表达人JNK基因重组腺病毒的构建和鉴定

目的 制备表达人c-jun氨基末端激酶(JNK)复制缺陷型重组腺病毒.方法 将重组穿梭载体pAdTrack-CMV-WT-JNK线性化后,与pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5138,进行同源重组得到重组腺病毒载体.将重组腺病毒载体转染入包装细胞HEK293内制备复制缺陷型重组腺病毒,并经PCR及DNA测序鉴定.结果 JNK重组腺病毒载体能有效转染HEK293细胞并在细胞内成功包装,5 d后可以观察到绿色荧光蛋白(GFP)明显表达,搜集的病毒经过PCR扩增得到特定JNK基因片段并测序鉴定.动物实验证实构建的Ad-WT-JNK能有效在肝组织表达.结论 该研究成功构建了JNK重组腺病毒载体及相应重组腺病毒颗粒,为进一步研究JNK的作用及应用JNK进行相关疾病的基因治疗奠定了基础.     

DN—JNK基因重组腺病毒的构建和鉴定

目的制备表达人c-jun氨基末端激酶（JNK）复制缺陷型重组腺病毒（Ad—DN—JNK）,并通过动物实验进行功能鉴定。方法将重组穿梭载体pAdTrack—CMV—DN—JNK线性化后,与pAdEasy—1共转化大肠杆菌BJ5138,进行同源重组得到重组腺病毒载体。将重组腺病毒载体转染入包装细胞HEK293内制备复制缺陷型重组腺病毒,并经PCR及DNA测序鉴定。Western blot检测Ad—DN-JNK在SD大鼠肝组织中JNK1蛋白表达情况,及胰岛素受体底物1丝氨酸307（IRS-1^Ser307）磷酸化水平。结果JNK重组腺病毒载体能有效转染HEK293细胞并在细胞内成功包装,5d后观察到绿色荧光蛋白（GFP）明显表达,搜集的病毒经过PCR扩增得到了特定JNK基因片段并测序鉴定。所制备的Ad—DN—JNK滴度为2．5×10^10pfu／ml,动物实验证实构建的Ad—DN-JNK能有效在肝组织表达。结论该研究成功构建了DN—JNK重组腺病毒载体及相应重组腺病毒颗粒,动物实验证明Ad—DN—JNK能有效介导DN—JNK基因蛋白表达并下调IRS-1^Ser307磷酸化水平。为进一步研究JNK的作用及应用DN—JNK进行相关疾病的基因治疗奠定基础。     

糖负荷对小鼠腹内侧核PGC-1α表达的影响

目的探讨小鼠糖负荷后血糖的变化与下丘脑腹内侧核神经元表达PGC-1α变化之间的关系。方法昆明小鼠禁食禁水过夜后,随机分为空腹对照组、灌胃50%葡萄糖(2 g/kg)30、60、120和180 min组。分别于观察时间点尾静脉血糖测试结果,并利用免疫组织化学方法半定量观察小鼠下丘脑腹内侧核PGC-1α阳性细胞的变化。结果糖负荷结果:与空腹对照组相比,糖负荷后血糖开始升高,30 min组血糖水平最高,之后开始下降,180 min组降至糖负荷前水平。分别为7.25±2.84(对照组)、16.22±3.51(30 min组)、14.08±4.14(60 min组)、12.07±1.85(120 min组)、10.12±1.31 mmol/L(180 min组)。免疫组化结果:与空腹对照组相比,糖负荷后各组腹内侧核PGC-1α阳性神经细胞数量均显著性降低(P0.05);糖负荷120 min组最低,之后开始恢复。相关性分析显示血糖水平与下丘脑腹内侧核PGC-1α阳性神经细胞数变化之间有显著的相关性(r=0.983)。结论在小鼠糖负荷实验过程中,血糖升高与下丘脑腹内侧核神经元PGC-1表达下调之间显著相关,提示下丘脑PGC-1表达可能是维持血糖稳定的环节之一。     

前列腺磁共振SAD预定位法联合经直肠双平面超声引导在前列腺穿刺的应用

目的 探讨磁共振SAD(scale、angle、distance)预定位法联合经直肠双平面B超在前列腺穿刺的应用.方法 回顾分析了2019年6月至2019年12月我院13例接受前列腺穿刺患者的临床资料.所有患者符合以下条件(1)前列腺磁共振影像学提示前列腺存在可疑结节.(2)总前列腺特异性抗原tPSA<10ng/ml,...     

吡格列酮对SD大鼠非酒精性脂肪肝病形成的预防作用及其机制

目的:探讨吡格列酮(pioglitazone,PIO)对SD大鼠非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liverdisease,NAFLD)形成的干预作用及机制.方法:♂SD大鼠72只,随机分为正常饮食组(NG)、高脂饮食组(HG)和PIO干预组(PIOG)各24只.PIOG喂饲高脂饲料,并同时予PIO药物灌胃8 wk.正糖高胰岛素钳夹实验检测IR水平,放免法和全自动生化仪检测血清生化指标,RT-PCR检测过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)mRNA表达,Western blot检测肝组织c-Jun氨基末端激酶(c-Jun amino-terminalkinase 1,JNK1)和PPARγ蛋白表达.结果:HG大鼠GIR水平降低和JNK1蛋白表达增高,均呈明显时间依赖性(均P<0.05);8 wk末HG大鼠肝细胞出现明显脂肪变性,与NG相比,体质量、肝指数,TG、ALT、AST、FFAs、FINS、TNF-α水平明显增高,IR加重,JNK1蛋白表达明显升高,肝组织PPARγ表达明显降低(TG:1.23±0.08 vs 0.62±0.12,ALT:92.80±7.09 vs 51.34±8.12;AST:153.22±20.65 vs 119.26±13.61;FFAs:511.94±24.88vs 335.31±15.71;FINS:41.23±1.84 vs 22.65±2.25;TNF-α:1.02±0.12 vs 0.34±0.07,均P<0.05);而PIOG大鼠,上述各项指标均得到明显改善,但仍不能完全达到NG大鼠水平(均P<0.05).结论:PIO对于由高脂饮食诱导的NAFLD的形成及其他IR相关疾病有预防作用.     

脑CT及脑电地形图在急性进展性脑梗死中的应用研究

目的：观察脑CT及脑电地形图（BEAM）在急性进展性脑梗死（APCI）变化特点，为临床早期诊断和治疗提供客观依据。方法：对103例发病2．5～24小时、急性脑梗死患者进行前瞻性研究，其中APCI患者32例，分析脑CT和BEAM早期变化特点，并与71例非进展性脑梗死进行对比。结果：脑CT：103例患者，70例脑CT出现异常（68．0％）。进展组32例患者，27例（84．4％）出现脑梗死早期表现，明显高于非进展组（43例，60．6％），病情进展至高峰时，脑CT显示，16例（50％）出现梗死体积增大，5例（15．6％）有出血性梗死，3例（9．4％）有新部位的梗死，8例（25％）梗死体积无明显变化。BEAM检查：两组患者异常率为91．4％。进展组患者病变区8频带平均功率值高于非进展组，并且异常部位波及范围较大。结论：脑CT和BEAM可作为早期诊断APCI的预测指标。导致病情进展的直接原因可能与梗死体积增大、出血性脑梗死和再梗死有关。     

绿激光前列腺汽化术在口服抗凝药物前列腺增生患者中的应用

目的:评估围术期维持抗凝药物治疗的良性前列腺增生(BPH)患者行经尿道选择性绿激光前列腺汽化术(PVP)的有效性及安全性。方法:回顾性分析2015年1月～2016年12月我院收治的236例行PVP的BPH患者的临床资料,按围术期是否口服抗凝药物分为抗凝组(86例)和未抗凝组(150例),记录并分析两组患者一般情况、手术情况及术后随访12个月的相关临床指标。结果:抗凝组的患者较未抗凝组年龄更大、ASA评分更高,且差异均有统计学意义(P0.05)。两组手术时间、激光使用时间比较差异无统计学意义。抗凝组的患者住院时间明显长于未抗凝组,差异有统计学意义(P0.05),两组患者术中转为经尿道前列腺电切术(TURP)的概率比较差异无统计学意义(P0.05)。两组尿管置管时间及术后并发症(如尿潴留、尿路感染、尿道狭窄和术后出血)发生率比较差异无统计学意义,无严重并发症发生。共有161例完成12个月的随访。两组患者术后1、3、6、12个月国际前列腺症状评分(IPSS)、最大尿流率(Q_(max))、生活质量评分(QOL)、残余尿量(PVR)和前列腺特异性抗原(PSA)值较术前均有显著改善(P0.05)。而抗凝组和未抗凝组IPSS评分、Q_(max)、QOL、PVR和PSA值比较差异无统计学意义。结论:大功率PVP临床疗效确切,是围术期口服抗凝药物患者安全有效的选择。     

利拉鲁肽对高脂饮食大鼠血清钠尿肽水平的影响及机制

目的 研究利拉鲁肽对高脂饮食大鼠血清钠尿肽水平的影响及机制。方法 选择雄性清洁级SD大鼠24只,适应性喂养1周后随机分为对照组、高脂组、利拉鲁肽组,每组8只。测定各组血糖、血脂及钠尿肽水平,自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin-1)和微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ行免疫组织化学染色,RT-qPCR检测自噬相关基因mRNA表达,Western blot检测腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化AMPK(p-AMPK)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化mTOR(p-mTOR)、Beclin-1和LC3蛋白表达。结果 与高脂组比较,利拉鲁肽组钠尿肽水平明显降低[(49.54±3.02)pg/ml vs(58.49±7.67)pg/ml,P<0.05]。免疫组织化学染色显示,高脂组和利拉鲁肽组心肌组织Beclin-1和LC3Ⅱ吸光度值较对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。利拉鲁肽组心肌组织Beclin-1和LC3Ⅱ吸光度值较高脂组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。RT-qPCR和Western blot检测结果显示,与对照组比较,高...     

经输尿管镜碎石术后留置输尿管支架管的必要性研究

目的:探讨经输尿管镜碎石术治疗输尿管中下段结石术后留置输尿管支架的必要性.方法:因单纯性输尿管中下段结石行输尿管镜钬激光碎石术104例,术后未留置支架(A组)52例,留置支架(B组)52例,比较2组病人的年龄、性别、结石大小、手术时间以及术后腰部疼痛、血尿、下尿路症状、尿路感染、术后结石清除及术后输尿管狭窄发生率.结果:2组术后腰部疼痛、下尿路症状、尿路感染、血尿、结石清除及输尿管狭窄发生率差异均无统计学意义(P>0.05).结论:经输尿管镜碎石术治疗单纯性输尿管中下段结石不留置输尿管支架管是安全可行的,临床工作中视具体情况决定.     

IL-18对大鼠非酒精性脂肪肝病形成的作用

目的: 分析在高脂饮食诱发大鼠非酒精性脂肪肝病(NAFLD)形成过程中胰岛素抵抗(IR)与IL-18之间的相关性,并探讨IL-18对大鼠NAFLD形成的作用.方法: 将48只♂SD大鼠随机分为正常饮食组(NG)及高脂饮食组(FG),各24只,喂养至第2、4、6、8周末时,2组各随机抽取6只,抽取门静脉血测空腹血糖(FBS)、空腹胰岛素(FINS),计算空腹胰岛素抵抗指数(FIRI);检测血清及肝组织匀浆IL-18浓度;光镜检查肝组织切片以评价肝脏脂肪变性程度.结果: FG第4周末开始出现IR,血清及肝组织匀浆IL-18均随喂养时间的延长逐渐升高,各期均高于NG,肝组织匀浆IL-18在第2、4、6、8周末均与同期NG比较均有统计学差异均P<0.05),而血清IL-18是第4、6、8周末与同期NG比较均有统计学差异(均P<0.05). FINS、FIRI、血清及肝组织匀浆IL-18均与肝脂肪变性呈正相关( r = 0.951,0.971,0.950,0.937,均P<0.05). 血清IL-18与FINS、FIRI及肝组织匀浆IL-18与FINS、FIRI均成正相关( r = 0.951,0.933,0.929,0.913,均P<0.05).结论: IR在高脂饮食诱发的NAFLD的发生发展中有重要作用,IL-18与IR形成有关,并与NAFLD的形成相关联.