胶原诱导性关节炎大鼠滑膜双向凝胶电泳图谱建立及差异分析

目的类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)是一个多基因多因素参与的病理过程。实验中通过建立与RA发病机制相似的胶原诱导性关节炎(Collagen-induced arthritis,CIA)大鼠动物模型,运用蛋白质组技术对正常大鼠和CIA大鼠模型不同时间点滑膜组织的蛋白质点进行比较分析,为鉴定CIA大鼠滑膜病变相关蛋白质及研究RA发病机制奠定基础。方法用牛Ⅱ型胶原和完全福氏佐剂建立CIA大鼠模型,采用一步抽提法抽提滑膜蛋白质,运用固相pH梯度双向凝胶电泳分离各组大鼠滑膜组织的总蛋白质,用PDquest软件分析图谱,比较差异蛋白质,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flightmass spectrometry,MALDI-TOF-MS)得到相应肽质指纹图谱,用Mascot查询软件搜索数据库,鉴定部分差异蛋白质。结果成功建立了CIA大鼠模型,获得分辨率较高、重复性较好的大鼠滑膜组织双向电泳凝胶图谱。正常组与25、35和45天模型组大鼠滑膜组织凝胶图谱的平均蛋白质点数分别为1070±41、1049±22、1079±44和1088±39。在4个组均有表达差异的蛋白质点中随机取20个点进行肽质指纹图分析,鉴定了部分与细胞代谢、信号转导及结构相关的差异表达蛋白质。结论建立了分辨率较高且重复性较好的正常大鼠与CIA大鼠不同时间点滑膜组织的双向凝胶电泳图谱,鉴定了一些与CIA大鼠滑膜病变相关的差异表达蛋白质,为识别RA病变相关蛋白质及推断RA病变过程奠定基础。     

平肝熄风汤对脑出血大鼠海马细胞色素C氧化酶活性和细胞凋亡影响同步研究

目的 从神经元线粒体能量代谢和细胞凋亡的角度探讨中药复方的平肝熄风汤对脑出血神经元损伤的保护作用机制。方法 采用Ⅶ型胶原酶诱导大鼠脑出血模型，以组织化学方法结合灰度值半定量测定细胞色素C氧化酶(cytochromc c oxidase，CCO)活性，采用Tunel法检测细胞凋亡结果造模12h，脑出血大鼠海马CA1区CCO活性较假手术组明显降低(P＜0.01)，凋亡细胞较假手术组明显增多(P＜0．01)随后均呈进行性加重。用平肝熄风汤治疗后町维持其CCO活性，减少细胞凋亡。结论 脑出血神经元损伤与神经元CCO活性降低及细胞凋亡有关平肝熄风汤能维持线粒体关键酶CCO活性，改善细胞有氧代谢，减少细胞凋亡，此可能为本方对脑出血继发性神经元损伤保护机制之一。     

氨基胍对胶原酶诱导脑出血大鼠模型的影响

目的研究氨基胍对脑出血的影响。方法以Ⅶ胶原酶诱导脑出血大鼠模型,观察动物行为学和脑内血肿的变化,用Western blot检测诱导型一氧化氮合酶蛋白表达的变化。结果氨基胍能明显加快脑出血大鼠行为缺陷的恢复,但对于血肿吸收没有明显影响;Western blot显示:氨基胍能明显抑制脑出血大鼠患侧皮质和基底节诱导型一氧化氮合酶蛋白表达。结论通过广泛抑制脑内诱导型一氧化氮合酶的表达,氨基胍能促进脑出血大鼠的运动功能恢复。     

平肝熄风汤对脑出血大鼠海马线粒体膜电位的影响

目的：观察大鼠脑出血后神经缺损症状和线粒体膜电位的改变,及中药制剂平肝熄风汤的干预作用。方法：用Ⅶ型胶原酶于脑内定位注射诱导大鼠脑出血模型。采用神经缺损积分评定神经功能;用荧光分光光度计测定线粒体悬液的荧光强度反映线粒体膜电位。结果：大鼠脑出血后迅速出现神经缺损症状,平肝熄风汤能明显降低神经缺损症状积分。脑出血大鼠线粒体膜电位于术后4 h显著下降,1 d时膜电位下降达高峰,3,7 d逐步恢复,仍低于正常组和假手术组（P<0.05 ）。平肝熄风汤治疗组在脑出血后1 d,3 d,7 d,线粒体膜电位均明显高于模型组（P<0.05）。结论：大鼠脑出血后线粒体膜电位下降;平肝熄风汤能阻断膜电位下降,同时能减轻出血后神经元损伤。     

痹肿消汤对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜白细胞介素10mRNA的影响

目的 观察痹肿消汤对胶原诱导性关节炎大鼠白细胞介素10（IL-10）mRNA的影响，从基因水平探讨IL-10mRNA在类风湿关节炎的作用及痹肿消汤对类风湿关节炎抗炎作用。方法 将34只大鼠随机分为3组，皮下注射Ⅱ型胶原蛋白配合完全弗氏佐剂诱导类风湿关节炎模型，采用半定量RT—PCR法测定胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞IL-10mRNA的表达。结果 IL-10mRNA在正常组表达少量；25d模型组表达强于正常组（P〈0．05），45d模型组表达弱于正常组（P〈0．05），模型组25d表达高于45d；痹肿消汤组的IL-1 0mRNA表达强于模型组IL-10 mRNA表达（P〈0．05），在痹肿消汤组，45d表达稍高于25d，无统计学意义（P〉0．05）。结论 在胶原诱导性关节炎大鼠中痹肿消汤能增加IL-10 mRNA的表达，提示痹肿消汤在治疗类风湿性关节炎中有免疫调节和抗炎作用，从而达到治疗作用。     

平肝熄风汤治疗脑溢血患者的生活质量观察

４０例急性脑溢血患者采用平肝熄风汤或西药治疗，对其生活质量进行了观察。结果表明：经平肝熄风汤治疗后，患者的ＱＬＩ，认识功能，ＡＤＬ均较治前明显提高；治后１月，３月，６月和１２月，上述各指标较西药组明显提高（Ｐ＜０．０１）。提示平肝熄风汤治疗脑溢血患者，对其ＱＬＩ，认知功能和ＡＤＬ的恢复速度快，疗效明显优于西药组。     

东菱精纯克栓栓对人胃癌及鼻咽癌荷瘤裸鼠转移及血液流变学的影响

目的：观察东菱精纯克栓酶对胃癌及鼻咽癌荷瘤裸鼠转移及血液流变学的影响，方法：用人胃癌及鼻咽癌细胞株分别接种裸鼠背部皮下，同时每周２次裸鼠腹腔内注射东菱纯度栓酶，７０天处死裸鼠，观察裸鼠转移情况及血液流变学变化。结果：东菱精纯克栓酶治疗组肾病人及鼻咽癌荷瘤裸鼠的转移率均明显低于对照组（Ｐ〈０．０１）；胃癌及鼻癌荷瘤裸鼠全血粘度，血浆粘度及红细胞压积低于对照组，差异有显著性意义（Ｐ〈０．０５），结论：     

类风湿关节炎患者外周血单个核细胞蛋白质组学研究

目的 运用蛋白质组学的方法,比较正常人及早期活动性类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMCs)蛋白质的差异表达,寻找RA疾病相关致病蛋白质.方法 选取9例早期活动期RA患者以及9名健康成年志愿者,用淋巴细胞分离液分离PBMCs,抽提PBMCs中的蛋白,采用同相pH梯度(IPG)双向凝胶电泳(2-DE)分离正常人及RA患者PBMCs总蛋白质.凝胶经考马斯亮蓝染色显色后,PDQuest图像分析软件进行比较分析、识别差异表达的蛋白质,对差异蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)进行鉴定,运用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法验证部分差异蛋白质.结果 获得RA患者及正常人PBMCs蛋白质双向凝胶电泳图谱,平均蛋白质点数分别为556和579,匹配率分别为89.4%和 88.5%,通过比较分析,差异表达蛋白质点数为23,选取18个点进行质谱鉴定,成功鉴定14个蛋白质,其中a-肌动蛋白、纤维蛋白素原a-链、载脂蛋白A-I(ApoA-I)等9个蛋白质点在RA中表达上调,硫氧还蛋白-2、谷胱甘肽S-转移酶等6个蛋白质点在RA中表达下调,这些差异蛋白质的功能涉及物质代谢、抗氧化、信号传导、能量产生及细胞骨架.并用RT-PCR方法验证差异蛋白质ApoA-I.其结果与上述蛋白质差异表达结果相符.结论 在RA患者PBMCs中存在着差异表达蛋白质,这些差异蛋白质可能是RA发病的内在因素.其RT-PCR结果与蛋白质差异表达相符,证明蛋白质组研究的可靠性.     

胶原性关节炎大鼠血浆肿瘤坏死因子α和滑膜血管内皮生长因子表达的相关性

背景：类风湿关节炎的滑膜病变具有类肿瘤样生长的特点，表现为滑膜组织的肥厚增生，血管翳形成，对关节周围的组织产生侵蚀和破坏。在滑膜类肿瘤样病变的发展过程中有多种炎性因子和生长因子的参与，其中肿瘤坏死因子α和血管内皮生长因舌对滑膜炎症的发展及滑膜血管翳的形成具有十分重要的作用。 目的：同步观察胶原性关节炎大鼠不同时间点的血浆肿瘤坏死因子α含量与滑膜血管内皮生长因子表达变化，探讨肿瘤坏死因子α和血管内皮生长因子在类风湿关节炎发病机制中的作用及其相关性。 设计：随机分组设计、动物实验。 单位：中南大学湘雅医院中西医结合研究所。 材料：实验于2003—07／1l在中西医结合研究所实验室完成。选择13龄45～50d的SD大鼠40只，随机分为正常对照组10只，胶原性关节炎模型组30只。 方法：采用10mg牛Ⅱ型胶原与5mL完全福氏佐剂研磨后，以每只100μL从大鼠尾根部皮内注射免疫，于2ld后按上述方法和剂量再次重复免疫制作大鼠胶原性关节炎模型。依据关节红肿程度和范围及关节肿大和变形情况进行关节炎指数积分评定，关节炎指数积分越高，关节炎症状越严重。正常对照组于25d断头取血，胶原性关节啖模型组于免疫（造模）后25，30，35，40，45d分别断头取血，采用放射免疫法检测胶原性关节炎大鼠不同时间点的血浆肿瘤坏死因子α含量，同时采用免疫组织化学法检测滑膜组织血管内皮生长因子的表达水平，观察其发病时间与滑膜新生血管形成、关节炎指数积分以及肿瘤坏死因子α和血管内皮生长因子之间关系。用直线相关分析法分析肿瘤坏死因子α与血管内皮生长因子之间的关系，用等级相关分析法分析关节炎指数积分与血管内皮生长因子及肿瘤坏死因子α之间的关系。 主要观察指标：胶原性关节炎发病时间与关节炎指数积分的关系，与血浆肿瘤坏死因子α含量及滑膜血管内皮生长因子表达的关系，胶原性关节炎大鼠血浆肿瘤坏死因子α与滑膜血管内皮生长因子表达相关分析。 结果：纳入动物40只，均进入结果分析。随着胶原性关节炎发病时间的延长，滑膜新生血管逐渐增多、滑膜增厚、关节炎指数积分逐渐增加、肿瘤坏死因子α含量和血管内皮生长因子水平也随之升高；其关节炎指数积分与血管内皮生长因子表达水平呈正相关（r=０．535，P〈0．05），与肿瘤坏死因子α含量虽有相关增高趋势，但差异无显著性（r=０．37l，P〉0．05）。血浆肿瘤坏死因子α含量与血管内皮生长因子表达水平呈显著正相关（r=０．893，P〈0．01）。 结论：肿瘤坏死因子α与血管内皮生长因子在类风湿关节炎炎症反应，滑膜新生血管形成的细胞因子网络中起重要作用，二者相互可能具有影响，相互促进，充当恶性网络循环的调控作用；是介导类风湿关节炎发生和发展以及骨质侵蚀、致残的众多因子中的关键因子。