胞嘧啶脱氨酶的原核表达和多克隆抗体的制备

目的：在原核系统中表达并纯化大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（cytosine deaminase,CD)，制备鼠抗大肠杆菌CD多克隆抗体，方法：亚克隆CD基因到原核表达载体pMAL-c2和pBV222中，并转化入大肠杆菌DH5α内，诱导表达并纯化MBP-CD和6his-CD融合蛋白，用纯化的MBP-CD融合蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体。结果：通过重组质粒的酶切筛选出重组阳性克隆，成功地表达和纯化出MBP-CD和6his-CD融合蛋白，用纯化的MBP-CD成功制备了鼠抗CD多克隆抗体，并用6his-CD和GST-CD重组蛋白进行Western印迹分析，证实了抗体的正确性，结论：应用多克隆抗体可以检测体内外CD基因的表达，为临床前和临床上深入开展CD基因的生物治疗研究提供重要的实验材料。     

骨科学重要新闻

第47届骨科研究年会纪要 第47届骨科研究学会(ORS)于2001年3月4日落幕。其中有1 107篇研究论文发表。现将会议的内容简要介绍如下。 1 人工关节材料 多数与改善超高分子聚乙烯性质的研究有关。Richard等测量超高分     

静脉狭窄-梗阻性病变综合性介入治疗应用研究

静脉狭窄一梗阻性病变(VSO)是一类严重危害人类健康的常见性血管疾病。我国是此类疾病，如布一加综合征(BCS)、上腔静脉综合征(SVCS)及深静脉血栓形成(DVT)等的高发国家。本项目正是以此类疾病为主要对象，开展了如下工作。     

重症胆管炎患者凝血、抗凝血功能的变化及意义

重症胆管炎（Acute severe cholangitis ACST）患者出于胆道梗阻引起肝功能受损及合并细菌感染导致内毒素血症、休克等诸多因素的影响，易发展为多器官功能失常综合征（MODS）。其病理机制除了过度的炎症反应和免疫反应造成靶器官细胞的损伤外，凝血、抗凝血系统参与了这一病理过程，而且与MODS的产生密切相关。[第一段]     

RP-HPLC法测定转基因贯叶连翘植株中褪黑素

目的 建立测定褪黑素的反相高效液相色谱紫外分析方法，分析并测定通过组培获得的贯叶连翘不同转基因株系及其亲本植株的褪黑素。方法 以Symmetry C18 (150 mm×4.6 mm，5.0 μm)为色谱柱；100 mmol乙酸铵甲醇(80∶20)为流动相，体积流量为0.8 mL/min；检测波长为265.8 nm，灵敏度为2.00 AUFS。结果 褪黑素浓度在20～500 ng/mL线性关系良好(R2=0.999 2)，平均加样回收率为98.09%(n=6)，RSD为2.21%，最小检出量为1.0 ng/mL。褪黑素峰保留时间约为8.8 min。结论 该方法可以简便准确分析不同株系贯叶连翘中的褪黑激素的量；贯叶连翘YXu55(含庆大霉素抗性标记和AANAT-HIOMT基因)转基因株系的褪黑素的量均高于pZP122(仅含庆大霉素抗性标记，不含AANAT-HIOMT基因的空白质粒)转基因株系和未转基因的对照植株；而pZP122转基因株系褪黑素的量跟未转基因的对照植株的量几乎相等。     

抗成长型肝炎病毒重组蛋白单克隆抗体的制备和初步应用

目的：制备抗-戊型肝炎病毒的单克隆抗体，并将其用于分析戊型肝炎病毒不同毒株结构蛋白的抗原表位。方法：采用来自墨西哥株（Mexican strain)的戊型肝炎病毒重组蛋白（p166Mex)免疫Balb/c小鼠，取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合，经酶联免疫吸附试验（ELISA）法筛选阳性克隆，并将获得的单克隆抗体与戊型肝炎病毒缅甸株（Burma strain)和美国株（USA strain)的重组蛋白（p166Bur,p166US)进行交叉反应测定。结果：最终获得4株能稳定分泌抗-p166Mex的杂交瘤细胞株。即D8G10,E5E12,D4A3,B7E6。其中D8G10，E5E12和B7E6细胞株的培养上清液，还能分别与p166Bur和p166US重组蛋白发生阳性反应。结论：利用已获得的抗-p166Mex单克隆抗体，初步确定3种不同的戊型肝炎病毒重组蛋白（p166Bur,p166US,p166Mex)含有一种共同的抗原表位。     

聚丙烯酰胺水凝胶注射美容的临床与组织学评估

目的　探讨聚丙烯酰胺水凝胶注射后并发症的临床与组织学特点。方法　对 1998年至 2 0 0 3年接诊的 5 2例在外院注射了聚丙烯酰胺水凝胶 ,并引起并发症患者的临床资料进行了总结与组织学研究。为了便于比较 ,另选 12例 1988年～ 1994年期间接受液态硅胶注射的患者取出的组织病理切片与之对照研究。结果　聚丙烯酰胺水凝胶注射后并发症以局部硬结最多见 ,而且多发生在注射后 1～ 2年左右时间里。人体组织对注射的聚丙烯酰胺水凝胶的反应为多核异物巨细胞增生 ,并形成肉芽肿。与液态硅胶比较 ,注射的聚丙烯酰胺水凝胶引起组织的淋巴细胞反应弱 ,材料周围的纤维包膜较薄。机体内长期存留的聚丙烯酰胺水凝胶可能会引起局部组织变性反应。结论　聚丙烯酰胺水凝胶作为软组织填充剂的安全性需要进一步研究。     

Ⅰ型胶原膜、胞外基质提取物膜体外构建人工真皮能力比较

比较Ⅰ型胶原与胞外基质(extracellularmatrix,EM)提取物冻干后形成的膜(EM膜)在体外构建人工真皮的能力,以选择一种更有利于人工真皮形成的支架材料。方法分别使用小牛真皮部分提取的Ⅰ型胶原蛋白和胞外基质提取物冻干后制备基质网架,植入皮肤成纤维细胞,形成人工真皮。用扫描电镜观察I型胶原膜和EM膜的表面形态结构;选取不同的时间点,对种植于两种支架材料上的细胞进行计数,并利用间接ELISA方法检测人工真皮复合物中的细胞Ⅰ型胶原分泌情况,通过统计学的分析手段,对细胞的生长情况做出判断;用组织学方法观察人工真皮的形成情况。结果扫描电镜观察结果,两种膜在外观形态上无明显差异;细胞在EM膜上的增殖速度较Ⅰ型胶原膜快;ELISA分析显示,EM-细胞复合物中的成纤维细胞能够分泌更多的Ⅰ型胶原;与Ⅰ型胶原膜相比,EM在培养液中的降解更为缓慢,种植后的成纤维细胞在EM膜上生长旺盛,细胞层次明显多于前者,形成了较为明显的真皮样组织。结论EM膜适于成纤维细胞的生长,体外降解速率慢,是一种较Ⅰ型胶原膜更为理想的真皮支架材料。