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细胞因子是在免疫和炎症反应中起重要作用的小分子蛋白质,克隆和研究新的细胞因子具有重要的理论意义和应用价值.我们利用抑制性减数杂交技术(SSH),从PHA刺激的U937细胞中成功克隆了一个新的细胞因子趋化素样因子1(CKLF1).CKLF1全长cDNA包括530个碱基,有一个编码99个氨基酸的完整开放读码框架.CKLF1存在其他三种变异体,命名为CKLF2,3,4,分别编码152,67和120个氨基酸,其中,CKLF2是CKIF的全基因产物.亚细胞定位和Western blot分析发现,CKLF1和CKLF3主要为分泌性表达,而CKLF2和CKLF4主要以膜结合形式表达.CKLF1与已发现的其他细胞因子之间没有明显的同源性,CKLF1在PHA刺激的U937细胞中的表达可被IL-10部分抑制.重组的CKLF1在体内外对嗜中性细胞、单核细胞和淋巴细胞具有明显的趋化活性;在体内能引起肺部明显的炎性改变,与CKLF1转基因小鼠的肺部病变相;CKLF1还能刺激骨髓细胞和小鼠骨骼肌细胞增殖.CKLF2能促进小鼠肌母C2C12细胞增殖和分化,促进BALB/c 3T3细胞增殖,并能拮抗撤血清引起的细胞凋亡,以上结果表明CKLF1可能在炎症和骨骼肌再生过程中发挥重要作用.在CKLF1,2的序列基础上,利用生物信息学方法克隆了小鼠CKLF2,4和大鼠CKLF1,2,它们与人CKLF1,2,4有相似的结构和功能;在人和小鼠CKLF的序列基础上,我们成功克隆了其他4个与CKLF有同源性的新基因,命名为趋化素样因子相关蛋白1-4(CKLF-RP1-4),它们与CKLF2有相似的结构,在16号染色体上成基因簇形式存在,因此,CKLF代表一个有重要功能的新基因超家族. 相似文献
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目的:建立pcDI-CCR4稳定转染并具有CCR4功能性表达的细胞株,为深入研究CCR4配体提供基础。方法:利用RT-PCR技术进行人CCR4的cDNA克隆化。通过基因转染技术获得稳定转染细胞株,利用趋骅实验、钙流实验证实稳定转染细胞能有效表达CCR4并具有生物功能。结果:成功地将CCR4 cDNA克隆于真核表达质粒pcDI,转染HEK293细胞获得稳定表达CCR4的HEK293细胞,可被RANTES诱导产生趋化反应和钙内流反应。结论:建立的pcDI-CCR4稳定转染细胞株能有效表达CCR4并具有生物功能。 相似文献
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抑制性底物杂交(SSH)技术研究BXSB小鼠的差异表达基因 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:利用抑制性底物杂交技术(Suppression subtractive hybridization,SSH),以BXSB狼疮小鼠为模型,研究系统性红斑狼(SLE)发病相关基因。方法:分离BXSB和C57-BL-6小鼠骨髓细胞,mRNA,反转录构建cDNA文库,利用技术研究BXSB小鼠差异表达基因。结果:获得了12个阳性克隆,其中有3个克隆编码TCR、MHCⅡ类分子及逆转录病毒基因表达产物,均 相似文献
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目的构建人肌纤生成调节因子1全长的真核表达质粒,并观察其在HEK293T细胞系及Sprague-Daw-ley乳鼠心肌细胞中的表达。方法从NCBI GenBank数据库中克隆得到人肌纤生成调节因子1基因(AF417001)全长序列,与真核表达载体质粒pcDNA3.1/Myc-His(-)B连接并转化大肠杆菌XL1-Blue,筛选阳性克隆,T7引物测序,转染细胞后以逆转录聚合酶链反应、Western Blotting方法检测人肌纤生成调节因子1的表达。结果pcDNA3.1/Myc-His(-)B-hMR-1质粒经测序证实目的基因序列正确,无碱基突变。该质粒转染到HEK293T细胞系和乳鼠心肌细胞后人肌纤生成调节因子1的转录水平及表达水平明显增高。结论成功构建了人肌纤生成调节因子1全长的真核表达载体并确定了简便有效的乳鼠心肌细胞瞬时转染方法。 相似文献
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三种镇痛方法用于人工流产术的临床效果分析 总被引:9,自引:0,他引:9
目的:观察利多卡因、异丙酚及异丙酚芬太尼复合液在人工流产中的镇痛效果。方法:320例早孕妇女,随机分成4组,3组人工流产术中分别用利多卡因、异丙酚、异丙酚芬太尼复合液镇痛,另一组为对照组,不采用任何干预措施。观察4组镇痛效果、人工流产综合征(PAAS)发生率、宫口松弛情况及出血量,并分别记录异丙酚及异丙酚芬太尼复合液组术前、睫毛反射消失、扩宫、术中及术后SBP、DBP、HR、SPO_2等参数。结果:异丙酚及异丙酚芬太尼复合液用于人工流产,起效快,镇痛效果明显,有效率达100%。与利多卡因组、对照组相比差异有显著性(P<0.01)。无一例发生PAAS,与对照组比较差异有显著性(P<0.01)。且苏醒早,术后血压、心率无明显变化,出血量与对照组相比无显著性差异。结论:异丙酚和异丙酚芬太尼复合液用于人工流产术可达到无痛人工流产的良好效果。 相似文献
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目的探讨功能失调性子宫出血诺舒(NovaSure)阻抗控制子宫内膜切除术护理干预的效果。方法选择2012年9月—2013年2月我院予以诺舒阻抗控制子宫内膜切除术治疗的功能失调性子宫出血患者76例,按照随机数字表法分成2组,每组38例,对照组予以常规护理,研究组予以护理干预,分析2组疗效和护理满意度情况。结果研究组治疗效果显效率94.87%,比对照组的76.92%高;且研究组护理满意度97.44%,比对照组的71.79%高,差异均有统计学意义(P〈0.05)。结论诺舒阻抗控制子宫内膜切除术治疗功能性失调子宫出血,予针对性护理干预能有效提升疗效和护理满意度,具有一定临床应用和研究价值。 相似文献