多元分析在肺吸虫病诊断的应用

对浙江省温州市的７２例肺吸虫病患者及１８例正常人按１１项检验结果作聚类分析及逐步判别分析；根据谱系分枝图及判别函数的提示，这些患者可分成３种类型，并与临床上的肺型、肝型、亚临床型对应；结合临床情况提出：诊断肺吸虫病只需６项指标（肺吸虫抗原皮试、血白细胞计数、血中嗜酸性细胞比例、血沉、γ球蛋白比例及ＥＬＩＳＡ），而肝肿大、谷丙转氨酶、间接血凝试验等项可以省去而不影响判别效果。所得２组函数可能有助于诊断及分型。     

日本血吸虫cDNA文库的免疫筛选和融合蛋白的表达

血吸虫感染后的免疫机制为疫苗的研究提供了理论依据, 从基因文库中筛选编码诱导血吸虫保护性免疫力的抗原克隆是血吸虫分子疫苗研究非常关键步骤之一^{[1—3 ]}。本文用日本血吸虫感染兔血清( IRS) 探针来筛选日本血吸虫cDNA 文库, 并鉴定融合蛋白的性质, 为血吸虫分子疫苗的研制打下基础。     

刚地弓形虫MIC8 CTD作用蛋白的筛选及鉴定

目的从刚地弓形虫速殖子裂解液中筛选并鉴定微线体蛋白8羧基端胞质尾(MIC8CTD)的作用蛋白。方法分别以GST-MIC8CTD蛋白和GST蛋白(对照)作为探针蛋白,采用GST pull-down技术从弓形虫裂解液中筛选目标蛋白并进行SDS-PAGE分析;将目标蛋白转印至PVDF膜,测序,通过BLAST2在线对比搜索相似蛋白序列,初步确定目标蛋白;以目标蛋白抗体为一抗进行Western blot,分析GST pull-down产物与目标蛋白抗体的相互作用;分别用GSTMIC8CTD多克隆抗体和兔免疫前血清结合的sepharose与弓形虫裂解液进行免疫共沉淀试验,沉淀物进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果 PAGE显示GST-MIC8CTD蛋白的pull-down产物中有一蛋白条带(分子质量单位约35~45ku),GST蛋白的pull-down产物中无此蛋白;BLAST2比对目标蛋白的氨基酸序列与弓形虫醛缩酶序列一致;ECM检测GST-MIC8CTD多克隆抗体的免疫共沉淀产物中有蛋白组分可被相应的抗体识别,免疫前血清的免疫共沉淀产物中无可被识别的蛋白。结论经GST pull-down技术和免疫共沉淀试验筛选、鉴定,弓形虫MIC8CTD的作用蛋白为醛缩酶。     

多重PCR法对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌染色体mec盒的分型研究

目的研究本院2002年连续收集的102株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）染色体mec盒（SCCmec）的分型特点。方法用多重PCR法对MRSA SCCmec的结构和其变异情况进行分析及分子分型。结果102株MRSA中有94株属SCCmec-Ⅲ型，4株属SCCmec-ⅢA亚型，2株属SCCmec-Ⅳ型，2株属SCCmec-Ⅰ型。结论通过多重PCR法分型，表明SCCmec-Ⅲ型是引发本院2002年MRSA感染的主要菌型。     

广州管圆线虫成虫cDNA文库构建

目的　构建广州管圆线虫成虫cDNA文库。方法　提取广州管圆线虫成虫总RNA ,用Clontech公司SMARTTMcDNA文库构建试剂盒反转录合成第一链cDNA ,然后通过长距离PCR方法合成双链cDNA并扩增 ;PCR产物与λTripIE× 2载体连接并包装 ,建成未扩增文库 ;检测未扩增文库滴度和重组效率后 ,进行文库扩增及测定扩增文库的滴度。结果　经测定 ,未扩增文库滴度为 9 7× 1 0 6 pfu/ml,重组效率达 99 2 %以上 ,文库扩增后滴度达 9 1 3× 1 0 9pfu/ml。结论　已成功构建了广州管圆线虫成虫cDNA文库     

广州管圆线虫cDNA文库基因筛选的研究进展

cDNA文库因不含内含子而便于克隆和大量扩增,利用多种筛选方法并结合生物信息学软件获得阳性克隆,对于从分子水平上深入研究广州管圆线虫病的致病机制及诊断方法具有重要意义.该文综述了广州管圆线虫各期cDNA文库特异基因筛选的研究进展.     

广州管圆线虫抗原IF的中间纤维蛋白组织来源分析和定位

目的 对广州管圆线虫抗原IF进行中间纤维蛋白家族分类和细胞组织定位.方法 IFTG诱导重组基因pET-IF在大肠杆菌中表达广州管圆线虫抗原IF,用组氨酸亲和层析纯化表达产物,用Western blot方法鉴定抗原IF的中间纤维蛋白类型;小鼠皮下多点注射法制备抗IF抗体血清,用免疫组织化学方法检测抗原IF在虫体组织和细胞上的定位.结果 广州管圆线虫抗原IF在体外成功表达并纯化,其属于中间纤维蛋白家族的角蛋白,定位于广州管圆线虫成虫肠管壁,存在于细胞质中.结论 广州管圆线虫抗原IF分布于虫体肠管壁,同时从组织学角度证明广州管圆线虫存在中间纤维结构.     

刚地弓形虫MIC2与醛缩酶作用位点的鉴定

目的 确定刚地弓形虫微线体蛋白2(MIC2)与醛缩酶的作用位点。方法 利用定点突变技术,将MIC2羧基端(MIC2C)的767位色氨酸(W⁷⁶⁷)突变为丙氨酸(A)。PCR扩增MIC2C W/A突变体基因片段;构建MIC2C W/A/pGEX-4T-1重组原核表达系统,IPTG诱导表达GST-MIC2C W/A突变体蛋白。分别以该蛋白和GST-MIC2C蛋白(对照蛋白)作为探针蛋白与弓形虫速殖子裂解液进行GST pull-down实验,SDS-PAGE及Western blot分析。结果 获得了MIC2C W/A突变体基因片段,制备了GST-MIC2C W/A突变体蛋白; GST-MIC2C蛋白的pull-down产物中有一蛋白条带,而且可以被醛缩酶抗体识别,而GST-MIC2C W/A蛋白的pull-down产物中未见蛋白条带。结论 将MIC2的W⁷⁶⁷突变为A后,MIC2失去与醛缩酶的作用,即MIC2与醛缩酶的作用位点为色氨酸(W)。     

人源性抗日本血吸虫噬菌体抗体组合文库的构建

提取日本血吸虫病患外周血淋巴细胞总RNA，用逆转录PCR扩增出Fd段和k链基因，重组到裹达载体pComb3中，通过辅助噬菌体M13K07的超感染，构建了人源性噬菌体抗体组合库，库容量约为1．5×10^5。为下一步从噬菌体抗体库中筛选诊断用特异性抗体提供了基础。     

Internet在寄生虫学上的应用

本文综述了国内外Internet信息网络在寄生虫学上的应用现状。全文包括四个部分,即概述、数据库、信息交流和专题讨论、重要的寄生虫学WWW站址。