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目的本研究通过人工合成猪附红细胞体ORF4基因,使其在大肠杆菌中高效表达。方法选择GenBank注册的AJ504999序列的ORF4基因,应用Graphical Codon Usage Analyser选择大肠杆菌偏爱的密码子,改变基因的transl_table,设计并合成3对寡核苷酸链,用PCR based accurate synthesis(PAS)法进行人工合成。经测序正确后,连接到表达载体PET28a,获得重组表达质粒PET28a/ORF4,导入大肠杆菌BL21(DE3),在30℃,IPTG终浓度1mmol/L的条件下诱导表达,经SDS PAGE分析,在11 kDa附近出现目的片段。结果结果表明ORF4基因在大肠杆菌中能够得到高效的表达,通过生物信息学软件分析表明,该蛋白存在19个配基结合位点;在21~22位氨基酸可能存在信号肽裂解位点;为胞内蛋白,没有糖基化位点。结论ORF4基因能够在大肠杆菌中表达,推测其在M.suis蛋白质的形成,M.suis的生物功能方面有着重要的作用。 相似文献
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目的膝部及小腿局部软组织较少,损伤后常有骨和肌腱组织裸露,且修复困难,通过对皮瓣蒂部进行了改良,采用单独以腓肠神经内侧头为皮瓣蒂并携带肌袖修复胫骨中上段软组织缺损。方法改良的腓肠神经营养血管顺行皮瓣设计,以腓肠神经内侧头为皮瓣蒂并携带肌袖修复胫骨中上段软组织缺损。观察皮瓣可切取范围、血液供应、转移角度及静脉回流情况。结果本组21例应用改良的以腓肠神经内侧头为皮瓣蒂的腓肠神经营养皮瓣血供良好,皮瓣翻转及覆盖范围增加。19例皮瓣全部成活,基本达到一期愈合,皮瓣成活占90.5%。所有病例经1~16个月随访,骨髓炎治愈,皮瓣外形满意,行走负重良好。结论①操作简单:以腓肠神经内侧头为蒂,克服了以往用腓肠神经内外侧头为蒂时,蒂较宽大,旋转困难的缺点。②抗感染能力增强:增加了肌袖,使皮瓣血供更充分,从而提高了抗感染能力。③增加软组织的厚度,使皮瓣外观良好。④血运丰富可填充死腔或软组织凹陷的创面。 相似文献
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目的利用引物重叠扩增法人工合成猪附红细胞体粘附蛋白基因MSG1,并检测其免疫原性。方法将人工合成的猪附红细胞体粘附蛋白基因MSG1产物插入到pMD18 T载体中,亚克隆至原核表达载体pET28c,构建pET28c_msg1表达载体,转入E.coli BL21,IPTG诱导表达。用SDS PAGE,Western blot方法分析鉴定,表达产物具有很好的抗原性。纯化后的重组蛋白接种昆明小白鼠后,用重组蛋白作为抗原包被酶标板,以检测接种昆明小白鼠血清抗体的产生。结果结果表明MSG1基因在大肠杆菌中能够得到高效的表达,并能够刺激小鼠产生较好的抗体。结论人工成功的合成了猪附红细胞体粘附蛋白基因MSG1,其基因可在大肠杆菌中高效表达,并可刺激小鼠产生较好的抗体。 相似文献
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