两种分析miRNA相对表达量方法的比较研究

目的基于实时反转录一聚合酶链反应（RT—PCR）基因表达相对定量的分析方法：GenEx软件分析与2（-△△CT）法,建立一种简便、准确的miRNA相对定量方法。方法以HK-2细胞系cDNA为模板,进行PCR扩增,确定最佳退火温度;再倍比稀释该模板,用荧光定量PCR测定的ct值作miR-122和miR-16的标准曲线,计算出相应miRNA的扩增效率。用荧光定量PCR测定健康者和乙型肝炎患者血清中内参miR-16和靶基因miR-122的表达,分别采用GenEx软件分析与2（-△△CT）法来评价相对表达量。结果系列稀释法制作的标准曲线呈现较好的线性相关性,两种miRNA的标准曲线r2值均为0．999,miR-16的扩增效率为97％,miR-122扩增效率为107％。2（-△△CT）法分析乙型肝炎患者血清中miR-122的表达较健康者增高了44．3倍,而GenEx软件分析为54．1倍。结论GenEx软件分析考虑了更多的影响因素,其结果比（-△△CT法更可靠,适用于临床分析。