HSP70-肿瘤肽复合物的纯化及其对肝癌细胞株HepG-2增殖的作用

目的:应用快速蛋白液相色谱(FPLC)系统从肝癌组织中分离和纯4EHSP70-肽复合物,并研究其对肝癌细胞系HepG-2增殖的影响．方法:将组织进行匀浆、高速离心提取总蛋白后依次进行ConA-Sepharose亲和层析和 DEAE-Sephacel子交换层析分离纯化,所得蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot进行蛋白分子质量及性质鉴定,Bradford 法测定蛋白浓度;利用MTT方法检测HSP70- 肽复合物对HepG-2细胞增长的情况．结果:分离、纯化得到的蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、考马斯量蓝鉴定为单一带, 分子质量为70 kDa;Western blot结果证实为 HSP70,每10 g组织最终获得1．5 mg的HSP70; HSP70刺激组12,48,72 h与对照组的A值之间有显著差异(0．1 mg／L:t=-0．2500,P=0．00; t=-0．1777,P=0．001:t=-0．3094,P=0．001; 0．5 mg／L:t=-0．2878,P=0．00;t=-0．2044,P= 0．00;t=-0．3285,P=0．00;1 mg／L:t=-0．3118, P=0．00;t=-0．2592,P=0．00;t=-0．1994, P=0．025;5 mg／L:t=-0．4007,P=0．00;t= -0．1302,P=0．016;t=-0．2537,P=0．005),细胞存活率明显高于对照组(P<0．01)．结论:使用本分离纯化方法可获得高纯度 HSP70肽复合物;HSP70肽复合物可以促进 HepG-2细胞的生长．     

TLR4受体在肝癌细胞株HepG-2的表达

目的：探讨TLR4受体在肝癌细胞株HepG-2和肝癌组织中的表达。方法：用RT-PCR和Western-blot方法检测肝癌细胞株HepG-2中TLR4基因的转录和蛋白的表达的情况,同时用免疫组化的方法检测肝癌组织中TLR4的表达的情况。结果：肝癌细胞株HepG-2中存在TLR4基因的转录和蛋白的表达。TLR4受体主要表达位于肝癌组织细胞的细胞膜上,其阳性率约为76.7%。结论：肝癌细胞株HepG-2和肝癌组织中均有TLR4的表达。     

误诊为非典型急性阑尾炎3例

1病例报告例1:女,35岁。入院前2 d感觉右下腹疼痛,为持续性疼痛,时轻时重,可以忍受,轻微恶心,低热,无盗汗,既往健康。查体:T 37.5℃,体态偏瘦,呼吸平稳,心肺未见异常,腹平软,右中下腹部压痛,以右下腹部为重,无肌紧张及反跳痛。血WBC11.5×109/L,N 0.58,L 0.37。诊断:急性阑尾炎。术中所见:阑尾细长,无明显炎症改变,小肠及系膜未见异常,盲肠正常。行阑尾切除术。术后体温波动于37.3~37.8℃之间,出现胸闷乏力。胸片示:右胸腔中量积液。经结核菌素试验及胸穿抽液化验诊断为结核性胸膜炎。抗结核治疗好转,转结核病院。阑尾病理:正常阑尾。例2…     

吸烟与女性乳腺癌发病关系病例对照研究

目的了解吸烟情况与女性乳腺癌发病的关系,为预防乳腺癌提供相关依据。方法采用以医院为基础的1:1病例对照研究方法,对从2009年1月-2012年6月前往沈阳医学院奉天医院、沈洲医院和沈阳市第五人民医院就诊的163例女性乳腺癌患者和同期就诊的163例非肿瘤、非生殖及内分泌系统疾病女性患者进行了相关危险因素问卷调查。结果病例组的主动吸烟、被动吸烟、主动吸烟量大、被动吸烟量大、被动吸烟年限长、怀孕期间吸烟和首次吸烟时<18岁所占比例分别为9.20%、34.36%、5.52%、27.61%、25.15%、23.31%和17.79%,均高于对照组的3.68%、13.49%、1.23%、6.13%、9.20%、5.52%和4.29%(均P<0.05),多因素条件logistic回归分析表明,有肿瘤家族史、遭遇重大生活事件、肥胖、主动吸烟量大、被动吸烟量大及怀孕期间吸烟是女性乳腺癌发病的危险因素。结论主动及被动吸烟量大、孕期吸烟行为可增加女性乳腺癌患病风险。     

人热休克蛋白70基因在大肠杆菌中的表达及纯化

目的:构建人热休克蛋白70(HSP70)的原核表达载体,诱导其表达并纯化.方法:应用PCR技术从人胆管癌组织中扩增出HSP 70基因片段,经T-A克隆连接到末端经平滑处理后的pMD18-T Simple质粒并测序.利用双酶切技术构建重组原核表达载体pGEX-4T-1-HSP 70,并转化大肠杆菌JM 109,经IPTG诱导后表达得到HSP70融合蛋白.应用Glutathione-Sepharose4B亲和层析柱提纯融合蛋白,用生物素化凝血酶分离并纯化目的蛋白,最后行Wsetern blot鉴定.结果:PCR扩增结果与预计目的基因大小一致;序列分析与GeneBank中收录完全一致;重组表达载体pGEX-4T-1-HSP 70构建成功;Western blot结果显示目的蛋白可以与兔抗人的HSP70单克隆抗体特异性结合.结论:HSP 70编码序列已经成功克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,并在大肠杆菌JM 109中获得表达.     

甲状腺良性病变术中损伤喉返神经的原因及预防(附2 266例分析)

目的探讨甲状腺良性病变手术所致喉返神经（RLN）损伤的原因及预防措施。方法回顾分析2000年1月至2004年7月2266例甲状腺良性痛变的手术资料，对甲状腺良性病变的位置及手术方法与RLN损伤的关系进行比较分析。结果位于甲状腺背侧的良性病变RLN损伤率为8．62％（81／940），显著高于甲状腺其他部位病变的手术损伤率（0．15％）。位于甲状腺背侧的结节性甲状腺肿、甲状腺腺瘤，显露RLN组的喉返神经损伤率为1．56％（1／64）、0（0／33），显著低于未显露喉返神经的损伤率[8．53％（59／692）、13．9l％（21／151）]。位于甲状腺其他部位的良性病变，显露RLN组与未显露喉返神经组的RLN损伤率差异无显著性。结论甲状腺良性病变手术，喉返神经损伤与病变位置有关；结节性甲状腺肿、甲状腺腺瘤位于甲状腺背侧，手术应常规显露RLN，而位于其他部位则不需常规显露RLN，可采用RLN区域保护法。     

固醇携带蛋白2与胆囊胆固醇结石形成关系的研究

目的:探讨固醇携带蛋白2(SCP2)与胆囊固醇结石形成的关系.方法:胆囊胆固醇结石病人的肝组织标本20例,正常肝组织标本10例.应用逆转录聚合酶链反应技术检测SCP2 mRNA.结果:实验组的SCP2 mRNA的光密度值为0.90±0.34,对照组的光密度值为0.56±0.19,两组间存在显著性差异(P＜0.05).结论:SCP2与胆囊胆固醇结石的形成可能存在一定关系.     

原发小肠肿瘤误诊15例分析

现将我科1999～2004年原发小肠肿瘤误诊15例分析如下.     

隐匿性胸腹裂孔疝致慢性胃扭转、腹内疝延误诊断1例

1 病例报告 女,62岁.因进食后反复呕吐伴上腹部不适1个月入院.1个月来症状逐渐加重,无呕血及黑便,无胸闷气短.入院前10 d曾于门诊就诊,胃镜检查提示胃扭转,并行胃镜下胃扭转复位治疗,症状无明显缓解.既往无胸腹及外伤手术史.查体:一般状态可,双肺叩诊无浊音,听诊呼吸音清,腹形对称,全腹平坦,无胃肠型,上腹正中轻压痛,无肌紧张,无振水音,肠鸣音正常.     

胆囊胆固醇结石与肝细胞胆管膜上转运子BSEP、MRP2和MDR3关系的研究

目的探讨肝细胞胆管膜上转运子BSEP、MRP2和MDR3与胆囊胆固醇结石形成的关系。方法收集胆囊胆固醇结石患者的肝组织标本20例，正常肝组织标本10例。应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术和Western blot技术检测BSEP、MRP2及MDR3 mRNA和蛋白的表达。结果胆囊胆固醇结石患者肝组织中BSEP、MRP2和MDR3的mRNA及蛋白表达均显著低于正常肝组织（P〈0．01）。结论BSEP、MRP2和MDR3的表达降低可能与胆囊胆固醇结石的形成有关。