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丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4B反式激活基因的克隆化研究 总被引:4,自引:0,他引:4
目的应用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术构建丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白4B(NS4B)转染细胞差异表达cDNA消减文库,克隆HCV NS4B蛋白反式激活相关基因.方法以HCV NS4B表达质粒pcDNA3.1(-)-NS4B转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为对照,制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,进行抑制性消减杂交分析.将富集的二次PCR产物与T/A载体连接,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑取克隆聚合酶链反应(PCR)扩增后进行测序及同源性分析.结果文库扩增后得到33个阳性克隆,经菌落PCR分析显示其中28个克隆含有大小不等的200~1000 bp插入片段.测序及同源性分析显示,12种已知基因编码蛋白,包括一些与细胞周期、信号传导及肿瘤发生等细胞生长调节密切相关的蛋白编码基因,可能是NS4B反式激活靶基因.结论成功构建了HCV NS4B反式激活基因差异表达的cDNA消减文库,为进一步阐明HCV NS4B反式调节的靶基因在肝炎、肝纤维化和肝细胞癌发生的分子生物学机制提供理论依据. 相似文献
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目的 观察HBV感染相关因子——人膜联蛋白(Human Annexin V,HA—V)在胎儿各组织中的表达。方法 用SP免疫组化法检测HA—V在胎儿肝脏、心脏、肾脏、卵巢、输卵管、脾脏、胸腺中的表达及分布。结果 肝脏、肝内胆管系统、心脏、肾脏、卵巢、脾脏、输卵管、胸腺中均有HA—V表达,HA—V分布于这些组织的实质细胞及问质细胞的胞质;免疫组化图像分析系统显示胎儿肝脏组织中HA.V表达显著多于其他组织(P〈0.05),其余组织之间无明显差别(P〉0.05)。结论 HA—V是人体组织中的一种固有蛋白,分布于多种组织中,这种分布的广泛性可能与HBV泛嗜性感染相关,而肝脏组织中HA—V表达明显多于其他组织可能是HBV主要侵犯肝组织的重要原因之一。 相似文献
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我院地处甲状腺疾病高发区,了解甲状腺手术患者的心理状态,有的放矢地做好心理护理,是使手术获得成功,患者早日康复的重要一环。为此,我们对1985年8月至1986年4月收治的76例甲状腺手术患者进行心理状态调查,并结合心理护理初步总结如下: 相似文献
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目的观察人膜联蛋白Ⅴ(Human Annexin Ⅴ,HAⅤ)在乙肝病毒感染胎盘、正常中、晚孕胎盘及早孕绒毛中的表达并探讨其意义.方法用SP法检测HBsAg阳性孕妇足月分娩胎盘、HBV血清标志物阴性的正常早孕、中孕和足月胎盘各20例HAⅤ的表达、分布并进行定量分析.结果中孕、足月胎盘和HBV感染的胎盘组织中HAⅤ呈不均一的棕黄色颗粒状染色,泛存在于胎盘组织各类细胞胞浆、胞膜和核膜上.滋养细胞呈强阳性染色,绒毛间质细胞和毛细血管内皮细胞呈弱阳性染色.早孕绒毛HAⅤ棕黄色颗粒主要分布于外层滋养细胞的胞浆、胞膜和核膜上,最内层滋养细胞和间质偶见表达;比较HBV感染组和正常足月组胎盘HAⅤ表达的量,前者的平均灰度比后者明显增高,差异具有显著性(P<0.01),中孕组与足月组HAⅤ表达的量没有差别(P>0.05),早孕和中孕组、足月组HAⅤ表达的量的比较,前者显著低于后两者(P<0.05).结论HAⅤ可能作为受体介导了HBV对胎盘的感染. 相似文献