“双甲酸夹心”快速样本前处理方法的建立及在丝状真菌质谱鉴定中的初步应用

目的解决布鲁克microflex LT MALDI-TOF质谱仪在临床微生物学实验室丝状真菌鉴定中样本处理技术操作繁琐,耗时较长的弊端,建立一种快速、简便的丝状真菌质谱鉴定样本前处理方法。方法以2017年1月~2018年3月陕西省人民医院门诊及住院患者临床标本分离到的各种丝状真菌为研究对象,采用"双甲酸夹心"法进行上机前处理,即于96孔不锈钢靶板上用无菌微量吸头滴加1μl甲酸,再选取培养基上生长的丝状真菌菌落(幼龄菌丝体最好)用蘸取少许甲酸溶液的无菌牙签挑取菌丝体与甲酸溶液混合并进行充分研磨,待其自然干燥后在其表面再次滴加1μl的甲酸溶液,干燥后再加1μl基质液(仪器配套),待干燥后即可上机。对检测结果采用形态学和基因测序方法进行确证。结果新建方法前处理鉴定的丝状真菌有曲霉菌、青霉菌、拟青霉、镰刀菌、皮肤癣菌、接合菌、暗色真菌、双向真菌,并且对一些形态不典型或少见丝状真菌都能正确鉴定到种,如裂褶菌、红色单囊菌等。共鉴定菌株158株,其中113株可鉴定到种,31株鉴定到属,无法鉴定14株。结论新建立的丝状真菌样本快速前处理方法,大大缩短了样本前处理实验流程,具有快速、简便、高效、极低实验成本、鉴定正确率较高的特点,可快速为临床提供丝状真菌鉴定结果,使患者得到及时有效的抗真菌治疗。     

2018年陕西省人民医院细菌耐药性监测

目的研究陕西省人民医院2018年临床分离菌的分布及耐药情况。方法采用纸片扩散法和自动化仪器法进行药敏试验,结果分析采用WHONET 5.6软件。结果2018年该院临床共分离出非重复菌株8001株,其中革兰阳性菌占24.0%(1919/8001),革兰阴性菌占76.0%(6082/8001)。葡萄球菌属中,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的检出率分别为52.6%和69.4%。MRCNS中有2株(0.7%)对利奈唑胺耐药,其余葡萄球菌对万古霉素和利奈唑胺均全敏感。肠球菌属中粪肠球菌和屎肠球菌各占38.8%和56.1%。未发现对万古霉素、替考拉宁耐药的粪肠球菌,而屎肠球菌对两药的耐药率分别为0.6%和0.5%;粪肠球菌对利奈唑胺的耐药率为2.2%,屎肠球菌无耐药株。对头孢曲松耐药的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌的检出率分别为57.1%、61.4%和65.4%。对亚胺培南和美罗培南,大肠埃希菌的耐药率均为1.2%,肺炎克雷伯菌的耐药率为57.7%和58.1%,铜绿假单胞菌的耐药率为41.6%和34.3%。鲍曼不动杆菌对多黏菌素B和替加环素耐药率分别为0.4%和2.7%,对阿米卡星、米诺环素、甲氧苄啶-磺胺甲[口恶]唑耐药率相对较低(18.9%~48.4%),对其他抗菌药物耐药率均较高(81.7%~95.7%)。结论该院临床分离菌耐药性处于较高水平,尤其是耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌,对临床的抗菌治疗构成严重威胁,应继续加强耐药性监测并加强抗菌药物的规范管理和使用。