骨髓基质细胞在胞外基质涂层钛表面的黏附和铺展

背景：为模拟胞外基质对生物行为的调控功能,通常采用基质中的活性成分对钛表面进行改性,但这些单一的活性成分与天然基质仍有差距。 目的：在体外观察成骨细胞自身分泌的胞外基质修饰的钛表面对骨髓基质干细胞生物学行为的影响,为进一步指导钛种植体表面的仿生构建提供实验依据。 设计、时间及地点：细胞-材料学体外对照观察,于2008-12/2009-02在安徽医科大学医学生物工程实验室完成。 材料：SPF级新生1~3 d龄SD乳鼠2只,SD大鼠2只,由安徽省实验动物中心提供。TA2纯钛棒为宝鸡金埠钛设备有限公司产品。 方法：取SD乳鼠,采用改良组织块法培养成骨细胞。取直径12 mm的钛棒,加工成厚1 mm纯钛片,消毒后放入24孔培养板中,用DMEM培养液将成骨细胞浓度调整为3×108 L-1,取1 mL/孔接种于钛片上,经过反复冻融脱去细胞留下基质,即为基质化钛片。取SD大鼠,采用全血贴壁法培养骨髓基质干细胞,取传至第3代的细胞,分为基质化钛片组、纯钛片组,用DMEM培养液将其浓度调整为1×108 L-1,分别接种于基质化钛片和纯钛片上,1 mL/孔。 主要观察指标：通过荧光免疫组化、扫描电镜观察和MTT检测,评价两组钛片上骨髓基质细胞的早期黏附及铺展情况。 结果：接种4 h时与纯钛片组比较,基质化钛片组细胞黏附率显著升高(P < 0.05)。接种4 h后,骨髓基质干细胞在基质化钛片表面已呈现出一定的附着形态;24 h后细胞呈良好的铺展形态,紧贴附于基质化钛片表面,出现伪足突起,细胞间以这种突起建立相互联系;72 h后细胞充分铺展,胞体平铺面积迅速扩大。 结论：胞外基质的存在能够促进骨髓基质细胞的早期黏附,并且有利于细胞的进一步铺展。     

非小细胞肺癌患者癌组织RAR-β基因甲基化的检测及其临床意义

目的 研究非小细胞肺癌患者癌组织RAR-β基因甲基化及其临床意义.方法 选择80例非小细胞肺癌患者,用甲基化特异性PCR(MSP)检测肺癌组织和癌旁正常组织RAR-β基因甲基化.结果 肺癌组织RAR-β基因甲基化率(57.5%)高于癌旁组织甲基化率(17.5%),差异有统计学意义(P<0.01);临床分期0~Ⅰ期与Ⅱ~...     

骨髓基质细胞在胞外基质涂层钛表面的黏附和铺展

背景:为模拟胞外基质对生物行为的调控功能,通常采用基质中的活性成分对钛表面进行改性,但这些单一的活性成分与天然基质仍有差距.目的:在体外观察成骨细胞自身分泌的胞外基质修饰的钛表面对骨髓基质干细胞生物学行为的影响,为进一步指导钛种植体表面的仿生构建提供实验依据.设计、时间及地点:细胞-材料学体外对照观察,于2008-12/2009-02在安徽医科大学医学生物工程实验室完成.材料:SPF级新生1～3 d龄SD乳鼠2只,SD大鼠2只,由安徽省实验动物中心提供.TA2纯钛棒为宝鸡金埠钛设备有限公司产品.方法:取SD乳鼠,采用改良组织块法培养成骨细胞.取直径12 mm的钛棒,加工成厚1 mm纯钛片,消毒后放入24孔培养板中,用DMEM培养液将成骨细胞浓度调整为3×10.L-1,取1 mL/孔接种于钛片上,经过反复冻融脱玄细胞留下基质,即为基质化钛片.取SD大鼠,采用全血贴壁法培养骨髓摹质干细胞,取传至第3代的细胞,分为基质化钛片组、纯钛片组,用DMEM培养液将其浓度调整为1×108L-1,分别接种于基质化钛片和纯铁片上,1 mL/孔.主要观察指标:通过荧光免疫组化、扫描电镜观察和MTT检测,评价两组钛片上骨髓基质细胞的早期黏附及铺展情况.结果:接种4 h时与纯钛片组比较,基质化钛片组细胞黏附率显著升高(P＜0.05).接种4 h后,骨髓基质干细胞在基质化钛片表面已呈现出一定的附着形态:24 h后细胞呈良好的铺展形态,紧贴附于基质化钛片表面,出现伪足突起,细胞间以这种突起建立相互联系;72 h后细胞充分铺展,胞体平铺面积迅速扩大.结论:胞外基质的存在能够促进骨髓基质细胞的早期黏附,并且有利于细胞的进一步铺展.     

生物技术大实验教学改革的若干实践

生物技术是一门涉及领域宽、涵盖范围广、基础性强的新兴生物学科,是现代生物学发展并与相关学科交叉融合的产物.生物技术包括基因工程、蛋白质工程、细胞工程、发酵工程等领域[1].     

重组人干扰素α-2b对腭裂术后瘢痕成纤维细胞影响的实验研究

目的探讨重组人干扰素α-2b(rhIFNα-2b)对体外培养的腭裂术后裸露骨面瘢痕来源的成纤维细胞生物学作用的影响。方法制作兔腭裂术后裸露骨面瘢痕动物模型,利用体外细胞培养技术,通过MTT法、3H-TDR渗入法、流式细胞术等方法观察、分析rhIFNα-2b对腭裂术后瘢痕成纤维细胞生物学行为的影响,数据采用方差分析及q检验处理。结果与对照组比较,实验组加入rhIFNα-2b后,腭裂术后瘢痕成纤维细胞的生长趋势及增殖活性及被明显抑制,G1期细胞百分数明显增高。结论rhIFNα-2b对腭裂术后瘢痕成纤维细胞的生长趋势及增殖活性具有明显抑制作用,说明在防治腭裂术后裸露骨面瘢痕的形成中有一定的应用价值。     

肺癌患者癌组织和血浆p16基因甲基化的检测及其临床意义

目的研究非小细胞肺癌患者癌组织和血浆p16基因甲基化及其临床意义。方法选择120例非小细胞肺癌患者,用巢式甲基化特异性聚合酶链反应法检测其肺癌组织、癌旁正常组织和外周血血浆p16基因的甲基化,并对120例正常对照组血浆样品进行p16基因甲基化检测,各组检测结果进行比较。结果肺癌组织p16基因甲基化率44.2%,高于癌旁组织的11.7%(P0.01);非小细胞肺癌患者血浆样品中p16基因甲基化检测率为32.5%,对照组血浆未检测到p16基因甲基化(P0.01);肺癌患者血浆样品与癌组织p16基因甲基化检出率比较差异无显著性(P0.05);患者血浆样品与癌旁组织p16基因甲基化检出率比较差异有显著性(P0.01)。结论肺癌患者癌组织和血浆样本p16基因甲基化的检测都为肺癌的早期筛查和诊断提供了有价值的参考信息。     

非小细胞肺癌患者血浆RAR-β基因甲基化检测及其临床意义

检测非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer patients,NSCLC）患者组织和血浆中RAR-β基因甲基化状态,探讨RAR-β基因甲基化在NSCLC筛查和早期诊断中的临床意义。方法：选择120例NSCLC患者,用巢式甲基化特异性聚合酶链反应（nested methylation-specific PCR,nMSP）检测肺癌组织、癌旁组织和外周血血浆RAR-β基因的甲基化,并对120例正常对照组血浆样品进行RAR-β基因甲基化检测,各组检测结果进行比较。结果：肺癌组织RAR-β基因甲基化率59.2%,高于癌旁组织的17.5%（P<0.001）;NSCLC患者血浆样品中RAR-β基因甲基化检测率为27.5%,对照组血浆未检测到RAR-β基因甲基化（P<0.001）;肺癌患者血浆样品与癌组织RAR-β基因甲基化检出率有显著相关性（P<0.001）;血浆中RAR-β基因的甲基化检出率与NSCLC临床分类、临床分期和病理类型均无明显相关性。结论：利用nMSP法对血浆样本RAR-β基因甲基化的检测可为肺癌的早期筛查和诊断提供有价值的信息。     

钛表面胞外基质涂层对骨髓基质干细胞增殖和分化的影响

目的 在体外研究成骨细胞自身分泌的胞外基质作为修饰的钛表面对骨髓基质干细胞的生物学效应,并为进一步指导钛种植体表面的仿生构建提供依据.方法 在纯钛表面(CpTi)培养成骨细胞,经过反复冻融脱去细胞留下基质,在基质化钛表面(Ti/ECM)和CpTi培养骨髓基质干细胞,通过荧光显微镜观察、噻唑蓝(MTT)比色试验、碱性磷酸酶(ALP)活性检测,对比评价两组钛片上骨髓基质细胞的生长增殖、分化情况.结果 去细胞后,钛表面存有胞外基质的生物活性成分;接种1、3、5、7 d后,Ti/ECM组的细胞增殖与CpTi组之间差异有统计学意义(P<0.05);接种5 d后,Ti/ECM表面的细胞分化与CpTi的之间差异有统计学意义(P<0.05).结论钛表面的基质涂层能够促进细胞的增殖,并具有诱导细胞向成骨细胞分化的作用.     

血清肿瘤标志物对类风湿性关节炎相关间质性肺病的诊断价值研究

目的 检测血清肿瘤标志物在类风湿性关节炎（RA）患者中的表达,探讨相关肿瘤标志物对类风湿性关节炎并发间质性肺病（RA-ILD）的诊断价值。方法 回顾性分析2021年1月—2023年4月在安徽中医药大学第一附属医院风湿科住院的101例RA患者的病历资料。根据高分辨率CT(HRCT)确诊RA-ILD患者31例（RA-ILD组）,类风湿性关节炎不伴间质性肺病（RA-non-ILD）患者70例（RA-non-ILD组）。收集两组患者的病历资料及抗环瓜氨酸肽抗体（anti-CCP）、类风湿因子（RF）、C反应蛋白（CRP）、血细胞沉降率（ESR）等实验室检测数据。采用化学发光法检测甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原（CEA）、糖类抗原125(CA125)、糖类抗原153(CA15-3)、糖类抗原199(CA199)、细胞角蛋白-19片段（CA21-1）和人附睾蛋白4(HE4)的表达。结果RA-ILD组血清RF、CRP、ESR水平均高于RA-non-ILD组（P <0.05）。RA-ILD组血清CA125、HE4水平均高于RA-non-ILD组（P <0.05）。<50岁、50～<...     

5-氮杂-2′-脱氧胞苷对肺癌SPC-A-1细胞p16、MGMT基因甲基化及其表达的影响

目的观察5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对体外培养的肺癌SPC-A-1细胞p16、MGMT基因启动子区DNA甲基化状态及其表达的影响,探讨肺癌细胞p16、MGMT基因失活的机制及去甲基化制剂对p16、MGMT基因表达的调控。方法 5-Aza-CdR处理体外培养的肺癌SPC-A-1细胞,甲基化特异性PCR（MSP）法检测用药前后细胞p16、MGMT基因的甲基化状态,RT-PCR法检测用药前后细胞p16、MGMT mRNA。结果加入5-Aza-CdR前,SPC-A-1细胞p16、MGMTmRNA表达缺失,其启动子区域表现为DNA甲基化。加入5-Aza-CdR后,SPC-A-1细胞中p16、MGMT基因呈现DNA去甲基化,而且表达缺失的p16、MGMT mRNA重新表达。结论启动子区高甲基化是肺癌细胞p16、MGMT基因失活的主要原因之一,去甲基化制剂5-Aza-CdR能逆转p16、MGMT基因甲基化状态,从而调控p16、MGMT基因表达。