血管内皮生长因子在原核细胞中的活性检测

背景：目前血管内皮细胞生长因子制备困难，来源有限，限制了临床的应用。 目的：用基因工程的方法在大肠杆菌中诱导表达人血管内皮生长因子165, 分离纯化并检测其免疫学以及生物学活性。为后期构建携带血管内皮生长因子165蛋白的预成血管化组织工程骨提供了充足的蛋白来源。 设计、时间及地点：开放性实验，单一样本观察，于2005-04/2007-01 在陕西省疾病预防控制中心病毒室完成。 材料：携带目的基因血管内皮生长因子165的克隆质粒PUC18-VEGF165由西安交通大学第二医院时志斌博士构建, PGEM-T easy质粒购自美国Promerga公司，原核表达质粒购自德国Qiagen公司，DH5α、M15、JM109菌株由陕西省疾病预防控制中心病毒研究室保存。 方法：利用聚合酶链反应亚克隆的方法获得目的基因片段，构建表达质粒pQE30-VEGF165，在大肠杆菌JM109中用IPTG进行诱导表达并使用Ni2+-NTA进行蛋白纯化。经过纯化获得了血管内皮生长因子165蛋白。 主要观察指标：①人血管内皮生长因子165基因的亚克隆结果。②重组表达载体pQE30-hVEGF165的鉴定结果。③人血管内皮生长因子165蛋白的诱导表达、纯化。④使用ELISA和Western blot技术检测人血管内皮生长因子165蛋白免疫学活性。⑤鸡胚尿囊绒毛膜试验和matrigel血管形成实验检测其生物学活性。 结果：重组表达质粒pQE30- VEGF165在大肠杆菌中成功地表达了相对分子质量为23 000的蛋白，其以不溶性的包涵体形式存在，占菌体蛋白的30%左右，经过分离和Ni柱纯化获得了血管内皮生长因子165蛋白，浓度约为0.2 g/L, ELISA和Western blot实验显示其具有良好的免疫学活性，鸡胚尿囊绒毛膜试验和matrigel血管形成实验显示表达蛋白具有良好的生物学活性。 结论：实验在原核细胞中稳定、高效表达了具有活性的血管内皮生长因子165蛋白，为后期预构血管化组织工程骨的构建提供了充足的蛋白来源。     

HBV DNA含量与T淋巴细胞的相关性研究

目的 观察乙型肝炎病毒(HBV)感染者HBV DNA的含量与T淋巴细胞亚群的相关性,探讨HBV感染者细胞免疫功能的变化.方法 收集60例HBV感染者的血清,用荧光定量PCR仪检测其HBV DNA的含量,按HBV DNA的浓度分为HBV DNA阴性组(<500.00 copy/mL)、HBV DNA低浓度组[(500～1)×105 copy/mL]和HBV DNA高浓度组(1×105～1×108 copy/mL),另外取20例健康人的血清作对照,同时取上述80例的新鲜外周血,用流式细胞仪检测他们的T淋巴细胞亚群CD3+、CD3+/CD4+、CD3+/CD8+及CD3+CD4+/CD3+、CD8+,对其结果 进行分析.结果 HBV DNA阴性组和低浓度组的CD3+CD4+、CD3+CD8+和CD3+CD4+/CD3+CD8+与健康对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05),HBV DNA高浓度组的CD3+CD4+、CD3+CD8+和CD3+CD4+/CD3+CD8+与健康对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),HBV DNA低浓度组和高浓度组的HBV DNA含量与CD3+CD4+和CD3+CD4+/CD3+CD8+呈现负相关关系,与CD3+CD8+呈现正相关关系,相关系数分别为0.46、0.69和0.52.结论 HBV DNA对细胞免疫产生了影响,HBV DNA含量与T淋巴细胞亚群的分布存在一定的相关性.     

血管内皮生长因子在原核细胞中的活性检测术

背景:目前血管内皮细胞生长因子制备困难,来源有限,限制了临床的应用.目的:用基因工程的方法在人肠杆菌中诱导表达人血管内皮生长因子165,分离纯化并检测其免疫学以及生物学活性.为后期构建携带血管内皮生长因子165蛋白的预成血管化组织工程骨提供了充足的蛋白来源.设计、时间及地点:开放性实验,单一样本观察,于2005-04/2007-01在陕两省疾病预防控制中心病毒室完成.材料:携带目的基因血管内皮生长因子165的克降质粒PUC18-VEGF165由西安交通大学第二医院时志斌博士构建,PGEM-T easv 质粒购自美国Promerga公司,原核表达质粒购自德国Qiagen公司,DH5 α、M15、JM109菌株由陕西省疾病预防控制中心病毒研究室保存.方法:利用聚合酶链反应亚克隆的方法获得目的基因片段,构建表达质粒pQE30-VEGF165,在大肠杆菌JM109中用IPTG进行诱导表达并使用Ni2 -NTA进行蛋纯化.经过纯化获得了血管内皮生长因子165蛋白.主要观察指标:①人血管内皮生长因子165基因的亚克隆结果.②重组表达载体pQE30-hVEGF165的鉴定结果.③人血管内皮生长因子165蛋白的诱导表达、纯化.④使用ELISA和Western blot技术检测人血管内皮生长因子165蛋白免疫学活性.⑤鸡胚尿囊绒毛膜试验和matrigel血管形成实验检测其生物学活性.结果:重组表达质粒pQE30-VEGF165在大肠杆菌中成功地表达了相对分子质量为23 000的蛋白,其以不溶性的包涵体形式存在,占菌体蛋白的30%左右,经过分离和Ni柱纯化获得了血管内皮生长因子165蛋白,浓度约为0.2g/L,ELISA和Western blot实验显示其具有良好的免疫学活性,鸡胚尿囊绒毛膜试验和matrigel血管形成实验显示表达蛋白具有良好的生物学活性.结论:实验在原核细胞中稳定、高效表达了具有活性的血管内皮生长因子165蛋白,为后期预构血管化组织工程骨的构建提供了充足的蛋白来源.     

Cysc、NAG、β_2-微球蛋白在肾损伤患者中的应用

目的分析评价胱抑素C(Cysc)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)、β2-微球蛋白(β2-MG)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)5项生物学指标在诊断系统性红斑狼疮、糖尿病和高血压疾病所致早期肾损伤患者中的临床效能。方法收集本院高血压患者61例,系统性红斑狼疮患者62例,糖尿病患者59例,对照组56例。采用免疫透射比浊法测定Cysc,采用胶乳增强免疫比浊法测定β2-MG,采用两点法测定NAG,酶法测定血Scr,UV-GLDH法测定血清BUN,并对数据进行统计学分析。结果病例组血BUN和Scr浓度与对照组比较差异无统计学意义(P0.05),而Cysc、尿β2-MG和NAG浓度与对照组比较,差异有统计学意义(P0.01)。SLE、糖尿病、高血压所致早期肾损伤各诊断指标ROC曲线下面积最大的分别为血NAG、尿β2-MG和Cysc。在诊断早期肾损伤患者中联合检测较单项指标阳性率高,以联合检测Cysc、尿β2-MG和NAG这3项肾功能指标组阳性率最高,达88.7%,明显高于2项联合检测(77.4%、70.9%、66.1%)。结论对诊断系统性红斑狼疮、糖尿病、高血压所致早期肾损伤灵敏度、特异度最佳的诊断生物学指标分别为血NAG、尿β2-MG和Cysc。三者联合检测具有较高的检出率、灵敏度和特异度,对肾损伤患者的早期诊断具有重要的临床价值,适于在临床工作中推广使用。     

全血血液抗冲击过载试验研究

目的研究空投到不同地面的冲击过载对血液性能的影响,考察自制缓冲箱的抗冲击过载的效果。方法 2016年1月,以自行研制的缓冲箱为载体,用2.5 m高处自由落体跌落试验模拟以7 m/s的速度坠落在不同硬度的地面上,对试验前后全血血液的红细胞计数、血红蛋白、K+浓度、游离血红蛋白(FHB)的变化进行检查对比分析。结果跌落于软土地面、硬土地面上缓冲箱对跌落冲击过载的衰减率分别为52.7%和62.5%,跌落于水泥地面上缓冲箱对跌落冲击过载的衰减率大于45.0%。经缓冲箱缓冲后跌落于软土地面、硬土地面、水泥地面的全血血液制品所受冲击过载值分别为123、312、550 g。与试验前相比,跌落试验后全血红细胞形态检查结果均出现少量钝锯齿形红细胞,软土、水泥地面坠落试验后,FHB显著增高,平均值分别为(35.60±2.80)mg/L和(43.88±11.57)mg/L,差异有统计学意义(P<0.01),但未超出临床血液正常值(≤2 000 mg/L),全血血液样本依旧满足使用要求。结论 2.5 m高处自由落体跌落对血液中FHB影响最大,缓冲箱能够有效起到抗冲击过载作用,保护血液制品投送需求。     

多发性骨髓瘤与细胞免疫的研究进展

多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是浆细胞的恶性肿瘤。骨髓瘤细胞起源于B记忆细胞或幼浆细胞。细胞因子白介素-6(IL-6)是促进B细胞分化成浆细胞的调节因子。进展性MM患者骨髓中IL-6异常升高,提示以IL-6为中心的细胞因子网络失调导致骨髓瘤细胞增生。我国MM发病率约为1/10万,低于西方工业发达国家(约4/10万)。发病年龄大多在(50～60)岁之间,40岁以下者较少见,男女之比为3:2。近年来,随着我国人口老龄化,骨髓瘤的发病率正在     

血管内皮生长因子在原核细胞中的活性检测

背景：目前血管内皮细胞生长因子制备困难，来源有限，限制了临床的应用。目的：用基因工程的方法在大肠杆菌中诱导表达人血管内皮生长因子165，分离纯化并检测其免疫学以及生物学活性。为后期构建携带血管内皮生长因子165蛋白的预成血管化组织工程骨提供了充足的蛋白来源。设计、时间及地点：开放性实验，单一样本观察，于2005-04／2007-01在陕西省疾病预防控制中心病毒室完成。材料：携带目的基因血管内皮生长因子165的克隆质粒PUC18-VEGF165由西安交通大学第二医院时志斌博士构建，PGEM-Teasy质粒购自美国Promerga公司，原核表达质粒购自德国Qiagen公司，DH5o、M15、JM109菌株由陕西省疾病预防控制中心病毒研究室保存。方法：利用聚合酶链反应亚克隆的方法获得目的基因片段，构建表达质粒pQE30-VEGF165，在大肠杆菌JM109中用IPTG进行诱导表达并使用Ni2＋NTA进行蛋白纯化。经过纯化获得了血管内皮生长因子165蛋白。主要观察指标：①人血管内皮生长因子165基因的亚克隆结果。②重组表达载体pQE30-hVEGF165的鉴定结果。③人血管内皮生长因子165蛋白的诱导表达、纯化。④使用ELISA和Western blot技术检测人血管内皮生长因子165蛋白免疫学活性。⑤鸡胚尿囊绒毛膜试验和matrigel血管形成实验检测其生物学活性。结果：重组表达质粒pQE30-VEGF165在大肠杆菌中成功地表达了相对分子质量为23000的蛋白，其以不溶性的包涵体形式存在，占菌体蛋白的30％左右，经过分离和Ni柱纯化获得了血管内皮生长因子165蛋白，浓度约为0．2g／L，ELISA和Western blot实验显示其具有良好的免疫学活性，鸡胚尿囊绒毛膜试验和matrigel血管形成实验显示表达蛋白具有良好的生物学活性。结论：实验在原核细胞中稳定、高效表达了具有活性的血管内皮生长因子165蛋白，为后期预构血管化组织工程骨的构建提供了充足的蛋白来源。     

HBV-DNA、AFU和AFP水平与肝损害的相关性

目的探讨HBV-DNA定量与α-L-岩藻糖苷酶（AFU）和甲胎蛋白（AFP）浓度变化的关系。方法对373例慢性乙型肝炎患者血清进行HBV-DNA定量、AFU与AFP浓度检测,根据HBV-DNA水平分为3组：HBV-DNA 1×103copies/ml以下为阴性组;HBV-DNA 1×104～1×105copies/ml为低病毒量组;HBV-DNA 1×106～1×108copies/ml为高病毒量组进行分析。结果不同病毒量组的AFU、AFP浓度变化显示HBV-DNA低病毒量组和高病毒量组与正常对照组比较的差异则有统计学意义（P〈0.05）。AFU与AFP的阳性比例随病毒复制量的增加而升高。结论对乙型肝炎病毒感染者,应定期进行血清HBV-DNA定量检测,评估病毒的复制状况,并同时检测AFU和AFP浓度,尽早发现肝组织的损害程度及演变过程,达到早期治疗的目的 。