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试验旨在构建鸡Prnp基因原核表达载体,并在大肠埃希菌中进行表达,为制备鸡朊蛋白单克隆抗体提供材料。根据GenBank已报道的鸡Prnp基因组序列和pET-28a质粒多克隆位点设计引物,以健康的鸡全血基因组DNA为材料,采用PCR的方法扩增鸡的Prnp基因,将目的基因片段与pET-28a载体连接,构建重组原核表达载体。重组菌转化到E. coli BL21(DE3)感受态细胞中,并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)进行诱导表达,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定表达的重组蛋白。结果表明,重组蛋白在诱导剂的终浓度为0.08 mmol·L-1,16 ℃,220 r·min-1诱导7 h,蛋白表达量最高。综上所述,本研究成功构建了pET-28a-ChPrnp重组表达菌株,为Prnp朊蛋白的结构、生理功能和致病机制研究提供方法。 相似文献
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杨梅赤衣病是近年来新发现为害杨梅枝干的病害 ,过去很少报道。该病在杨梅主产区浙江丽水、青田等地普遍发生 ,发病率达 50 %以上 ,并有进一步扩展蔓延之势。1 症状 该病为害杨梅枝干 ,以主枝、侧枝发病较多 ,一般多从分枝处发生。发病后明显的特征是被害处覆盖一层薄的粉红色霉层 ,故称赤衣病。发病初期在枝干背光面树皮上可见很薄的粉红色脓疱状物 ,次年 3月下旬开始在病斑边缘及枝干向光面出现橙红色痘疮状小疱 ,散生或彼此相连成病斑 ,可布满整个主干主枝向光面。约 50天后 ,整个病斑上覆盖粉红色霉层 ,干燥时到处飘散。2 病原及发… 相似文献