腹腔镜胆囊切除术中出血原因的分析与处理

目的:探讨腹腔镜胆囊切除术(LC)术中出血的原因与处理方法。方法:回顾性分析重庆医科大学附二院2004年12月~2006年3月所行LC术中出血的112例临床资料,总结探讨LC术中出血的原因与处理方法。结果:LC术中出血的原因有主观的和客观的因素,112例患者中5例中转开腹止血,余经重新施夹,电凝,缝扎,止血海绵填塞压迫,纱布压迫止血,肝镰状韧带悬吊等方法,成功地控制了出血。结论:术中出血是LC术中严重且最常见的并发症,分析出血的原因及相应措施,提出预防措施5条。     

二期股薄肌移植肛门成形术48例分析

低位直肠癌行Miles根治术后,临床可采用各种肌肉的移植肛门括约肌成形术实现原位肛门重建,股薄肌移植肛门括约肌成形术即为其中常用术式之一.我院自1985～2000年在直肠癌根治会阴部造瘘的基础上,采用二期股薄肌移植肛门括约肌成形术48例,疗效满意,现总结报告如下. 1 临床资料 1.1 一般情况本组男30例,女18例;最大年龄74岁,最小年龄28岁,平均年龄49.4± 6.7岁.     

七年制临床医学研究性教学中导师的素质和职能

七年制教育属于精英教育的范畴,早期实施研究性教学方法在缩短培养时间的同时提高了教育质量。导师应在研究性教学各阶段对学生进行全面指导,为培养学生的开发性研究能力打下基础。导师应具备良好的自身素质,在思想品德、治学态度、为人处事等方面成为学生的楷模。     

枯否细胞在昆明小鼠实验性肝癌发生中的作用及机制

【目的】研究枯否细胞（KCs）与肝细胞癌（HCC）发生发展的相关性。【方法】60只昆明小鼠,分成三组：GdCl3预处理组（A组）;肝癌组（B组）;正常对照组（C组）。绘制Kaplan-Meier生存曲线比较各组生存期;光镜下观察肿瘤组织生长情况,免疫组织化学染色鉴定肝脏及肿瘤组织KCs并观察其分布范围和及计数。【结果】①生存曲线显示：A,B组生存时间逐渐缩短,且差异具有显著性（P〈0．05）。②H22肿瘤细胞接种3周后,肉眼观察A组癌灶的体积明显大于B组,差异具有显著性（P〈0．05）。③HE染色显示光镜下可见三组病理组织学变化差异显著。④A组、B组的癌旁肝组织及远癌肝组织的KCs数量较C组明显增加（P〈0．01）,但两组之间差异无显著性（P〉0．05）。⑤A、B及C组各组小鼠血清TNF-α水平有显著性差异（P〈0．01）;【结论】KCs有保护肝细胞、抑制其恶性转化的功能。     

内毒素血症时大鼠脂多糖结合蛋白的变化及其意义

目的　探讨内毒素血症时大鼠肝组织中脂多糖结合蛋白mRNA的表达、血浆中脂多糖结合蛋白 (LBP)含量的变化及其意义。方法　经大鼠尾静脉注入内毒素 (5mg/kg)建立内毒素血症动物模型 ,检测不同时点模型鼠肝组织中LBPmRNA的表达 ,同时检测血浆中LBP、内毒素、TNF α及IL 6含量的变化 ,并与对照组相比较。另取肝组织在电镜下观察其病理学改变。结果　随着内毒素血症时间的延长 ,内毒素组大鼠肝组织LBPmRNA的表达明显增强 ,血浆中LBP、TNF α和IL 6含量也明显增加 ,与对照组比较差异有高度显著性 (P<0 .0 1)。电镜观察见肝细胞脂肪变 ,线粒体空化 ,枯否氏细胞数量增多、体积增大、吞噬功能增强。结论　内毒素血症时 ,大鼠肝组织中LBPmRNA表达明显增强 ,血浆中LBP含量也明显增加。由此提示 ,增高的LBP可能在脂多糖介导的枯否氏细胞激活及产生、释放各种炎性介质中可能起了重要作用。     

过表达RIP140的肿瘤相关巨噬细胞抑制肝癌细胞的侵袭和增殖

目的探讨肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）中RIP140 的表达对肝癌细胞侵袭、增殖的影响。方法慢病毒介导小鼠腹腔巨 噬细胞（PMs）RIP140 的过表达,Western blot 和Real-time PCR（qRT-PCR）分别检测PMs中RIP140 蛋白以及核酸表达水平, 流式细胞仪分析慢病毒转染率;Western blot、细胞免疫荧光和qRT-PCR 检测肝癌条件培养基（HCM）刺激PMs 后TAMs中 RIP140 的表达变化;HCM刺激PMs以及HCM刺激过表达RIP140 的PMs,qRT-PCR检测TAMs极化指标以及NF-κB和IL-6 的表达;Transwell 实验和细胞流式凋亡实验检测肝癌细胞的侵袭和凋亡;肝癌细胞和PMs以4∶1 比例注射于BALB/c裸鼠皮 下,建立裸鼠皮下肝癌模型,成瘤癌组织HE染色和免疫组化评定肝癌组织大体生长情况和肝癌细胞增殖能力。结果慢病 毒介导PMs RIP140 的过表达,病毒转染效率高,RIP140 过表达明显;HCM刺激PMs后,TAMs中RIP140 呈低表达;HCM诱 导TAMs呈M2 型极化,并且与肿瘤生长密切相关的NF-κB-IL-6 轴处于活化状态;TAMs可促进肝癌细胞侵袭和增殖,抑制 肝癌细胞凋亡。TAMs过表达RIP140 可抑制HCM介导的TAMs M2 型极化并抑制NF-κB/IL-6 通路的激活,减少IL-6 的释 放;除此之外,TAMs过表达RIP140 可抑制肝癌细胞的侵袭和增殖,促进肝癌细胞的凋亡。结论过表达RIP140 的TAMs可 抑制肝癌细胞的侵袭和增殖。其机制可能与TAMs过表达RIP140后抑制TAMs M2型极化有关。     

内毒素预处理诱导大鼠供肝缺血再灌注交叉耐受机制的研究

目的探讨以内毒素耐受为基础诱导的移植肝脏对缺血再灌注损害（I／RI）交叉耐受的相关机制。方法雄性SD大鼠，随机分为正常对照组、缺血再灌注组（I／R组）和内毒素耐受组（ET组）。以未经任何处理的大鼠肝脏为正常对照；ET组供体第1天经尾静脉给予脂多糖0.1mg／kg体重，第2、3、4、5天给予0.5mg／kg体重；I／R组供体给予等体积0．5ml无菌PBS液。第8天，切取供体，以未经任何处理的大鼠为受体，两袖套法建立大鼠原位肝移植模型。按门静脉血流恢复后第0、60及180min分为3个亚组。逆转录-聚合酶链式反应及蛋白免疫印记法测定肝组织的白细胞介素-1受体相关激酶-4（IRAK-4）mRNA和蛋白表达水平；酶连免疫吸附法检测肝组织核因子-κB出（NF-κB）活性及血清TNF-α含量。结果再灌注后0、60及180rain．I／R组与ET组的IRAK-4蛋白与mRNA表达水平，NF-κB活性以及TNF-α含量均高于正常对照组（P〈0．01）；再灌注后0min，I／R组与ET组的NF-κB活性以及TNF-α含量差异无统计学意义（P〉0．05），但IRAK-4蛋白与mRNA表达水平高于ET组（P〈0．01）；再灌注60min及180min，I／R组的上述各指标均明显高于后者（P〈0．01）。结论抑制IRAK-4表达是以内毒素耐受为基础诱导的移植肝脏对I／RI交叉耐受的相关原因，但能否以IRAK-4为减轻I／RI基因治疗的理想靶点尚有待进一步的研究。     

猪原位肝移植体外静脉转流中门脉系统插管的选择

目的比较在猪原位肝移植体外静脉转流中行门静脉插管或脾静脉插管对血流动力学的影响。方法选健康美国杜洛克猪60头，配对施行原位肝移植术，根据术中转流时门脉系统插管的不同．随机分为两组．即门静脉插管组(n=15)和脾静脉插管组(n=15)。术中连续监测两组动物血流动力学指标的变化。结果门静脉插管组15例中死亡2例．其中1例死于术中转流不畅，1例死于DIC；脾静脉插管组15例中死亡1例，死于失血性休克。脾静脉插管组无肝期为(44．5土7．6)min，明显短于门静脉插管组的(51．5土8．7)minoⅢ、Ⅳ期门静脉插管组血流动力学改变与脾静脉插管组相比差异有显著性意义(P＜O．05)。结论在猪原位肝移植体外静脉转流中采用脾静脉插管转流能缩短无肝期，保持术中血流动力学的相对稳定，减少术后相关并发症的发生，是一种有效的静脉转流途径。     

阻断内毒素胞内信号转导通路对大鼠移植肝脏再灌注损伤的影响

目的 探讨以白细胞介素-1受体相关激酶-4（IRAK-4）为靶点,阻断内毒素胞内信号转导后对大鼠移植肝脏再灌注损伤（I／RI）的影响并探索肝移植时可行的RNA干扰（RNAi）治疗途径。方法 两袖套法建立SD大鼠同种异体原位肝移植模型,随机分为冷缺血转染组、活体转染组及对照组。冷缺血转染组于冷缺血期经门静脉灌注转染携带IRAK-4-shRNA的质粒pSIIRAK-4;活体转染组在门静脉袖套吻合完成后,经门静脉分支注入pSIIRAK-4;对照组不予任何处理。按门静脉血流恢复后第0min、60min及180min分为三个亚组,RT—PCR及Western—blot测定肝组织的IRAK-4mRNA和蛋白表达水平;ELISA法测定受体血清TNF-α含量。采用TUNEL法检测肝细胞凋亡状态,透射电镜观察肝组织超微结构的病理形态学变化。结果 再灌注后冷缺血转染组的IRAK-4表达明显低于同时点的活体转染组及对照组（P〈0．01）;同时,肝细胞凋亡指数、血清TNF-α含量及肝细胞、血窦内皮细胞损伤程度也明显低于后者。结论 以IRAK-4为靶点的冷缺血期shRNAs转染途径能有效阻断内毒素胞内信号转导,进而减轻肝移植时的I／RI程度。     

偶联 CD206 抗体载 Fe3O4的 PLGA 纳米微球促进巨噬细胞 M1型极化

目的 通过构建纳米微球靶向性地提高巨噬细胞中的铁浓度来增强抗肿瘤免疫。方法 采用W/O/W复乳化溶剂扩散法制备CD206单克隆抗体表面修饰的载Fe3O4聚乳酸羟基乙酸（PLGA）纳米微球。使用马尔文粒径检测仪测定微粒直径,Zeta电位 法测定Zeta电位。用铁测定试剂盒测定Fe3O4的包封率。采用免疫荧光实验检测CD206抗体与巨噬细胞的结合及靶向性。Western blot、qRT-PCR检测巨噬细胞的极化指数。并用BALB/C-57小鼠皮下肿瘤模型验证纳米微球促进肿瘤相关巨噬细胞（TAM）的极化状态。结果 纳米微球的平均直径在260~95 nm范围内,Zeta电位值在-19~-33 MV。Fe3O4的包封率在65%~75%。流式细胞术检测CD206单克隆抗体与PLGA微球偶联率为65%~70%,免疫荧光实验证实了PLGA微球与CD206高表达巨噬细胞的靶向结合能力。Western blot和qRT-PCR证实了偶联CD206抗体载Fe3O4的PLGA纳米微球（CD206-Fe3O4-PLGA）和载Fe3O4的PLGA纳米微球（Fe3O4-PLGA）促进TNF-α、iNOS和IL-1β的表达（P<0.05）。小鼠肿瘤模型研究证实CD206-Fe3O4-PLGA纳米颗粒促进TAMs中CD86的表达。结论 PLGA纳米微球具有均匀的粒子的大小及Zeta电位,以及较好的抗体偶联效率及纳米铁包封率,同时偶联CD206的PLGA微球能够较好的靶向结M2型巨噬细胞,并通过释放包被的Fe3O4促进巨噬细胞的M1型极化。本研究为肿瘤的免疫治疗提供了一种潜在的方法。