紫草素抑制胃癌细胞增殖、黏附及诱导凋亡

目的探讨异紫草素AJ-7及其衍生物AJ-9、AJ-5和AJ-8对人胃癌细胞SGC 7901增殖及黏附的抑制作用,以及凋亡诱导作用。方法应用MTT比色法检测新疆紫草素对细胞的增殖、黏附抑制作用,用流式细胞术(FCM)、Annexin-V-FITC联合法及透射电镜检测新疆紫草素对胃癌细胞的凋亡诱导效应。结果新疆紫草素能够抑制胃癌细胞的增殖,并呈浓度时间依赖性。FCM出现明显的亚二倍体峰并将细胞阻滞于G1期,Annexin-V-FITC联合法染色可见细胞凋亡的特征性贯穿胞质穿过胞膜的红色颗粒,电镜下可见染色质边集及生发小体的凋亡形态特征。结论新疆紫草素能够有效抑制胃癌细胞的增殖、黏附,并诱导凋亡。     

局部进展期胃癌术前化疗的疗效分析

目的 探讨局部进展期胃癌术前化疗的疗效及安全性,以及影响术前化疗胃癌患者复发死亡的因素.方法 回顾性分析2007年7月至2011年6月间复旦大学附属中山医院肿瘤内科收治的49例局部进展期胃癌患者的临床资料.采用Cox比例风险模型来分析新辅助化疗患者复发死亡的危险因素.结果 其中48例患者化疗后在术前接受了影像学评估,术前化疗的有效率和疾病控制率分别为33.3％(16/48)和93.8％(45/48);另有1例因在化疗期间胃穿孔行急诊手术而未接受影像学评估.治疗后89.8％(44/49)的患者获得根治手术,其中90.9％的患者(40/44)接受了D2淋巴结清扫术.术后淋巴结转阴率为30.6％(15/49);术后病理有反应32例,其中2例获得完全病理缓解.术前化疗期间血液学毒性反应主要为白细胞下降,非血液学毒性反应主要为恶心呕吐,以1～2级为主.49例患者平均住院时间为11.6 d,其中2例(4.1％)分别因术后胰漏和胰周渗液而延长了住院时间.49例患者均接受了术后随访,中位随访时间为21.6个月,中位无复发生存期为29.6个月(95％CI:24.0～35.2),中位总生存期为34.6个月(95％CI:29.8～39.4).多因素预后分析显示,影像学疗效(P.=0.038,RR=0.168,95％CI:0.031～0.904)和病理反应(P=0.007,RR=0.203,95％CI:0.064～0.642)是影响本组患者术后复发死亡的独立因素.结论 术前化疗对于局部进展期胃癌具有较高的疾病控制率和R0切除率;影像学疗效和病理反应是影响局部进展期胃癌术前化疗患者最重要的预后指标.     

表柔比星联合奥沙利铂与卡培他滨治疗晚期胃癌

目的：评价表柔比星联合奥沙利铂与卡培他滨（EOX方案）一线治疗晚期胃癌的疗效和安全性。方法：45例晚期胃癌患者接受EOX方案化疗：表柔比星50mg/m2,静脉推注,第1天;奥沙利铂100mg/m2,静脉滴注,第1天;卡培他滨625mg/m2,口服,每天2次,第1~14天。每21天为1周期。每3周期进行1次疗效评价。治疗持续至6周期或疾病进展或出现无法耐受的不良反应。结果：45例患者接受EOX方案化疗共224周期,中位化疗周期为6周期（3~6周期）。总有效率（CR＋PR）为44.4%,疾病控制率（CR＋PR＋SD）为73.3%。其中完全缓解2例,部分缓解18例,稳定13例,进展12例。中位随访期为12个月（5~17个月）,中位疾病无进展生存期（PFS）为6个月（5~7个月）,中位总生存期为10.2个月（8.1~11.9个月）,1年生存率为42.2%。常见的不良反应包括骨髓抑制和胃肠道反应。3度和4度白细胞减少发生率为20.0%,3度和4度中性粒细胞减少发生率为22.2%,3度和4度血小板减少发生率为11.1%。3度恶心、呕吐发生率为13.3%,3度腹泻发生率为2.2%。3度周围神经病变发生率为2.2%。无治疗相关死亡。结论：表柔比星联合奥沙利铂、卡培他滨一线治疗晚期胃癌疗效较好,不良反应可以耐受。     

CD44反义寡核苷酸抑制胃癌细胞粘附侵袭的研究

我们将CD44特异反义寡核苷酸转染高转移人胃癌细胞系SGC790 1,观察其对CD44基因表达及癌细胞粘附侵袭能力的影响。一、材料与方法1.材料 :人胃癌细胞系SGC790 1分3组 :Ⅰ对照组 ,未加任何处理因素 ;Ⅱ转染反义寡核苷酸 (asODN )组 ;Ⅲ转染随机序列寡核苷酸 (rODN )组。各组实验重复 4次。DMEM培养基 (Gibico公司 )、小牛血清 (TBD生物技术发展中心 )、Matrigel胶 (Sigma公司 )、抗CD44单抗 (福州迈新公司 )、FITC 羊抗鼠IgG(北京中山生物技术有限公司 )、硫代磷酸修饰的寡核苷酸序列及CD44引物序列 (上海生工公司 )、脂质体 …     

骨桥蛋白反义寡核苷酸抑制卵巢癌细胞SKOV3粘附侵袭的实验研究

目的研究骨桥蛋白（OPN）反义寡核苷酸（antisense oligonucleotide,ASODN）抑制人卵巢癌细胞株SKOV3粘附侵袭及诱导凋亡的作用。方法用脂质体将骨桥蛋白ASODN转染卵巢癌细胞SKOV3。实验分3组：对照组,随机序列寡核苷酸（random oligonucleotide,rODN）组和ASODN组。通过荧光定量RT-PCR、流式细胞仪检测法、黏附细胞计数法和Boyden小室法分别测定骨桥蛋白mRNA和细胞表面骨桥蛋白的蛋白表达及癌细胞黏附力、侵袭力的变化。Annexin V染色法、DNA ladder法和Hoechst染色法检测凋亡。结果转染后ASODN组骨桥蛋白mRNA的相对定量比值较对照组显著降低（1.95±0.81 vs 5.26±0.66,P〈0.01）;流式细胞仪检测骨桥蛋白表达结果显示,转染后平均荧光指数明显降低,细胞表面骨桥蛋白的蛋白表达下降（P〈0.01）;转染后ASODN组黏附力和侵袭力均较对照组显著下降（黏附细胞百分数值为16.97±1.60 vs 36.14±1.16,穿透聚碳酸酯膜细胞数为44.67±2.08 vs 83.67±4.51,P值均〈0.01）;经骨桥蛋白ASODN作用后SKOV3细胞发生凋亡。而rODN组上述各指标较对照组无明显变化。结论骨桥蛋白的表达与黏附侵袭能力密切相关,反义寡核苷酸能有效抑制卵巢癌细胞株SKOV3细胞骨桥蛋白基因的表达,从而抑制蛋白质的合成,降低其黏附侵袭能力,并能够诱导凋亡。     

骨桥蛋白反义寡核苷酸抑制胃癌细胞MKN28粘附侵袭的实验研究

目的：骨桥蛋白（Osteopontin,OPN）是一种分泌型、粘附性的糖基化磷蛋白,许多肿瘤在发生发展过程中均伴有OPN的表达,而表达OPN的肿瘤也更易表现出侵袭、转移的倾向。本研究将观察OPN反义寡核苷酸（antisense oligonucleotide,ASODN）抑制高分化人胃癌细胞株MKN28粘附侵袭的作用。方法：用脂质体将骨桥蛋白ASODN转染胃癌细胞MKN28,实验分3组,对照组、随机序列寡核苷酸（random oligonucleotide,rODN）组和ASODN组。通过荧光定量RT—PCR、免疫组化方法、粘附细胞计数法、穿透小室聚碳酸酯膜侵袭实验分别测定骨桥蛋白mRNA和细胞表面骨桥蛋白的蛋白表达及癌细胞粘附力、侵袭力的变化。结果：转染后ASODN组骨桥蛋白mRNA的相对定量比值较对照组显著降低（1．83±0．10m3．32±0．16,P〈0．05）;免疫组化检测骨桥蛋白表达结果显示,转染后荧光强度明显降低,细胞表面骨桥蛋白表达下降（P〈0．01）;转染后ASODN组粘附力和侵袭力均较对照组显著下降（粘附细胞百分数为20．50±4．58vs41．50±8．40,穿透聚碳酸酯膜细胞数为21．80±6．90vs．42．00±9．40,P均小于0．01）。而rODN组上述各指标较对照组无明显变化。结论：骨桥蛋白的表达与粘附侵袭能力密切相关,反义寡核苷酸能有效抑制胃癌细胞株MKN28细胞骨桥蛋白基因的表达,从而抑制蛋白质的合成,降低其粘附侵袭能力。     

β1-整合素反义寡核苷酸抑制胃癌细胞系SGC7901粘附侵袭的实验研究

目的:观察β1-整合素反义寡核苷酸对高侵袭性人胃癌细胞SGC7901粘附侵袭的抑制作用.方法:以脂质体为载体将硫代磷酸修饰的反义寡核苷酸转染SGC7901细胞,免疫化学方法观察转染后以Biotin标记的Integrinβ1 asODN在细胞内的分布;RT-PCR及流式细胞术分别测定Integrinβ1 mRNA和蛋白表达变化;MTT法和Bovden小室模型分别测定其粘附力和侵袭力.结果:Integrinβ1 asODN转染SGC7901后1h,胞浆及胞核内可见均匀分布的浅棕色颗粒,随着时间的延长,颗粒颜色不断加深;RT-PCR结果显示489bp处条带不同程度变浅;Integrinβ1蛋白表达曲线明显左移;粘附和侵袭实验证明,Integrinβ1 asODN转染的SGC7901细胞的粘附力及侵袭力明显下降(P＜0.001),抑制率分别为54%和76%,明显优于随机序列(P＜0.001).结论:Integrinβ1 asODN转染SGC7901可降低其mRNA和蛋白表达水平,从而抑制其对细胞外基质(ECM)的粘附和侵袭.     

β1整合素反义寡核苷酸抑制卵巢癌细胞粘附侵袭的实验研究

目的　观察β1整合素反义寡核苷酸对高侵袭性人卵巢癌细胞系CAOV3粘附侵袭的抑制作用。方法　合成的β1整合素反义寡核苷酸 (asODN)用脂质体转染入CAOV3细胞中 ,通过RT PCR、流式细胞术、MTT法、聚碳酸酯膜侵袭试验测定 β1整合素mRNA和细胞表面β1整合素蛋白表达及癌细胞粘附力、侵袭力的变化。结果　asODN组β1整合素 / β actinmRNA辉度值比值为 (0 .4 4 9± 0 .0 2 9) ,与对照组为 (0 .6 0 8± 0 .0 10 )相比 ,显著下降 (P <0 .0 1) ;流式细胞术检测asODN组平均荧光指数为(2 .4 30± 0 .10 4 ) ,较对照组 (6 .15 6± 0 .0 77)明显下降 (P <0 .0 1) ;asODN组粘附力为 0 .0 86± 0 .0 0 6 ,较对照组 (0 .137± 0 .0 19)显著下降 (P <0 .0 1)。asODN组穿透聚碳酸酯膜的细胞数为 16± 2 ,较对照组 (32± 4 )亦有显著差别 (P <0 .0 1)。而随机序列寡核苷酸 (rODN)组上述各指标较对照组无明显变化。结论　CAOV3细胞 β1整合素的表达与粘附侵袭能力密切相关 ,asODN能有效抑制CAOV3细胞 β1整合素基因的表达 ,从而抑制蛋白质合成 ,降低其粘附侵袭性。     

KLF8在不同肝癌细胞株及肝癌组织中的表达及其意义

目的 观察不同肝癌细胞株及肝癌组织中Krappel样因子8(KLF8)的表达,并探讨其意义.方法 用逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot、免疫化学方法分别检测不同肝癌细胞株及肝(癌)组织中KLF8的mRNA和蛋白质水平.结果 KLF8的mRNA及蛋白质水平随肝癌细胞株侵袭转移潜能的增强而明显升高(P<0.05);正常肝组织(6例)、无转移肝癌组织(17例)、有转移肝癌组织(6例)中KLF8 mRNA的相对表达量分别为0.2377±0.0658、0.4683±0.2073、0.6669±0.0239(P<0.05);在正常肝组织和肝硬化组织中KLF8蛋白表达的阳性率分别为16.7%(1/6)和33.3%(2/6),均为弱阳性,在肝癌组织中强阳性率为81.8%(27/33),肝癌转移灶中强阳性率为83.3%(5/6)(P<0.01).结论 KLF8可能参与肝癌的发生和侵袭转移.     

核糖核酸干扰下调骨桥蛋白表达对胃癌细胞生物学行为的影响

目的探讨骨桥蛋白（OPN）下调对胃癌细胞株MKN28和SGC7901生物学行为的影响。方法参考相关文献，设计并合成OPN的小干扰RNA（siRNA），通过荧光标记测定2株细胞的转染效率。Western印迹法检测OPN蛋白下调情况。实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测siRNA对OPNmRNA的下调率及随时间的变化。流式细胞仪检测转染前、后细胞周期和凋亡变化。四甲基偶氮唑蓝（MTT）法连续7d检测OPN干扰时肿瘤细胞增殖的变化，并采用混合模型进行统计分析。Transwell实验检测转染前、后细胞的运动侵袭能力并行t检验进行分析。结果2株细胞中OPN siRNA的转染效率均在90％以上。干扰后2株细胞中OPN蛋白表达均下调。SGC7901细胞在siRNA转染后72hOPN mRNA表达下降最低，达47％；MKN28细胞在siRNA转染后48hOPN mRNA表达下降最低，达40％。OPN被干扰后，SGC7901和MKN28细胞的增殖能力明显减弱（混合模型分析与未干扰组比较，P〈0．01）。OPN被干扰后MKN28和SGC7901细胞周期受到影响，其中SGC7901分裂期细胞比例由18．78％降至17．02％，MKN28分裂期细胞比例则由4．96％降至0．39％。2株细胞都未发现下调OPN后诱发细胞凋亡。OPN下调后2株肿瘤细胞的运动侵袭能力均下降，穿过人工基底膜的细胞数明显减少（SGC7901：t=5．172，P〈0．01；MKN28：t=11．365，P〈0．01）。结论siRNA能下调MKN28和SGC7901中OPN表达，OPN可能与MKN28和SGC7901细胞的增殖和运动侵袭相关。