人胰岛素样生长因子-1在大肠杆菌中的高效表达

目的为了获得基因工程重组人胰岛素样生长因子1。方法采用Trizol试剂法，从人胎肝中提取，6-RNA，RT-PCR扩增得到人胰岛素样生长因子1基因，用EcoRⅠ和Hind Ⅲ双酶酶切后，将该基因片段插入表迭栽体pkk223—3，筛选得到了重组质粒pkk-hIGF1。结果加IPTG诱导该质粒转化的大肠杆菌JM109表达，hIGF1的表达水平约30mg／L。结论用肝素亲和层析的方法，获得了电泳纯基因工程重组人胰岛素样生长因子1样品。纯化样品的理化及生物活性分析与天然对照品完全一致。     

急性冠脉综合征患者血小板表面活化标志的研究

目的通过与血管内皮损伤标志物进行对比分析,探讨流式细胞术(FCM)测定血小板表面活化标志物在急性冠脉综合征(ACS)患者中的意义。方法应用FCM测定36例ACS患者药物治疗前后外周血中血小板糖蛋白(CD62p)和血小板质膜蛋白(CD61)的表达水平,用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血浆假性血友病因子(vWF),并对两者在ACS时的变化作对比分析。20例健康体检者作对照组。结果CD62p在ACS患者的表达明显高于正常人(P<0·05),药物干预治疗后明显下降(P<0·05),其水平的变化与vWF、心绞痛和心电图缺血ST-T的改善相一致。CD61在ACS患者的表达与正常人的表达无显著性差异(P>0·05),药物干预治疗后变化不明显(P>0·05)。结论CD62p是血小板活化的敏感指标,并与vWF、临床疗效有很好的相关性;FCM是检测血小板活化功能准确可靠的方法。     

苯二氮革类药物依赖老年人个性特征、生活事件及应付方式调查

目的：探讨老年苯二氮革类药物依赖者个性特征、生活事件及应付方式。方法：对25例老年苯二氮革类药物依赖者（研究组）和25例健康老年者（对照组）分别完成艾森克个性问卷（EPQ）、生活事件和简易应对方式量表评定。结果：EPQ测定中,研究组N分明显高于对照组（P〈0．01）,E分明显低于对照组（P〈0．05）;研究组生活事件多于对照组,尤其是负性生活事件明显高于对照组,同时积极应付的强度明显低于对照组（P〈0．01）,而消极应付强度明显高于对照组（P〈0．01）。结论：老年苯二氮革类药物依赖者普遍存在个性和应付技能缺陷,应激事件较多,在进行脱瘾治疗时,应注重帮助他们学会应激时解决问题和掌握积极应对技能,改善消极态度的不良适应行为。     

7种不正确用药心理分析

生病用药是每个人都会遇到的事,但并不是每个人都能在正确的心理状态下使用药物。在影响药物疗效的诸多因素中,心理因素对药物疗效的影响早已被证实。如服用安慰剂也可产生一定的药理效应等。因此用药不仅要注意病情病因等,还要重视病人的心理状态。随着社会、科学、文化的日益发展,也影响着用药心理的变化。     

人IL-18结合蛋白AcDNA的克隆及在COS-7细胞中的表达

目的：克隆人IL－18结合蛋白（hIL-18BPa)的cDNA，观察其在COS－7的表达。方法：采用RT－PCR自人白血病细胞株jukat中获得hIL-18 BPa的cDNA，将其克隆至T－vector中，经测序确证后，将该基因定向插入真核表达载体pcDNA3.1( )中，脂质体介导法将其转染COS－7细胞，72h后收集上清纯化，用BCA法测定hIL-18 BPa的含量，用ELISA法测定其活性。结论：获得的IL－18BPa的cDNA序列gene bank登录的cDNA序列一致。上清液中hIL-18BPa含量为1．4mg/L，并具有良好的生物学活性。结论：成功克隆hIL-18 BPa基因，并实现了COS－7细胞中的瞬时表达，为研究其活性奠定了基础。     

米氮平治疗伴情绪障碍甲亢患者的临床观察

目的探讨米氮平对甲亢患者情绪障碍的疗效。方法将符合CCMD-3抑郁症诊断标准的50例甲亢患者随机分成两组。研究组在抗甲亢药物基础上联合米氮平30mg·d^-1，对照组仅用抗甲亢药物治疗，疗程8W。采用抑郁自评量表（SDS），焦虑自评量表（SAS）及甲状腺素TT3、TT4评定疗效。结果经8W治疗后，研究组比对照组抑郁、焦虑评分及TT3、TT4下降显著（P〈0．05）。结论米氮平不仅能改善甲亢患者的抑郁、焦虑情绪，而且能促使原发病的康复。     

重组人干细胞因子/血小板生成素融合基因的克隆、表达及其蛋白质结构预测

目的：获得重组人干细胞因子/血小板生成素（SCF-TPO）融合蛋白的高表达，预测该全新型融合蛋白的蛋白质结构。 方法： 设计引物，利用RT-PCR从胎肝细胞中扩增SCF和TPO氨基端功能区片段，采用基因融合新策略将其融合成SCF-TPO融合基因，构建pET32a/SCF-TPO融合基因重组表达载体，在E.coli BL21(DE3)plysS中获得正确高表达，采用生物信息学方法对融合蛋白的结构特征进行模拟分析。 结果： 首次成功构建了pET32a/SCF-TPO原核表达载体，并获得了融合蛋白的高表达，表达量高达40%，主要以包涵体形式表达。蛋白结构预测结果显示，融合蛋白的等电点、抗原性及亲水性无显著改变，接头序列具有高柔性。融合蛋白除一级结构有4个氨基酸发生改变外，原来的α螺旋和β片层无改变。 结论： 获得了SCF-TPO融合蛋白的高表达，结构预测融合蛋白的设计符合要求。为进一步研究SCF-TPO融合蛋白的生物学特性奠定了基础。     

B7—PE40新型重组融合外毒素的分子生物学特性预测

为探讨构建的重组外毒素融合蛋白B7-1-Linker-PE40和B7-2-Linker-PE40及其接头设计的合理性,应用核酸和蛋白质序列分析软件系统GOLDKEY,对上述重组外毒素融合蛋白的柔性、抗原性,亲水性,表位和二级结构等分子生物学特性进行了计算机模拟预测。结果发现它们分别保留了B7-1,B7-2和PE40的表位特征,没有出现新的表位,其柔性接头处的抗原性也极低。与B7-1,B7-2和PE40的一、二级结构比较发现。这两种融合蛋白各有数个氨基酸残基改变,有的氨基酸改变可轻微影响融合蛋白的二级结构。原核表达的两个融合蛋白经Western印迹分析显示,它们能分别与B7-1,B7-2和PE40单克隆抗体发生特异性结合。表明它们较好地保留了B7和PE40的抗原性和空间结构。与预测的结果一致。提示预测结果会有助于我们研究该系列融合蛋白的体内,外生物学效应,以及设计构建新的其他融合蛋白。     

新型重组免疫抑制融合毒素蛋白B7-2-PE40KDEL的分离纯化

为了建立高效快捷能分离大量重组B7-2-PE40KDEL融合蛋白的下游纯化路线，比较了不同组合的纯化策略和条件，包括反相层析、金属螯合层析、阴离子交换层析、蓝染料亲和层析和凝胶过滤层析等，并采用MTT法检测该融合蛋白的靶向杀伤活性。结果表明，在反相层析分离中疏水相分别采用了常规的甲醇和乙腈．结果为所分离的该重组融合蛋白均发生了变性，从色谱柱中分离出来就生成了絮状沉淀。在蓝染料亲和层析一步分离中，由于全菌体蛋白中与亲和树脂发生非特异结合的成分较多，极难区分目的蛋白和杂蛋白。但是，PRSETA—B7-2-PE40KDEL表达载体上带有翻译增强序列T7-g10，可在表达目的蛋白N端融合6个组氨酸，这十分有利于通过Ni—NTA金属鏊和层析法快速高纯度地纯化表达产物。根据这一特性，经反复筛选实验设计最终确定了金属螯合层析、阴离子交换层析和凝胶过滤层析三步法的纯化路线，用于纯化分离B7—2-PE40KDEL融合蛋白。所得的目的蛋白的纯度可达95％以上，总回收率为8％。Western—blot实验显示，所得蛋白可与B7-2及PEA抗体特异性结合；MTT生物活性测定表明，该融合蛋白对表达CD28受体的人T细胞系Jurkat产生特异性杀伤作用，而对不表达CD28的淋巴细胞系Raji无任何杀伤作用。结论：建立了高效快速纯化大量重组B7-2-PE40KDEL融合蛋白的技术路线，所纯化的重组B7—2-PE40KDEL融合蛋白能特异性靶向杀伤表达CD28受体的人T细胞。     

登革2型病毒NS3基因的扩增及序列测定

采用热酚法从登革２ 型病毒４３ 株（Ｄ２ ４３） 感染的Ｃ６／３６ 细胞中提取了病毒ＲＮＡ,以病毒ＲＮＡ 为模板,进行Ｄ２ ４３ 株ＮＳ３ 基因ｃＤＮＡ 片段的反转录 ＰＣＲ 扩增,片段长度为１１７６ ｂｐ。将扩增的ｃＤＮＡ 片段克隆到Ｔ 载体ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ｋｓⅡ（ ＋ ） 中。通过双脱氧法测定了ｃＤＮＡ片段序列,与国际标准株ＮＧＣ株序列一致。