鼠尾胶原联合血小板源性生长因子BB培养内皮细胞

背景:有研究证实,Ⅰ型鼠尾胶原可促进成肌纤维细胞的增加,对内皮细胞的迁移及成管有较为明显的作用,推断胶原可为细胞的生长提供一个较为合适的内环境。目的:探讨鼠尾胶原联合血小板源性生长因子BB抗人脐静脉内皮细胞凋亡的效果及安全性。方法:将第4代人脐静脉内皮细胞培养于铺有鼠尾胶原的培养皿上,用Alamar Blue法检测不同时间点的还原比率。将第4代人脐静脉内皮细胞分为4组培养于24孔板,其中生长因子组是在细胞接种前加入血小板源性生长因子BB蛋白于细胞悬浮液中;联合组需事先加入血小板源性生长因子BB蛋白于鼠尾胶中,铺于板底;最后各组均使用H2O2诱导凋亡,73 h后采用Western blot测定血小板源性生长因子BB、凋亡相关蛋白及抗凋亡蛋白的表达,同时Tunnel检测细胞凋亡阳性率。结果与结论:在铺有鼠尾胶原培养皿中培养人脐静脉内皮细胞的成管数量明显多于正常培养人脐静脉内皮细胞的成管数量(P<0.05)。鼠尾胶原培养的细胞与正常对照细胞生长状态相似,说明鼠尾胶原对细胞无明显毒性作用。联合组血小板源性生长因子BB、Bcl-2、p-Akt表达高于其余3组(P<0.05),Bax表达低于其余3组(P<0.05)。联合组细胞凋亡率低于生长因子组、H2O2组(P<0.05)。表明鼠尾胶原对人脐静脉内皮细胞无明显毒性作用,联合血小板源性生长因子BB生长因子后可显著增强抗细胞凋亡效果。     

乳鼠心肌组织中细胞周期素A2的定位及表达

背景：细胞周期素A2是调节细胞周期的关键因子,关于细胞周期素A2在乳鼠心肌中的表达及定位情况还不明确。 目的：探索细胞周期素A2在C57乳鼠中的表达定位及表达,检测心肌细胞中增殖相关蛋白随着细胞周期素A2的表达而呈现的表达趋势。 方法：C57乳鼠分别于出生后0,3,7,14,28 d处死,留取心肌组织,行Western blot检测心肌组织中细胞周期素A2、增殖细胞核抗原及磷酸组蛋白H3的表达情况。免疫组化检测细胞周期素A2在出生后乳鼠中的定位及增殖细胞核抗原在心肌组织中的表达。 结果与结论：C57乳鼠出生后细胞周期素A2表达水平逐渐下调,直至第14天基本消失(P=0.001),且细胞周期素A2在乳鼠出生后0 d定位于细胞核中,在第14天时主要存在于细胞质中,至第28天时,基本消失。增殖细胞核抗原在出生后0 d表达最强,随后表达逐渐减弱。而反映有丝分裂期的特异性蛋白磷酸组蛋白H3随时间表达逐渐减少,且表达强度基本与细胞周期素A2表达减弱相一致。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程全文链接：     

乳鼠心肌组织中细胞周期素A2的定位及表达

背景：细胞周期素A2是调节细胞周期的关键因子,关于细胞周期素A2在乳鼠心肌中的表达及定位情况还不明确。 目的：探索细胞周期素A2在C57乳鼠中的表达定位及表达,检测心肌细胞中增殖相关蛋白随着细胞周期素A2的表达而呈现的表达趋势。 方法：C57乳鼠分别于出生后0,3,7,14,28 d处死,留取心肌组织,行Western blot检测心肌组织中细胞周期素A2、增殖细胞核抗原及磷酸组蛋白H3的表达情况。免疫组化检测细胞周期素A2在出生后乳鼠中的定位及增殖细胞核抗原在心肌组织中的表达。 结果与结论：C57乳鼠出生后细胞周期素A2表达水平逐渐下调,直至第14天基本消失（P=0.001）,且细胞周期素A2在乳鼠出生后0 d定位于细胞核中,在第14天时主要存在于细胞质中,至第28天时,基本消失。增殖细胞核抗原在出生后0 d表达最强,随后表达逐渐减弱。而反映有丝分裂期的特异性蛋白磷酸组蛋白H3随时间表达逐渐减少,且表达强度基本与细胞周期素A2表达减弱相一致。     

重组9型腺相关病毒介导细胞周期蛋白A2基因转染小鼠心肌的研究

目的探讨重组9型腺相关病毒介导细胞周期蛋白A2基因经尾静脉注射后转染小鼠心肌的可行性及安全性。方法雄性C57BL／]~鼠随机分为病毒基因转染组和单纯生理盐水组。两组小鼠分别通过尾静脉注射病毒稀释液或等体积的生理盐水,分别于注射2周及4周后处死小鼠。Western印迹检测小鼠心脏、肝脏、肺脏和肾脏中细胞周期蛋白A2的表达,以评价腺相关病毒介导目的基因转染的靶向性。免疫组织化学检测细胞周期蛋白A2在心肌细胞中的表达及定位。检测增殖相关蛋白在各器官中的表达,明确转染后是否引起其他器官过度增殖,以评价其安全性。结果细胞周期蛋白A2转染2周后在小鼠心脏开始出现表达,第4周呈稳定表达,而对照组细胞周期蛋白A2的表达则相对较少（2周：0．13％±0．01％比25．97％±2．24％,4周：0．14％±0．02％比73．70％±3．10％）,两组比较差异均有统计学意义（均为P〈0．05）。而两组小鼠肝脏、肺脏、肾脏中细胞周期蛋白A2的表达差异无统计学意义（均为P〉0．05）。细胞周期蛋白A2转染心肌后主要定位于心肌细胞胞质中,胞核中较少表达。转染心肌组织后,增殖细胞核抗原（PCNA）表达增加（2周：13．10％±0．54％比65．80％±3．44％,4周：12．90％±0．34％比71．20％±1．58％）,两组比较差异均有统计学意义（均为P〈0．05）。而有丝分裂特异性蛋白磷酸化组蛋白H3（H3P）在两组中的表达差异无统计学意义（均为P〉0．05）。PCNA在肝脏、肾脏、肺脏中的表达差异无统计学意义（均为P〉0．05）。结论重组9型腺相关病毒介导细胞周期蛋白A2基因可靶向转染小鼠心肌,并能重新启动心肌细胞的细胞周期进程,且转染后不会引起其他器官的过度增殖,具有安全性及可行性。     

腺相关病毒介导血小板源性生长因子-B基因转染心肌细胞的研究

目的 探讨9型腺相关病毒介导血小板源性生长因子-B（PDGF-B）基因转染修饰大鼠心肌细胞的可行性、安全性及其抗凋亡功能.方法 将携带PDGF-B基因的9型腺相关病毒（rAAV9-PDGF-B）转染大鼠心肌细胞（H9C2）,收集经转染后不同时间点（1、3、5、14、21、28 d）心肌细胞,提取蛋白质进行Western印迹测定,观察PDGF-B表达情况.细胞免疫荧光法检测rAAV9的转染效率,AlamarBlue法对rAAV9-PDGF-B转染心肌细胞进行安全性评估,并通过双氧水（H2O2）诱导凋亡,检测高表达PDGF-B的心肌细胞的凋亡相关蛋白及Tunel阳性率.结果 rAAV9-PDGF-B转染心肌细胞后第3天开始,PDGF-B表达上调,随后表达逐渐增强,到第5天蛋白持续平稳表达,持续表达至28 d.转染后第5天,表达PDGF-B的心肌细胞约为78.6％.不同时间点的心肌细胞的还原比率均接近于1.0.双氧水诱导凋亡后,可下调高表达PDGF-B心肌细胞的Bax及Tunel阳性率,同时上调Bcl-2及P-Akt的表达,与PDGF-B蛋白抗凋亡组相比差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 rAAV9-PDGF-B能成功转染大鼠心肌细胞,使心肌细胞持续高表达PDGF-B达28 d以上,对心肌细胞无明显不良反应.高表达PDGF-B的心肌细胞同样具有抗凋亡的功能.