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目的研制一种用于检测口腔常见无芽胞厌氧性细菌感染的基因芯片。方法选择口腔感染中常见的无芽胞厌氧性细菌作为菌种,将16S rDNA作为靶基因。借助生物信息学方法,设计通用引物和特异性探针,选择与反义引物互补的核酸序列作为阳性质控探针;大肠杆菌16S rDNA基因序列为阴性质控探针,制备微阵列。进行厌氧性细菌DNA的提取、扩增、杂交、结果分析以及微阵列质量检测。结果制备的用于检测口腔常见无芽胞厌氧菌感染的基因芯片特异性、灵敏度、重现性和稳定性均符合实验要求。结论利用生物信息学方法设计的引物和探针合理,制备的芯片可用于口腔常见无芽胞厌氧性细菌感染的诊断。 相似文献
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HPV16 L1-E7蛋白疫苗诱导小鼠产生抗体及细胞免疫应答的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:探讨嵌合性病毒样颗粒HPV16 L1-E7蛋白疫苗接种于动物体内诱发体液和细胞免疫反应的能力。方法:以本室构建的HPV16 L1-E7嵌合蛋白疫苗腹腔注射免疫BALB/c小鼠,在初次免疫后,分别于第3,4,5周采血ELISA检测特异性抗体的产生。并耳皮下注射HPV16L1蛋白,检测特异性DHT反应,在末次免疫2周后,取小鼠脾细胞,用HPV 16 L1-E7蛋白刺激,检测T细胞增殖反应及血清IFN-γ水平。结果:HPV16 L1-E7蛋白疫苗免疫小鼠可有效产生HPV16 L1抗体及特异性DTH反应,加强免疫后,抗体水平升高,两者水平均高于对照组(P<0.01),HPV16 L1-E7嵌合蛋白疫苗免疫后取小鼠脾细胞,在特异性HPV16 L1-E7蛋白抗原刺激下,特异性T淋巴细胞明显增殖,被免疫小鼠血清中出现高水平IFN-γ。结论:嵌合母亲产颗粒HPV16 L1-E7蛋白可诱导小鼠产生高滴度抗体,HPV16L1特异性TDH参与的超敏反应及细胞免疫应答的细胞因子,这为研究预防HPV感染和治疗HPV相关性肿瘤的疫苗提供了实验资料。 相似文献
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HPV16L1-E7重组腺病毒载体疫苗免疫BALB/c小鼠的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:探讨人乳头瘤病毒16型L1-E7重组腺病毒载体疫苗的免疫效应。方法:①将rAd5HPV16L1-E7载体疫苗在293细胞中扩增后,以肌肉注射、腹腔注射、滴鼻和灌胃途径免疫小鼠,采用ELISA法测其血清IgG抗体水平;②制备脾细胞悬液,加入到96孔无菌培养板中,并分别加入rAd5HPV16L1-E7特异性蛋白和RPMI1640 10%胎牛血清,加入3H-TdR1μCi/孔,做T-细胞增殖实验;③取经过培养56h的培养液进行IFN-γ的测定。结果:不同途径免疫的BALB/c小鼠血清IgG抗体水平均高于对照组(P<0.05),但以肌注组产生抗体量最多,IFN-γ和T-细胞增殖亦高于对照组(P<0.05)。结论:rAd5HPV16L1-E7重组活病毒疫苗既能刺激T-细胞产生细胞介导的免疫应答,又能刺激B-细胞产生抗体介导的免疫应答,说明其具有很好的免疫原性。 相似文献
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为研究人乳头瘤病毒16和18型(HPV16和HPV18)感染及p53基因突变与肺癌的关系,应用经病理学证实的肺癌活组织,行聚合酶链反应(PCR)检测癌组织中的HPV16、HPV18;并用LSAB免疫组化法检测相应蜡块标本中p53蛋白的过度表达。在48例肺癌组织标本中未检出HPV16、HPV18;p53蛋白表达呈阳性,阳性率为54.2%(26/48),其中鳞癌66.7%(18/27),腺癌57.1(4/7),小细胞癌33.3%(1/3),大细胞癌33.3%(2/6),类癌20.0%(1/5)。提示肺癌的发生可能与HPV16、HPV18感染无关,而与p53基因突变有关,尤以与鳞癌和腺癌关系密切 相似文献
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小鼠对HPV16L1-E7重组腺病毒和重组质粒的免疫应答 总被引:1,自引:1,他引:1
对比研究人乳头瘤病毒16型L1-E7重组腺病毒(rAd5HPV16L1-E7)和重组质粒经不同途径免疫小鼠所产生的免疫效应.将rAd5HPV16L1-E7病毒在293细胞中扩增,并制备rAd5HPV16L1-E7重组质粒,分别以肌肉注射、滴鼻途径免疫小鼠,采用ELISA法测其血清IgG抗体水平;制备脾细胞悬液,加入到96孔无菌培养板中,分别加入rAd5HPV16L1-E7特异性蛋白和10%FCS RPMI1640,加入3H-TdR 1μCi/孔,做T-细胞增殖实验;取经过培养56 h的培养液进行IFN-γ的测定.不同疫苗和不同途径免疫的BALB/c小鼠血清IgG抗体水平均高于对照组小鼠(P<0.05),IFN-γ和T-细胞增殖亦高于对照组(P<0.05),且各实验组中病毒特异性蛋白刺激组均高于非刺激组(P<0.05).提示rAd5HPV16L1-E7重组质粒和rAd5HPV16L1-E7重组活病毒一样既能刺激T-细胞产生细胞免疫应答,又能刺激B-细胞产生体液免疫应答,说明其具有很好的免疫原性,是一种很有发展前景的防治疫苗. 相似文献
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近一个时期肺结核的发病率有上升趋势,为了引起人们的重视和防范意识,加大防治力度,将所在3处医院1998年8月至1999年8月临床疑似肺结核的病人痰液进行涂片与培养,检查结核杆菌。1 对象与方法11 对象 1998年8月至1999年8月,以所在3处医院门诊和住院治疗的1286例可疑肺结核病人为对象。年龄14~79岁,男性762例,女性524例。12 方法 每天收集病人晨痰,连续3d,按刘恭植主编《微生物学和微生物学检验》方法涂片,抗酸染色,镜检结核杆菌,找到红色小杆菌为阳性。同时将痰液按常规方法处理,接种于酸性营养培养基,进行结核杆菌的分离培养[1]。2 … 相似文献
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目的 建立SCID HuIC小鼠动物模型和HPV16阳性肿瘤联合嵌合模型 ,研究HPV16L1 E7重组腺病毒在SCID HuIC小鼠和肿瘤联合嵌合模型中的防治作用。方法 ①实验组SCID小鼠移植人胎儿多组织 ,对照组注射RPMI 16 4 0培养液 ,8周末检测人IgG抗体 ,人CD4 5、CD3、CD19;②T1和C1组先注射HPV16L1 E7重组腺病毒 ,2周末强化 ,4周末接种CaSki细胞 ;T2和C2组先接种CaSki细胞 ,4周末注射HPV16L1 E7重组腺病毒 ,6周末强化。 8周末检测病毒特异性IgG抗体、人IFN γ及T淋巴细胞增殖 ,测定肿瘤的物理指标以及免疫组化实验。结果 ①实验组人IgG抗体阳性率 90 .0 % (18/ 2 0 ) ,CD4 5为 (49.79± 39.18) % ;CD3为 (42 .2 7± 36 .37) % ;CD19为 (9.2 8±7.4 6 ) % ,对照组人IgG抗体、人CD4 5、CD3及CD19均为阴性 ;②T1和T2组病毒特异性IgG抗体均为阳性、人IFN γ的含量和T淋巴细胞增殖实验 ,病毒特异性蛋白刺激组均高于非刺激组 (P <0 .0 5 ) ,C1和C2组病毒特异性IgG抗体为阴性、人IFN γ的含量及T淋巴细胞增殖均为阴性 ;肿瘤形成率 :T1和T2组分别为 0和 70 .0 % (7/ 10 ) ,而C1和C2组均为 10 0 % ;肿瘤大小 :T2组在 4周末时为 (4.35 5±0 .387)mm3 ,8周末为 (10 2 8± 90 .96 )mm3 ,C2组在 4周末时为 (32 .75± 6 .717)mm3 相似文献
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目的研究体外诱导培养外周血来源内皮前体细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)的可行性并检测其表型和功能。方法用密度梯度离心法从人外周血中分离单个核细胞。在加有胎牛血清(fetal blood serum,FBS)、血管内皮生长因子(vascular end othelial growthfactor,VEGF)和碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growthfactor,bFGF)的M199培养液中培养。用流式细胞仪检测其表面标志CD34和KDR的表达情况。通过荆豆凝集素-1(ulex europaeus agglutinin-1,UEA-1)结合试验和乙酰化低密度脂蛋白(acetylatedlowdensitylipoprotein,acLDL)吞噬试验确定其内皮细胞功能。结果培养过程中可观察到典型的内皮细胞。培养7天后,粘附细胞表达CD34和KDR,阳性率分别为29.5%±9.9%和33.8%±9.2%。粘附细胞的UEA-1结合试验和acLDL吞噬试验均为阳性。结论从成人外周血中可分离到EPCs,并能在体外增殖分化为内皮细胞。体外培养是获得EPCs移植和体外组织工程技术所需要的足够EPCs数量的一条途径。 相似文献
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目的探讨用于PCR扩增产物快速高效的克隆技术.方法为制备T载体,用SmaI消化质粒pUC18成纯末端,纯化后与TaqDNA聚合酶及dTTP,75℃反应2h,构建成加上T尾的线性pUC18载体.将由质粒pBR322-HPV16中PCR扩增获得早期蛋白E6的基因扩增产物,根据TA克隆策略克隆至pUC18-T载体中,经PCR、限制性酶切分析鉴定重组子,并对TA克隆连接条件做了探讨.结果获得重组质粒pUC18-E6.结论TA克隆采用低温延时连接,阳性克隆率高,是高效、快速的PCR产物克隆. 相似文献
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目的探讨聚合酶链式反应(PCR)检测口腔厌氧茼的优势。方法培养方法对口腔厌氧菌的培养与鉴定分析;PCR方法扩增口腔厌氧菌16SrDNA序列和七种厌氧菌特异性序列;同时采用厌氧菌标准菌株作对照。结果PCR和培养方法具有相同的厌氧菌检出率,均为100%(标准菌株为5/5,标本为18/18);PCR和培养方法具有不同的鉴定准确率,标准菌株分别为100%(5/5)和40%(2/5);标本PCR为66.7%(12/18)培养方法不易界定;两种方法鉴定结果一致率低,只有5.6%(1/18)。结论PCR在口腔厌氧菌检出和鉴定方面明显优于培养方法。 相似文献