维甲酸抗肝癌作用的研究进展

维甲酸又称视黄酸(RA),是由维生素A即视黄醇在体内氧化成视黄醛,再进一步氧化而成.维甲酸具有很多重要的生理功能,机体内一定浓度的维甲酸可调节细胞的增殖、分化与成熟,是机体正常生长发育和各种生理活动必不可少的重要因素.自80年代末,王振义等应用全反式维甲酸(ATRA)治疗急性早幼粒细胞性白血病(APL)取得良好效果之后,对RA与恶性肿瘤防治之间关系的研究成为热点.本文从RA抗肝癌作用机理和临床应用方面对近年来有关文献作一综述.     

小鼠Foxp3融合蛋白的原核表达及纯化

目的克隆小鼠Foxp3(MFoxp3)基因,构建含该基因的原核表达载体,并表达、纯化出小鼠的Foxp3融合蛋白。方法RT-PCR方法从小鼠淋巴细胞扩增出小鼠Foxp3基因,连入T Easy Vector进行测序,然后将序列正确的小鼠Foxp3基因用酶切的方法从T Easy vector切下,并将其连接到用相同酶切,含有硫氧还蛋白(含6个组氨酸“标签”)的pET 32a( )原核表达载体中构建pET 32a( )-MFoxp3表达载体。用IPTG诱导转化pET 32a( )-MFoxp3表达载体的大肠杆菌BL21(DE3),并以镍螯合层析法纯化MFoxp3融合蛋白。结果经RT-PCR成功地克隆了1,290 bp的小鼠Foxp3基因,测序正确后转化大肠杆菌原核表达载体pET 32a( ),重组质粒在BL21(DE3)中成功表达出分子质量约为63 kD的融合蛋白,运用Ni-NTA方法纯化出目的蛋白,纯化后的蛋白纯度达80%,并用Western Blotting检测蛋白的灵敏度和特异性。结论构建了小鼠Foxp3的融合蛋白原核表达载体并成功表达与纯化出小鼠Foxp3的融合蛋白。     

骨桥蛋白单克隆抗体的制备及其特异性分析

为了研制骨桥蛋白(OPN)特异性单克隆抗体(mAb),并鉴定其特异性。本研究在毕赤酵母中表达具有良好免疫原性的重组人OPN蛋白的基础上,用重组人骨桥蛋白(rhOPN)免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,间接ELISA筛选杂交瘤细胞,并结合免疫印迹对抗体的特异性进行鉴定,通过竞争抑制试验对单克隆抗体识别的抗原位点进行分析。结果共获得4株能够识别OPN不同抗原位点的mAb,亚类测定显示,3株为IgG1,1株为IgG2a。这些mAb能与重组人OPN特异性结合。本研究的四株抗体中,只有4G2B5能够检出与肿瘤转移密切相关的OPN-c的条带,预示该抗体可用于判断肿瘤预后和高转移肿瘤的临床检测。本研究成功获得了针对骨桥蛋白的特异性mAb,同时为进一步研究OPN蛋白的结构和功能提供了重要工具。     

髓系抑制性细胞特点及在抗肿瘤治疗中研究进展

髓系抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)作为一群具有免疫抑制功能的异质性细胞,与肿瘤免疫逃逸密切相关,可以通过多种途径促进肿瘤的发生发展及转移。当前研究提示MDSCs还在抗肿瘤治疗中发挥负性调控作用,降低临床治疗措施的效能并可能协助肿瘤细胞产生耐药,但具体机制尚不很明确。本文就MDSCs的一般生物学特征,以及MDSCs在肿瘤免疫治疗、分子靶向治疗与化疗中所发挥作用及相应机制作一综述,以期为打破肿瘤内科治疗的局限性提供参考。     

一起由食物传播引起的伤寒爆发调查报告

20 0 0年 5月初至 6月中旬 ,上海黄浦区发生了一起由食物传播引起的伤寒爆发流行。现将我院收治的 16例患者的临床资料和流行病学资料报道如下。1　临床资料1.1　临床表现　 16例患者均有不同程度的发热 ,其中稽留热型 4人 ,占 2 5 % ,其他热型不典型 ,可能与发热期间用药有关 ;食欲不振者 8人 ,占 5 0 % ;腹痛 6人 ,占 37.5 % ;腹泻 4人 ,占 2 5 % ;患者中 3例并发肠出血 ,1例并发室性早搏 ,室性并行心律。大多数病人体征不明显 ,其中心律不齐1例 ,脾大 4例 (B超提示 ,体检未扪及 ) ,未见巩膜黄染、肝大和玫瑰疹病例 ,相对缓脉不典型。1.2…     

小细胞肺癌治疗现状

<正>小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)在肺癌范畴中具有临床和组织学独特性,其广泛的发病及高病死率让它成为世界瞩目的卫生问题。全球范围内有13%新诊断肺癌病例是SCLC,每年超过18万例。SCLC病例中有超过90%者现在或既往有吸烟嗜好,而且吸烟对SCLC发病的影响随着吸烟的年限及频率增加而呈正相关,也有罕见病例是没有吸烟史的[1]。过去30年,在工业化程度高的国家SCLC年发病率有     

LTβR-Ig融合蛋白的真核表达及其体外生物学功能的研究

目的 为了研究LTβR-Ig的生物学功能,构建重组的LTβR-Ig/pcDNA3.1（＋）真核表达载体,在CHO细胞中表达,无血清扩大培养,并初步研究了融合蛋白LTβR-Ig的体外生物学活性。方法 将鼠LTβR胞外段cDNA与人IgG1 Fc段cDNA共同克隆至真核表达载体pcDNA3.1（＋）,转染CHO-K细胞表达,阳性克隆进行无血清培养,采用PtoteinA亲和层析的方法进行纯化;3[H]TdR参入法检测对细胞增殖的影响。结果经PCR和限制性酶切鉴定以及DNA测序,结果 表明克隆了正确序列的LTβR胞外段序列,成功构建了重组表达质粒LTβR-Ig/pcDNA3.1,并在CHO细胞中稳定表达了LTβR-Ig的融合蛋白,证明LTβR-Ig融合蛋白能抑制混合淋巴细胞反应。结论 本研究建立了能稳定表达有生物活性的LTβR-Ig融合蛋白的真核表达系统,为今后研究LTβR在移植排斥中的作用机制,及开展基因重组药物进行疾病的生物治疗奠定了基础。     

重组hTRAIL腺病毒载体的构建及其体外抗肿瘤效应的初步观察

目的:利用AdEasy 载体系统构建含人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis inducing ligand, TRAIL)全长基因的重组腺病毒载体,并初步观察其体外对肿瘤细胞的杀伤作用.方法:利用 RT-PCR法从人外周血单个核细胞(PBMCs)克隆人TRAIL全长基因.将hTRAIL cDNA克隆入穿梭质粒pAdTrack-CMV中, 与腺病毒骨架结构pAdEasy-1共同转化入大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,重组子经酶切鉴定正确后,用脂质体转染入人胚肾293细胞中,包装获得重组腺病毒颗粒,Western blot 检测TRAIL蛋白的表达.将重组腺病毒颗粒体外感染对TRAIL敏感的3种人肿瘤细胞(淋巴瘤细胞Jurkat、前列腺癌细胞PC-3、宫颈癌细胞HeLa)后,进行AnnexinⅤ-FITC/PI染色流式细胞术检测、细胞基因组的DNA电泳和锥虫蓝染色,以观察TRAIL对肿瘤细胞的杀伤作用.结果:利用RT-PCR法从人PBMCs中扩增出843 bp的cDNA片段,测序证实为人TRAIL基因.重组子经酶切鉴定正确,Western印迹证实感染TRAIL腺病毒的293细胞中有TRAIL蛋白的正确表达.将重组腺病毒颗粒体外感染HeLa、PC-3和Jurkat细胞,4 h后用AnnexinⅤ-FITC/PI染色,流式细胞术检测AnnexinⅤ PI-细胞群分别占(41.15±3.12)%、(46.20±4.07)%、(38.56±3.45)%;24 h后,抽提Jurkat细胞的基因组进行DNA电泳,出现细胞凋亡时特有的DNA条带;36 h后用锥虫蓝对HeLa 、PC-3、Jurkat细胞染色,细胞死亡率分别为(75±5)%、(82±7)%、(70±5)%.结论:成功构建了hTRAIL腺病毒载体,体外感染HeLa 、PC-3、Jurkat肿瘤细胞后,能通过诱导细胞的凋亡而杀伤肿瘤细胞;为下一步的基因治疗和基础研究打下了基础.