核酸扩增技术在献血者血液HBV DNA、HCV RNA及HIV-1 RNA筛查中的应用研究

目的探讨在我国无偿献血者的血液筛查中引进核酸扩增技术(NAT)的必要性,了解献血者血清学病毒标志物检测阴性、NAT检测阳性的感染状况。方法应用Roche PCR、PCR-微流芯片、实时荧光PCR方法对深圳市131 174人(次)血清学检测病毒标志物阴性的献血者进行HBV DNA、HCV RNA和HIV-1 RNA检测,对NAT阳性献血者追踪检测并做定量分析。结果HBV DNA阳性22例,阳性率为1/5 962,其中15例为抗-HBc阳性,阳性率为1/8 745;HCV RNA阳性1例,阳性率1/131 174;HIV-1 RNA未检出阳性。对14名HBV DNA阳性者的追踪发现,8人发生了血清转换现象。结论采用高灵敏度的NAT筛查献血者血液中的HBV和HCV,有助于提高输血及血液安全。     

深圳地区献血人群弓形虫感染的血清学调查研究

目的了解深圳地区献血人群中弓形虫感染和分布情况。为医疗安全用血提供科学依据。方法采用酶联法(ELISA)检测标本血清中弓形虫的IgG、IgM，初筛检测阳性，复查仍为阳性，判断为阳性。结果对随机抽取的680例无偿献血者进行检测，检出IgG阳性为49例，IgG阳性率为7．21％；IgM阳性2例，IgM阳性率为0．29％。其中18～30岁、31．40岁、41．55岁IgG阳性率分剐为5．91％、7．04％和9．26％；在校大学生、外来打工人员、家庭妇女、公务员及企业职员阳性率分别为6．57％、6．98％、11．2％和6．12％；男性、女性IgG阳性率分别为7．6％、6．62％o结论献血者人群中弓形虫感染率随着年龄的增长有增高的趋势；家庭妇女组的阳性率高于其他3组人群；男女人群的阳性率差异无显著性。对于感染弓形虫的献血者存在潜在的输血传播该病的可能性应起重视。     

血液乙型肝炎核酸筛查质量控制方法的研究

目的研究核酸检测技术(nucleic acid testing,NAT)用于血液乙型肝炎筛查的质量控制方法的建立和应用。方法通过平行测定厂家提供的质控品20份,用即刻法分析其的循环数(x-±2s)和变异系数(CV,%);以质控品循环数在-x±2s范围内为质量控制标准,在同等条件下,检测180份同一批号质控品的循环数,并进行分析。结果实验期间共用3批试剂,更换试剂批号重新即刻法质控。质控品的x-±2s和CV分别为32.1±1.9,5.92%;31.8±2.8,8.8%;31.7±2.6,8.2%。在此质控标准下,检测同一批号质控品180份,177次检测结果在控,3次检测结果失控。室间质评结果与靶值完全一致。结论用定值的质控品控制实验室的乙型肝炎病毒NAT检测结果,可以排除因人员更换等实验条件的差异所导致的误差,使实验室间乙型肝炎病毒NAT结果准确可靠。     

抗-HCVELISAS/CO比值与确证试验阳性的相关性探讨

目的探讨抗-HCVELISAS/CO比值与抗-HCV免疫印迹法（RIBA）确证试验阳性的相关性。方法分别采用进口和国产试剂同时筛查34504例无偿献血者血液,结果有反应性标本用RIBA确证试剂进行确证,分析两种ELISA试剂有反应性S/CO阈值及其对确证试验阳性结果的预测率。结果 34504例标本中抗-HCV有反应性92例。国产试剂筛查出有反应性57例,经RIBA确证阳性30例,其中S/CO≥10.0的RIBA确证阳性率96.70%（29/30）明显高于S/CO〈10.0的3.70%（1/27）,两者差异有统计学意义（χ2=45.60,P〈0.0001）;进口试剂有反应性71例,经RIBA确证阳性31例,其中S/CO≥4.0的RIBA确证阳性率96.80%（30/31）明显高于S/CO〈4.0的2.50%（1/40）,两者差异有统计学意义（χ2=60.36,P〈0.0001）。两种试剂同时有反应性标本36例,经RIBA确证阳性30例。结论抗-HCVELISAS/CO比值与确证试验阳性有一定的相关性,通过S/CO比值可以预测抗-HCV阳性。     

2006～2008年深圳市无偿捐血人群梅毒抗体阳性率回顾性调查研究

目的了解深圳市无偿捐血者近年来梅毒感染状况,控制梅毒经血液传播,降低输血风险,为捐血者的招募提供参考依据。方法用梅毒甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)及酶联免疫吸附试验(ELISA)对捐血者进行梅毒抗体筛查,阳性者用梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)确认。对数据进行分析,找出保障安全输血的有效措施。结果 2006～2008年深圳市筛查无偿捐血者共156 652例,经TPPA确证梅毒抗体阳性626例,梅毒抗体阳性率为0.40%。2006年、2007年、2008年阳性率分别为0.43%、0.40%、0.38%,呈逐年下降趋势,在年龄、职业、学历和捐血次数分布上存在显著性差异。结论梅毒抗体阳性率在深圳市捐血人群中呈逐年下降趋势,年龄、职业、学历、捐血次数与梅毒抗体阳性率有关。     

实时荧光PCR检测HBsAg阴性、抗HBc阳性献血者血液中HBV DNA研究

目的对乙型肝炎表面抗原（HBsAg）阴性、乙型肝炎核心抗体（抗HBc）阳性的献血者血液进行经输血传播乙型肝炎病毒（HBV）的风险评估,为完善HBV血液筛查模式及确保临床用血安全提供依据。方法对献血者血液常规检测阴性的标本进行8×45 μL汇集,应用实时荧光聚合酶链反应(PCR)进行混样核酸检测HBV DNA。对血液常规筛查和混样核酸检测合格的标本,进行随机乙型肝炎血清学5项标志物的酶联免疫吸附试验(ELISA)。对获得的HBsAg阴性、混样HBV DNA阴性、抗HBc阳性的标本,进一步采用单份样本（720 μL）实时荧光PCR法检测并定量分析。结果混样标本共检测12 552份,检出HBsAg阴性、HBV DNA阳性标本2份,阳性率为0.02%。随机筛查混样核酸检测阴性标本614份,检出抗HBc阳性标本320份,对此320份标本进行单份核酸检测,检出阳性标本1份,阳性率为0.31%。结论HBsAg阴性、抗HBc阳性献血者血液存在输血传播HBV的风险,应用核酸扩增技术检测血液HBV DNA能大大提高血液安全性。     

深圳市献血人群丙肝感染现状分析

目的 大力宣传无偿献血,提倡低危献血人群定期献血和加强采血前筛查,降低抗-HCV的阳性率。有效地提高血源质量,降低输血风险。方法 通过对不同献血人群中抗-HCV的阳性率的比较分析,找出降低输血风险的有效方法。结果 检测表明,深圳市献血人群抗-HCV的阳性率从1996年的2．67％降到2003年0．25％,低于全国平均水平。经过采血前筛查和提高无偿献血员定期、多次献血比例,深圳市无偿献血人群抗-HCV阳性率逐年下降。结论 无偿献血可降低人群丙肝感染率。     

酶标仪快速检测Rh-D阴性血型的方法研究

目的建立一套快速、高效的Rh D阴性血型鉴定方法,用于血站系统大批量Rh D定型实验,以便达到快速、准确、高效检测的目的。方法采用全自动样品处理仪完成对待检红细胞的稀释、分配及加入抗D试剂的全过程。采用酶标仪在620nm波长条件下进行批量比色判读结果。结果利用酶标仪快速检测,在血球稀释浓度为1∶8、Rh检测试剂稀释度为1∶16时,对13800份标本进行检测,结果符合率为100%。结论酶标仪快速检测Rh D阴性血型的方法操作简单、快捷,精确性、重复性较好,对于减少血站系统检验人员工作强度、提高工作质量有较大帮助。     

核酸检测阳性标本与酶联免疫吸附试验分析研究

目的为了提高临床输血的安全性,拟比较血液筛查核酸检测(NAT)阳性标本结果与酶联免疫吸附试验(ELISA)数据分析,旨在研究探讨如何提高ELSIA检测技术在血液筛查中的灵敏度。方法对55 499例常规ELISA检测非反应性的无偿献血者血样标本,其各项指标均正常的标本,用NAT检测技术8例混合检测,从中比较NAT检测阳性与酶联免疫吸附试验结果。结果血清学检测非反应性标本中11例HBV DNA阳性标本,1例HCV RNA阳性标本,HIV RNA未检出。结论 NAT与ELISA的血液筛查检测互补作用主要体现在3个方面:1)窗口期漏检是目前ELISA漏检的最大因素。2)免疫静默感染、病毒变异、病毒亚型对以抗原-抗体免疫反应技术基础的ELISA方法会降低ELISA检测性能。3)ELISA检测"灰区"的设置在理论上可以减少因试剂检测灵敏度而造成的漏检现象,但仍无法解决因病毒变异、病毒亚型和因"窗口期"而造成的漏检现象。     

深圳市无偿献血人群梅毒感染现状分析

目的了解深圳市无偿献血者梅毒感染现状,为安全输血招募低危无偿献血者提供科学的理论依据。方法用甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)及酶联免疫吸附试验(ELISA)对献血者进行梅毒抗体筛检,阳性者用梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)确认。同时比较不同时间、年龄、性别、文化程度及职业分布上的感染率,找出降低输血风险的有效方法。结果深圳市2000~2004年220218名无偿献血者的梅毒感染率为5.60‰,呈逐年上升趋势,以31~50岁年龄段感染率较高(P<0.005),商务和外来劳务工的梅毒感染率远高于其他职业人群。结论梅毒在深圳市呈一定的流行势态,应建立一支固定的志愿无偿献血者队伍,提高试剂的灵敏度和特异性,切实做好无偿献血者梅毒血清筛查工作,进一步确保输血安全。