单纯疱疹病毒Ⅰ型在兔脑神经细胞中的形态与形态发生

研究单纯疱疹病毒Ⅰ(HSV-Ⅰ)在兔脑神经细胞(RNC)中的形态与形态发生。方法 用电子显微镜观察超薄切片,并拍照记录。结果RNC感染HSV-Ⅰ6h后,细胞核中即可见散在核衣壳,12h后细胞核和细胞质内均可见到,但以核内多见,24h后病毒量达高峰。胶质细胞内的核衣壳多于神经元,胶质细胞和神经元的细胞质内和胞外可见少量有包膜的完整病毒。病毒颗粒为圆形或椭圆形,核心直径38～54nm,核衣壳77～100hm,成熟病毒115～129nm。结论RNC对HSV-Ⅰ高度敏感,HSV-Ⅰ在兔脑神经元和胶质细胞中的形态发生有一定的差异。     

风疹病毒JR_(23)株感染BALB/c小鼠脑组织的病理学特征

为研究风疹病毒（ＲＶ）ＪＲ２３株感染中枢神经系统（ＣＮＳ）的特性及病理学特征,ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠经腹腔感染ＲＶ ＪＲ２３株,并于感染后的第２１ｄ 取小鼠大脑及小脑组织,ＨＥ及免疫组织化学染色,观察小鼠脑组织ＲＶ 感染状况及病变特征。结果显示,受感染的小鼠无明显的ＣＮＳ症状,病理学特征以大脑灰质小灶性神经元变性坏死为主,病变神经元周围见增生的少突胶质细胞形成卫星现象。在神经元坏死灶中可见小胶质细胞增生,形成噬神经元现象及由小胶质细胞和少突胶质细胞构成的胶质细胞结节。神经元及神经胶质细胞内未见病毒包涵体。免疫组织化学染色显示,ＲＶ 主要分布于大脑灰质,神经元细胞、星形胶质细胞和少突胶质细胞均可受到ＪＲ２３株的感染。提示卫星现象、噬神经元现象和胶质细胞结节形成可作为ＲＶ－ＪＲ２３感染ＣＮＳ的病理学参考指标。免疫组织化学染色对确诊ＣＮＳＲＶ 的感染具有特异性     

冠状病毒包膜蛋白的研究进展

冠状病毒 (Coronavirus)属于巢状病毒目冠状病毒科。其基因组是单股正链RNA ,长度为 2 9～ 32kb。成熟的冠状病毒颗粒直径为 6 0～ 2 2 0nm ,形态学上最显著特征在于其包膜外有酷似王冠的棒状包膜子粒。先前本属成员分为 3个抗原组 :第 1组包括人冠状病毒 (HcoV) 2 2 9E、猪传     

冠状病毒包膜蛋白的研究进展

冠状病毒(Coronavirus)属于巢状病毒目冠状病毒科。其基因组是单股正链RNA，长度为29～32kb。成熟的冠状病毒颗粒直径为60～220nm，形态学上最显著特征在于其包膜外有酷似王冠的棒状包膜子粒。先前本属成员分为3个抗原组：第1组包括人冠状病毒(HcoV)-229E、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、犬冠状病毒(CcoV)等；第2组包括牛冠状病毒(BcoV)、     

恶性高血压性视网膜病变的光学相干断层扫描观察

目的　评价使用光学相干断层扫描（ｏｐｔｉｃａｌｃｏｈｅｒｅｎｃｅｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ,ＯＣＴ）对恶性高血压性视网膜病变疗效观察的有效性。方法　对２６例（３１眼）恶性高血压性视网膜病变患者的资料进行回顾性分析,对比分析治疗前及治疗后１５ｄ、１个月、３个月时的视力、视盘周围视网膜神经纤维层厚度、黄斑区视网膜神经上皮层厚度和黄斑区６ｍｍ直径神经上皮总体容积的变化。结果　与治疗前相比,治疗后１５ｄ视力提高者２２眼,治疗后１个月为２６眼,治疗后３个月为２９眼。患者视盘周围视网膜神经纤维层厚度及黄斑区视网膜神经上皮层厚度治疗前为（３９３．２０±１８．０５）μｍ和（４８６．５８±６９．００）μｍ,治疗后１５ｄ、１个月、３个月分别为（３６３．２０±２６．８０）μｍ和（３９２．１３±３０．６５）μｍ、（３４２．７５±２５．８２）μｍ和（３１５．０３±２２．３３）μｍ、（３０５．６４±２３．３８）μｍ和（２１３．８７±２５．６８）μｍ;黄斑区６ｍｍ直径神经上皮总体容积治疗前为（１７．０４±３．３１）ｍｍ３,治疗后１５ｄ、１个月、３个月分别为（１１．０７±２．０２）ｍｍ３、（９．３６±０．９３）ｍｍ３、（８．４２±０．７５）ｍｍ３;各指标与治疗前比较差异均具有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）,治疗后各时间点间两两比较差异亦均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。结论　恶性高血压性视网膜病变的视盘周围视网膜神经纤维层厚度、黄斑区视网膜神经上皮层厚度和黄斑区６ｍｍ直径神经上皮总体容积变化与其病变程度相关,ＯＣＴ对恶性高血压性视网膜病变疗效评价具有重要意义,能够为病情的追踪和指导用药提供客观依据。     

副黏病毒F蛋白融合活性位点中病毒特异性氨基酸基因突变分析

目的 了解副黏病毒融合蛋白(F)融合活性位点中的病毒特异性氨基酸在细胞融合中的作用.方法 以新城疫病毒(NDV)和人副流感病毒(hPIV)为例,在已确定的F蛋白融合活性位点中对病毒特异性氨基酸进行定点突变,然后将突变体F基因与同源或异源的血凝素.神经氨酸酶(HN)基因共转染BHK21细胞后,在真核细胞中表达.Giemsa染色和指示基因法检测细胞融合功能,荧光强度分析(FACS)检测F蛋白的表达效率.结果 在NDV F的突变体中,N150D-L152D的融合功能达到野毒株的46.31%;而N257D-N258D-Q259E、G271D-N272D和Q279E-Q281E的融合活性却几乎消失,分别只有野毒株的1.25%、3.14%和2.23%;N296D-N297D的融合功能是野毒株的97.68%.在hPIV F的突变体中,D143A-E145A的融合功能达到野毒株的32.63%;E223Q-K224A几乎不能形成合胞体,其融合活性只有野毒株的1.91%;K263A-R265A、D268A-D270A和R475A-R476A的融合功能分别是野毒株的14.63%、19.52%和28.95%.FACS结果表明,NDV F的N257D-N258D-Q259E、G271D-N272D和Q279E-Q281E突变体及hPIVF的E223Q-K224A突变体F蛋白在细胞表面几乎没有表达;其余所有突变体F蛋白的表达效率与野毒株相比,基本不变.结论 对于NDV F来说,N257、N258、Q259、G271、N272、Q279、Q281对NDV F的特异性细胞融合功能起重要作用;N150和L152也起一定的作用,但是N296和N297却没有作用.对于hPIV F来说,E223和K224对hPIV F的特异性细胞融合功能起非常重要的作用;D143、E145、K263、R265、D268、D270、R475、R476的作用也很重要.     

结核分枝杆菌H37Rv两种抗原Ag85b、HspX的制备及其与佐剂的联合应用

目的 用分子生物学方法制备H37Rv的两种抗原Ag85b、HspX,通过与铝佐剂和CpG佐剂联用免疫小鼠进行初步药理学实验以观察其生物学活性.方法 常规方法分别构建重组表达质粒pET30a-Ag85b和pET30a-HspX,内切酶鉴定目的 片段后两种质粒分别转化BL-21大肠杆菌,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导后分别产生两种蛋白;用阴离子交换柱Source30、QHP以及疏水层析柱对两种蛋白进行纯化;蛋白测序进行鉴定.纯化后的两种蛋白分别与铝佐剂和CpG佐剂联用(Ag85b,Ag85b+Al,Ag85b+CpG,Ag85b+Al+CpG;HspX,HspX+Al,HspX+CpG,HspX+Al+CpG),免疫C57/BL小鼠,同时设置生理盐水对照组,取脾细胞进行酶联免疫斑点实验(ELISPOT)检测干扰素-γ(IFN-γ)的分泌;同时进行淋巴细胞增殖实验检测脾淋巴细胞经体外刺激后的增殖情况.结果 成功构建了两种重组表达质粒pET30a-Ag85b和pET30a-HspX,成功诱导表达了两种蛋白;经过纯化,两种蛋白纯度均达到95%;经鉴定两种蛋白纯化产物的N端15个氨基酸序列与目的序列相同;Ag85b+CpG、Ag85b+Al和Ag85b+CpG+Al组经Ag85b(80 μg/ml)体外刺激后分泌IFN-γ显著升高,与生理盐水组比较差异具有显著性(P<0.05);HspX+CpG+Al组经HspX(80μg/ml)体外刺激后分泌IFN-γ显著升高,与生理盐水组比较差异具有显著性(P<0.05).结论 成功表达并纯化了结核分枝杆菌H37Rv的两种抗原Ag85b和HspX,与铝佐剂和CpG佐剂联用后成功刺激小鼠产生了细胞免疫反应,证实了两种重组蛋白的生物学活性,为下一步药效学评估奠定了基础.     

汉坦病毒GM04-38株包膜糖蛋白M的基因克隆与序列分析

目的：建立汉坦病毒（HV）包膜糖蛋白M的克隆载体;研究M基因的变异情况,并对其序列进行系统发生树分析。方法：应用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）扩增GM04—38M片段的基因。产物纯化后克隆于PMD-18T载体。经氨苄青霉素筛选,酶切鉴定,并进行序列测定,应用DNASTAR软件将它与世界范围内分离的病毒株同一基因序列分析比较。结果：筛选出含有HVM蛋白基因的克隆。GM04—38株M片段的全基因序列共3651个核苷酸。4种核苷酸的比例分别为：A30．46％。T30．13％,G20．84％。C18．57％。序列同源分析表明。GM04—38株与Z37株核苷酸同源性最高（97.3％）。属于SEO型HV。与其他SEO各株的差别均小于18．0％：绘出了核苷酸系统发生树。结论：成功地建立汉坦病毒M蛋白基因克隆载体：中国不同地区汉坦病毒流行株基因序列存在明显差异。这为研究HV遗传与变异以及制备有效的亚单位疫苗奠定了基础。