重型病毒性肝炎中丁型肝炎病毒的检测

为了探讨丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）感染在重型病毒性肝炎中的作用，对北京佑安医院１９８０年至１９８９年收治的５４例急性和亚急性重型肝炎和３８例急性乙肝患者血清，应用国产ＨＤＶＥＬＩＳＡ试剂测定抗－ＨＤ、抗－ＨＤＩｇＭ和ＨＤＡｇ，应用斑点杂交技术测定ＨＤＶＲＮＡ。结果发现重型肝炎组ＨＯＶ－Ｍ检出率明显高于急性乙肝组（２７．８％比５．３％．Ｐ＜０．０５）。单独ＨＢＶ感染和ＨＤＶ／ＨＢＶ混合感染的重型肝炎患者均有较高的病死率。提示ＨＤＶ感染是重型肝炎中重要的病原学因素之一，ＨＤＶ与ＨＢＶ具有协同作用加重肝损害，导致肝衰竭。     

52 例病毒性肝炎患者肝组织中丙型肝炎病毒 RNA 和 HCAg-NS3 的测定

应用地高辛标记探针原位杂交法和单克隆抗ＨＣＶ－ＮＳ３－ＨＲＰ建立直接酶标免疫组化法分别测定５２例肝炎患者肝组织ＨＣＶＲＮＡ和ＨＣＡｇ－ＮＳ３。结果抗ＨＣＶ阳性组ＨＣＶＲＮＡ检出率５７．１％（１６／２８），ＨＣＡｇ－ＮＳ３检出率５３．６％（１５／２８）；抗ＨＣＶ阴性组其两项检出率均为１２．５％（３／２４）。肝组织中ＨＣＶＲＮＡ阳性物呈蓝紫色细小颗粒存在于肝细胞核或胞浆内，其在肝小叶中的分布可分为３型，即弥漫型、局灶型、散在型。肝组织中ＨＣＡｇ－ＮＳ３阳性物呈棕黄色细小颗粒分布于肝细胞核或胞浆内，以单个或数个阳性细胞散布于肝小叶中。２３例ＨＣＶＲＮＡ或／和ＨＣＡｇ－ＮＳ３阳性病例以肝炎后肝硬化（ＬＣ）病例占多数（１４／２３），其次为慢性重型肝炎（ＣＳＨ）和中度慢性肝炎（ＣＡＨ）。此两种检测方法具有较高符合率（９０．４％，４７／５２），表明病毒核酸及其表达产物均存在于肝细胞内，与ＨＣＶ感染密切相关。这为ＨＣＶ感染诊断提供了直接依据，有利于研究ＨＣＶ感染中病毒复制、慢性化进程、抗病毒治疗监测及重叠感染时病毒相互关系。     

地高辛素标记探针原位杂交法检测肝组织中丙型肝炎…

以国外引进的含丙型肝炎病毒ｃＤＮＡ的质粒ＤＮＡ为模板，应用地高辛素作为标记物，经聚合酶链反应制备探针，建立原位杂交方法，对４１例石蜡包埋肝组织进行ＨＣＶ，ＲＮＡ测定。探针标记的ＨＣＶ基因片段位于５‘非编码区，其长度为２２１ｂｐ。结果：抗ＨＣＶ阳性组的ＨＣＶ ＲＮＡ阳性检出率为５６．５％，抗－ＨＣＶ阴性组为１６．７％。     

逆转录—聚合酶链反应在丁型肝炎病毒感染的应用及意义

本项技术选取丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）ＲＮＡ的非抗原编码区的相对保守区为靶序列,设计两对引物,进行巢式聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增ＨＤＶＲＮＡ。血清及肝组织采用蛋白酶消化法提取ＲＮＡ。结果发现９８例各型病毒性肝炎血清中,ＨＤＶ—Ｍ阳性组ＨＤＶＲＮＡ检出率为５６６％（３０／５３）,ＨＤＶ—Ｍ阴性组为８９％（４／４５）（Ｐ＜００１）;ＨＤＡｇ或／及抗ＨＤＩｇＭ阳性血清测定ＨＤＶＲＮＡ的阳性率为５７１％（２８／４９）,抗ＨＤ阳性血清的阳性率为５００％（２／４）;９例ＨＤＶ—Ｍ阳性肝组织测定ＨＤＶＲＮＡ阳性者６例,２例ＨＤＶ—Ｍ阴性肝组织均阴性。本项技术是在分子水平上检测病毒核酸、操作简便、稳定、可靠、特异性高、重复性好,可以作为ＨＤＶ血清学指标的佐证和补充,肝组织ＨＤＶＲＮＡ的测定可应用于回顾性研究,在临床病原诊断、抗病毒疗效判定、病毒复制、重叠感染等研究方面提供重要实验依据。     

新生大鼠缺氧缺血性脑病时HIF-1α基因表达的变化

目的 了解新生大鼠缺氧缺血性脑病(HIE)时低氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因表达的变化,以期寻找更为有效治疗手段.方法 24只7日龄新生SD大鼠,随机分成2组,假手术组和缺氧缺血组,根据处死时间点每组分成1 d和3 d两个小组,每组6只.缺氧缺血组结扎左颈总动脉后休息1 h,再置于8%氧浓度的低氧环境中2 h,分别于实验1 d、3 d乙醚麻醉下处死动物,留取脑组织,半数中性甲醛溶液固定,半数液氮保存,采用HE染色、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化,在蛋白和mRNA水平检测新生大鼠HIE时HIF-1α基因的表达.结果 缺氧缺血组大鼠相继表现为烦躁不安、全身发绀,呼吸加深加快、站立不稳、嗜睡、激惹或间断发作的痉挛和抽搐;HE染色显示:左侧大脑皮层出现局灶性神经元核固缩、核碎裂、核仁偏位、不清或消失、基质疏松;脑组织HIF-1αmRNA表达较对照组增加,尤其是缺氧缺血3 d组,但差异无统计学意义;免疫组化显示:缺氧缺血组1 d组和3 d组各时间点、各大鼠大脑皮层和海马区均可见不同程度的HIF-1α表达,明显高于假手术组(P=0.00),阳性表达主要在血管内皮细胞,海马和皮层的锥体细胞亦有HIF-1α阳性细胞分布.结论 新生大鼠缺氧缺血性脑病时HIF-1基因表达增强,主要表现在大脑血管内皮细胞.     

乙型病毒性肝炎中HBV标志物在不同临床型的表现

本文报告了120例HBVM在乙型病毒性肝炎中急性、慢性和重型各临床型的检测结果,发现抗-HBs的阳性率急性较慢性为高。HBeAg的阳性率急性较慢性和重型均高(P<0.01)。HBsAg、抗-HBe和抗-HBc的阳性率各型间无差异。对HBVM在乙型病毒性肝炎各临床型的表现意义进行了讨论。     

直接酶标法检测肝组织中丙型肝炎病毒抗原（HCAg—NS3）的研究

以单克隆抗－ＨＣＶ－ＮＳ３直接酶标法对石蜡包埋肝组织中丙型肝炎病毒抗原（ＨＣＡｇ－ＮＳ３）进行测定，该抗体系应用基因重组表达丙肝抗原（ＨＣＶ－ＮＳ３区－Ｃ３３－Ｃ）免疫小鼠并通过细胞融合术后获得，４９例病毒性肝炎患者肝组织测定结果，抗－ＨＣＶ阳性组的ＨＣＡｇ－ＮＳ３检出率５１．９％（１４／２７），抗－ＨＣＶ阴性组为１３．６％（３／２２），两组有显著性差异（Ｐ〈０．０１），以慢性重症肝炎和肝硬化患者     

乙型肝炎病毒感染诱发肝细胞癌机理的研究进展

原发性HCC的发生是一个多因素、多阶段极其复杂的过程，HBV长期慢性感染是其致病因素之一。HBV感染引起肝细胞的反复损伤坏死和增生、HBVDNA基因整合到肝细胞基因组、HBV基因表达产物HBx反式激活作用以及HBx和M—HBst引发细胞内ROS水平的升高等原因，都会引起HCC的发生。了解HBV引起肝细胞癌的致病机理，对于肝细胞癌的治疗和预防乙肝患者发展为肝细胞癌将有很大的帮助。     

PCR产物固相杂交酶联显色观察白细胞介素-2联合干扰素-α治疗慢性丙型肝炎疗效

目的 建立一步法基因扩增产物固相杂交酶联免疫吸附方法并用于临床观察白细胞介素—2(IL—2)联合干扰素—α(IFN—α)治疗慢性丙型肝炎的疗效。方法 7例患者中有4例患者接受IL—2和IFN—α联合治疗，其中2例为IFN—α单独或联合抗病毒药物治疗后复发者，未接受过抗病毒药物治疗者2例，疗程为一年。余下的3例患者为单独使用IFN—α治疗者。同时采用一步法基因扩增产物固相杂交酶联免疫吸附方法检测血清丙型肝炎病毒核酸(HCVRNA)滴度评价疗效。结果 IL—2联合干扰素治疗对干扰素治疗后复发者仍有效，完全应答率为100％；对未接受过抗病毒药物治疗者也有效，完全应答率为50％。结论 白细胞介素—2联合干扰素可作为初次治疗及复发后再治疗的选择方案。而一步法基因扩增产物固相杂交酶联显色检测血清HCV—RNA滴度的方法可快速、特异、灵敏地反应出治疗过程中HCV—RNA量的变化，为临床治疗提供可靠的疗效判定指标。